全 文 ：·34· Chinese Journal of Information on TCM Nov.2010 Vol.17 No.11
地锦草有效部位对真菌琥珀酸脱氢酶
活性的影响
古力娜·达吾提 1,安惠霞 2,斯拉甫·艾白 1,3,李治建 3
(1.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院,新疆 乌鲁木齐 830049；2.新疆石河子大学药学院,新疆 石河子 832000；
3.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所,新疆 乌鲁木齐 830049)
摘要：目的 初步研究维吾尔药材地锦草有效部位体外抗真菌作用,研究地锦草有效部位对红色毛癣菌琥珀酸脱
氢酶活性的影响,探讨其抗真菌作用机制。方法 地锦草醇提物经大孔吸附树脂分离得 6个洗脱部位,分别为部位一、
部位二、部位三、部位四、部位五及部位六；采用微量液基稀释法测定各部位体外最低抑菌浓度(MIC)值,确定其最
有效部位和敏感菌株；药物干预毛癣菌后分离菌体,按试剂盒要求处理样品,利用硫酸甲酯吩嗪(PMS)反应法,测定地
锦草有效部位对红色毛癣菌琥珀酸脱氢酶活性的作用。结果 地锦草各洗脱部位中,部位六的抗真菌活性最为显著,
其对红色毛癣菌(T.rubrum)的平均 MIC 为 149 µg/mL,对石膏样毛癣菌(T.mentagrophytes)的平均 MIC 为 149 µg/mL,
对其他皮肤癣菌平均 MIC 为 192 µg/mL,对 4 种念珠菌的平均 MIC 均为 416 µg/mL。不同浓度的地锦草有效部位均可
降低红色毛癣菌琥珀酸脱氢酶活性(P＜0.01)。结论 地锦草不同提取部位对试验菌株的生长均具有抑制作用,其中
部位六尤为显著,对浅部致病真菌有较强的抑制作用,定为有效部位。地锦草有效部位抗真菌机制可能与抑制琥珀酸
脱氢酶的活性有关。
关键词：地锦草；有效部位；抗真菌；红色毛癣菌；琥珀酸脱氢酶
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2010.11.014
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)11-0034-02
Effect of Active Component of Euphorbia Humifusa on SDH of Trichophyton rubrum Gulinar Dawuti1,
AN Hui-xia2, Silafu Aibai1,3, et al (1.Xinjiang Uighur Medical Hospital, Urumqi 830049, China；2.Shihezi University,
Shihezi 832000, China；3.Institute of Xinjiang Uighur Medicine, Urumqi 830049, China)
Abstract：Objective：To study the antifungal activity of different extraction fractions from Euphorbia
humifusa in vitro, and study the effect of active component of Euphorbia humifusa on SDH of T. rubrum.
Methods Six extraction fractions of Euphorbia humifusa were obtained by eluting the original extraction
with macroporous resin column using gradient elution separation method and were assayed with
micro-broth dilution technique in order to determine their minimum inhibitory concentrations against 24
sensitive strains. T. rubrum was treated with active component of Euphorbia humifusa, and the effects on
SDH activity in T. rubrum was studied by PMS test. Results All of the six extraction fractions from
Euphorbia humifusa showed antifungal activity in vitro. MIC of fraction Ⅵ was 149 µg/mL. On T. rubrum,
149 µg/mL on T. mentagrophytes, 192 µg/mL on other dermatophytes, and 416 µg/mL on 4 kinds of
candida. The PMS test results showed that squalene epoxidase activity decreased significantly (P＜0.01) in
T. rubrum when the concentration of active component of Euphorbia humifusa was in a does dependent
manner. Conclusion Active component of Euphorbia humifusa has significant antifungal activity, and the
fraction Ⅵ of Euphorbia humifusa was seem as the active component of Euphorbia humifusa. The
antifungal mechanism may be related to its inhibition on SDH activity.
Key words：Euphorbia humifusa；active component；antifungal；Trichophyton rubrum；SDH
地锦草为大戟科植物 Euphorbia humifusa Willd.或斑地
锦 Euphorbia maculata L.的干燥全草,是维吾尔医常用药材,
临床主要用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣及银屑病等[1]。
红色毛癣菌(T.rubrum)是临床常见的皮肤癣菌,也是浅部真菌

基金项目：国家科技支撑计划资助(2007BAI30B03)；国家自然
科学基金(30760308)
病的主要病原菌,其中 69.5%的皮肤癣菌病是由红色毛癣菌感
染所致[2-4]。本实验将地锦草醇提物经大孔吸附树脂分离成 6
个部位,采用微量液基稀释法测定各部位体外最低抑菌浓度
(MIC)值,确定其有效部位和敏感菌株。为了探讨地锦草有效部
位抗皮肤癣菌的作用机制,本实验研究了地锦草有效部位对红
色毛癣菌琥珀酸脱氢酶(SDH)的影响,为地锦草的开发利用提
供实验依据。
2010 年 11 月第 17 卷第 11 期 中国中医药信息杂志 ·35·
1 实验材料
1.1 药物
受试物地锦草药材由新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究
所药剂室提供,经生药学鉴定为大戟科植物地锦 Euphorbia
humifusa Willd.。
取地锦草全草,加 70%乙醇回流提取,滤过,合并醇提液,
减压回收至无醇味,离心,滤过,上清液上样于大孔吸附树脂柱,
水-乙醇梯度洗脱,收集梯度洗脱部位,TLC 检识,合并流份,得
到 6 个洗脱部位,分别减压浓缩至稠膏状,即得部位一、部位
二、部位三、部位四、部位五、部位六。各洗脱部位分别用二
甲基亚砜(DMSO)溶解制成浓度为 204 800 µg/mL 的储备液,阳
性药特比萘酚用 DMSO 溶解制成浓度为 8 000 µg/mL 的储备液,
存于-70 ℃冰箱备用。
阳性对照药物特比萘酚(Terbinafine,TERB),上海诚优国
际贸易有限公司提供,批号 20090101,纯度：99.82%,-70 ℃冰
箱保存。
1.2 菌株
实验用毛癣菌株由新疆医科大学真菌与真菌病研究中心
菌种保藏库提供,经过常规的真菌学鉴定,在 PDA 培养基上
4 ℃保存备用。
1.3 试剂与仪器
RPMI-1640 培养基,美国 Gibco 公司；三氮吗啡琳丙磺酸
(MOPS),Amresco 0607；马铃薯培养基(PDA),Difco,lot.8316391；
DMSO,SCIENTIFIC RESEARCH SPECJAL；GENMED 真菌/酵母细胞
SDH 活性定量检测试剂盒,美国 GENMED SCIENTIFICS INC,产品
编号：GMS10103.4v.A。
PB-10 型 pH 计和 BS224S 型精密电子天平,德国
Sartorious；FMspx-250VB 型生化培养箱,上海福玛实验设备
有限公司；BHC-1300ⅡA 型生物安全柜,苏州安泰空气技术有
限公司；Allegra64R 型高速低温离心机,美国 Beckman 公司；
JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎仪,宁波新芝科器研究所；Bio-Rad
550 型酶标仪,美国伯乐公司；LDZX-75KBS(内循环)立式蒸汽
灭菌器,上海申安医疗器械厂；MDF-192 型超低温保存
箱,SANYO ULTRA LOW；DM2500 显微镜,德国 Leica。
2 实验方法
2.1 微量液基法筛选地锦草有效部位
参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝
状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)[5],将
受试的菌株均接种于 PDA 上,26 ℃培养 7～14 d。吸取 2 mL
无菌的 0.85%的氯化钠溶液,冲洗菌落表面的菌丝和孢子,将
含有菌丝和孢子的冲洗液用血细胞计数板记数,浓度在 1×
105～5×105 cfu/mL 之间,用 RPMI-1640 培养基稀释 50 倍至 2
倍终浓度。
结果判定时,与对照孔比,以吸收度值下降至对照孔 80%
以上的最低浓度孔中的药物浓度为 MIC80值(即真菌生长 80%被
抑制时的药物浓度)。MIC80值高于最高浓度 0.1 µg/mL 时,计
为“＞0.1 µg/mL”；MIC80值为最低浓度 0.003 125 µg/mL 或在
最低浓度以下时,不作区别,均计为“≤0.003 125 µg/mL”。上
述实验均平行操作 2～3 次,当 MIC80值能准确重复或只差 1 个
浓度梯度时才被接受。
2.2 地锦草有效部位对红色毛癣菌琥珀酸脱氢酶活性的影响
2.2.1 分组及药物干预 试验分生长对照组(空白生长对照
菌)和不同浓度地锦草有效部位(浓度由低向高依次为 32、64、
128 µg/mL)作用红色毛癣菌组。参照 NCCLS 推荐的《产孢丝状
真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)[5],将
不同浓度的EHE和红色毛癣菌(XYZ T.r 40013)在26 ℃孵育7 d,
收集菌丝样品用于酶活性测定。
2.2.2 琥珀酸脱氢酶活性的测定 收集培养液,1 000×g 离
心 10 min,分离得到的菌丝样品,用 PBS(pH 7.4)缓冲溶液漂
洗 3 次,每次 1 000×g 离心 10 min,弃上清。每组精密称取菌
丝样品 0.1 g,各 3 份,分别加入 PBS(pH 7.4)缓冲溶液 1 mL,
置于冰浴上超声破碎细胞,-20 ℃放置过夜,次日反复冻融 2
次,5 000×g 离心 5 min,取上清,严格按照试剂盒说明书进行
酶活性测定。
3 统计学方法
测定结果均以—x±s 表示,采用 PEMS 3.1 数据处理软件,组
间比较采用 t检验。
4 结果(见表 1、表 2)
表 1 地锦草不同洗脱部位和特比萘酚抗真菌药物敏感性实验结果
平均 MIC(µg/mL)
菌株
1 2 3 4 5 6 7
红色毛癣菌
6 株(T.r)
640 ＞1024 341 320 197 149 0.018
石膏样毛癣菌
6 株(T.m)
426 ＞1024 384 213 490 149 0.018
其他皮肤癣菌
6 株
384 ＞1024 218 101 341 192 0.023
白色念珠菌等
6 株
＞1024 ＞1024 ＞1024 ＞1024 ＞1024 416 ＞0.08
注：1.部位一；2.部位二；3,部位三；4.部位四；5.部位五；6.部位六；
7.阳性对照药：特比萘酚
表 2 各组红色毛癣菌 SDH 活性测定结果(—x±s,n＝3)
组别 浓度(µg/mL)
酶活性平均值
(µmolDCIP 还原/min)
空白菌对照组 0 73.80±1.16
低浓度组 32 52.38±0.63**
中浓度组 64 28.73±1.30△
高浓度组 128 14.51±0.71**△#
阳性对照药组 0.25 38.53±0.37**
注：与空白菌对照组比较,**P＜0.01；与低浓度组比较,△P＜0.05；
与中浓度组比较,#P＜0.05
5 讨论
地锦草是中医、维吾尔医常用药材,应用广泛。维吾尔医理
论认为,地锦草具有清除异常黏液质、胆液质及败血、消肿止痒
之功能,维吾尔医常用其复方百癣夏塔热治疗手癣、体癣、足癣、
花斑癣、银屑病等疾病[1]。 (下转第 38 页)
·38· Chinese Journal of Information on TCM Nov.2010 Vol.17 No.11
临床表现多种多样。我们经长期临床实践和证候学调查结果得
出,气阴两虚、痰瘀互阻是代谢综合征基本病机,应用益气养阴
清热、化浊通络法组方“复方健胰颗粒”(由生黄芪、葛根、
山茱萸、丹参、山药、半夏、薏苡仁、苦丁茶等组成)治疗该
病,取得较好的疗效。
本研究显示,造模 12 周后代谢综合征组大鼠较正常对照
组体重、血压、FPG、FINS 水平显著升高,血脂水平明显异常,
提示代谢综合征模型成功建立。复方健胰颗粒预防组和治疗组
可降低代谢综合征大鼠体重、血压、FINS、FPG、TG、TC、LDL-C、
hs-CRP 的水平,升高 HDL-C 水平。
复方健胰颗粒方中黄芪、薏苡仁益气健脾助运化；山药益
气养阴,为平补肺脾肾气阴之佳品；山茱萸益肾阴,并有收涩之
功；葛根生津止渴鼓舞胃气,促进脾胃消化功能恢复；苦丁茶
清热生津、化痰并具有活血脉、去油腻作用；半夏为化痰浊之
品,痰去正易安；丹参活血祛瘀、凉血,有达通血络之功。全方
补中寓疏、补而不滞、滋而不腻、攻而不峻、清而不伤阴,共奏
益气养阴清热、化浊通络之功。
本实验结果提示,复方健胰颗粒预防和治疗代谢综合征的
作用机制可能为：①扩张血管内径,增加血管血流量,控制血
压；②调节血脂,降低血糖；③减轻胰岛素抵抗,提高机体对胰
岛素的敏感性；④抗炎、免疫调节作用。中药复方制剂具有多
途径、多靶点的作用,通过调节机体整体功能状态从而达到防
病治病的目的。
参考文献：
[1] 陈晓雯,方朝晖.糖康明胶囊对糖尿病大鼠血糖、血脂及血液流变性影
响[J].安徽中医学院学报,2001,20(5)：44－46.
[2] 黄 飞,闫小光,王 凌,等.糖肾胶囊对代谢综合征大鼠模型的影响[J].
中华中医药杂志,2008,23(4)：310－312.
[3] 杨鹏远,芮耀诚.动脉粥样硬化大鼠实验模型的建立[J].第二军医大学
学报,2003,24(7)：802－804.
[4] Haffner SM. Risk constellations in patients with the metabolic
syndrome：epidemiology, diagnosis, and treatment patterns[J]. Am
J Med,2006,119(5 Suppl 1)：S3－S9.
[5] 王晓梅,付利华,金 涛,等.C反应蛋白与代谢综合征的相关性[J].中国
糖尿病杂志,2007,15(6)：330－331.
[6] Wilson AM, Swan JD, Ding H, et al. Widespread vascular production
of C-reactive protein (CRP) and a relationship between serum CRP,
plaque CRP and intimal hypertrophy[J]. Atherosclerosis,2007,
191(1)：175－181.
[7] Verma S, Devaraj S, Jialal I. Is C-reactive protein an innocent
bystander or proatherogenic culprit? C-reactive protein promotes
at herothrombosis[J]. Circulation,2006,113(17)：2135－2150.
(收稿日期：2009-12-23)
(修回日期：2010-02-25,编辑：华强)

(上接第 35 页) 从体外药敏可知,地锦草有效部位对临床常
见的真菌具有很强的抗菌作用。本研究初步完成了地锦草有效
部位的筛选,为进一步研究其抗真菌作用机制和分离有效的先
导化合物奠定了基础。
SDH为黄素酶类,是线粒体内膜的结合酶,属膜结合酶,是连
接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一,可为真核细胞线粒体和
多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子,为线粒体的一种
标志酶[6]。作为参与三羧酸循环的关键酶,SDH 是反映线粒体功
能的标志酶之一,其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度
的指标[7]。SDH 能通过一系列人工电子受体,如与 PMS(吩嗪二
甲酯硫酸盐)、DCPIP(2,6-二氯酚靛酚)等发生反应催化琥珀酸
的氧化,而借助这些中间产物的颜色变化,通过分光光度计检
测即可加以定量反映,其反应式为：①Succinate＋PMS-
Fumarate＋PMSH2；②PMSH2＋DCPIP-PMS＋DCPIPH。DCPIP 呈
蓝色,标准的吸收光谱在 600 nm 处,这种色泽可因其还原而渐
次变淡,从而 600 nm 处的光密度的变化与 DCPIP 含量成正比,
测定 2,6-DPIP 的还原速度可以推算出 SDH 的活力。一分子
DCPIP 被还原,即代表一分子琥珀酸被氧化。故可测定此反应
系统在 600 nm 处的吸收光度变化,来计算 SDH 的活性。硫酸甲
酯吩嗪(PMS)反应法研究得出结论,不同浓度的地锦草有效部
位,均可降低红色毛癣菌 SDH 的活性(P＜0.01)。地锦草有效
部位在 32 µg/mL 时,就可显著降低红色毛癣菌中 SDH 的活性
(P＜0.01),且存在剂量依赖性。因此,地锦草有效部位抗真菌
机制,可能是通过抑制 SDH,导致多聚葡聚糖的合成受阻,细胞
生长周期停滞,真菌细胞壁的完整性被破坏,真菌细胞内渗透
压不稳定,最终导致真菌细胞溶解死亡。
参考文献：
[1] 新疆维吾尔自治区卫生厅.维吾尔药材标准[S].乌鲁木齐：新疆科技
卫生出版社,1993.99.
[2] Weitzman L, RC Summerbell. The dermatophytes[J]. Clin Microbiol
Rev,1995,8：240－259.
[3] DA Santos, MES Barros, JS Hamdan. Establishing a method of
inoculum preparation for susceptibility testing of trichophyton
rubrum and Trichophyton mentagrophytes[J]. Clinical Microbiology,
2006,44(1)：98－101.
[4] Mukherjee PK, Leidich SD, Isham N, et al. Clinical trichophyton
rubrum strain exhibiting primary resistance to terbinafine[J].
Antimicrob Agents Chemother,2003,47：82－86.
[5] NCCLS. Reference method for broth dilution antifungal
susceptibility testing of filamentous fungi；Approved standard
(M38-A)[M]. Pennsylvania：NCCLS Press,2002.1－30.
[6] 王端礼,李若瑜,王爱平,等.医学真菌学-实验室检验指南[M].北京：
人民卫生出版社,2004.87.
[7] 李勤报,梁厚果.轻度水分胁迫的小麦幼苗中与呼吸有关的几种酶活性
变化[J].植物生理学报,1988,14(3)：217－222.
(收稿日期：2010-04-26,编辑：华强)