全 文 ：含量测定项下操作 , 测定吸收度 , 其 RSD为 0.97%, 说明精密度
良好。
2.2.3　回收率实验 精密吸取 “ 2.1.7”项下供试品溶液 0.3 ml,
置 50ml容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 在 322 nm波长处
测定吸收度 , 根据标准曲线计算总香豆素的含量 , 得总香豆素的
回收率分别为 99.65%, RSD为 1.91%(n=5)。
2.2.4　样品测定 精密量取 “ 2.1.9”供试品溶液 0.3 ml,置 50ml
容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,照分光光度法 [ 3] , 在 322 nm
波长处测定吸收度 , 根据标准曲线计算总香豆素的含量 , 样品的
含量为 38.45%, RSD为 2.34%(n=3)。
3　讨论
曾选用乙腈 -水(65∶35)、甲醇 -水 -乙酸(85∶15∶1)、甲
醇 -水(80∶20)、甲醇 -水(75∶25)、甲醇 -水(70∶30)作为流
动相进行样品分析 ,结果表明, 甲醇∶水(70∶30)作为流动相使样
品峰形对称、分离度好 ,同时出峰时间较短 ,节省了分析时间。
在制备供试品时 ,比较了用 95%乙醇和甲醇提取 ,测试结果
虽基本一致 , 但由于超临界萃取物中含有较多的脂溶性成分 ,用
甲醇提取时发现有部分脂溶性成分浮在液面上不溶解 ,所以选用
甲醇作溶剂进行提取 ,采用过滤的方法除去一部分脂溶性成分。
文献曾报道 [ 4]先采用柱层析对超临界萃取物进行预处理 ,
除去脂溶性成分 ,该方法操作比较繁琐 , 本实验采用在分析柱前
增加预柱以保护分析柱 ,不断更换预柱的方法 , 可避免前处理引
起较大的误差。
从图 1超临界样品的色谱图看到 ,保留时间在 8.65 min的
色谱峰是蛇床子素 , 样品中蛇床子素的相对面积可达到 73%以
上 , 同时 ,笔者对超临界萃取后渣进行了分析 ,发现渣中蛇床子素
含量很低 ,这表明采用超临界萃取法可以将蛇床子中蛇床子素基
本提取完全。
由结果表明 ,本法操作简便 , 结果准确 ,重复性好 , 可作为该
提取物的质量控制的方法。
参考文献:
[ 1 ] 　陈 艳 ,张国刚 ,余仲平.蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展
[ J] .沈阳药科大学学报 , 2006, 23(4):256.
[ 2 ] 　鲍君杰 ,谢梅林 ,周 佳 ,等.蛇床子总香豆素对去卵巢大鼠骨质疏
松的影响 [ J] .苏州大学学报 , 2005, 25(3):387.
[ 3 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录ⅴA.
[ 4 ] 　张晓霞 ,周卯星 ,张高勇 , 等.高效液相色谱法测定蛇床子萃取物
中的蛇床子素 [ J].日用化学工业 , 2006, 36(6):395.
收稿日期:2008-04-15;修订日期:2008-10-12
基金项目:广西自然科学基金(桂科自 0640142)
作者简介:吴玉强(1970-),男(汉族),山东掖县人 ,现任广西中医学院制
药厂高级工程师 ,硕士学位 ,主要从事中药新产品研究工作.
铁包金提取物抗肝损伤作用的研究
吴玉强 1 , 邓家刚 2 , 钟正贤 3 ,杨　兴1
(1.广西中医学院制药厂 ,广西 南宁　530023;　2.广西中医学院 广西 南宁　530001;
3.广西中医药研究院 , 广西 南宁　30022)
摘要:目的 观察铁包金 4种提取物的抗肝损伤药效作用。方法 采用 CCl4和异硫氰酸 -α-萘酯所致小鼠急性肝损伤
模型等方法进行实验。结果 高剂量组铁包金提取物样品 1 ～ 4能明显降低 CCl4致急性肝损伤小鼠血清中的 ALT, AST活
性 , 并能明显升高血清中总蛋白和白蛋白含量;样品 1, 2, 4能显著降低 T-BIL含量。结论 铁包金提取物对 CCl4和异硫
氰酸 -α-萘酯所致的急性肝损伤具有保肝降酶退黄作用。
关键词:铁包金;　抗肝损伤
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)04-0854-02
ProtectiveEffectoftheExtractsofBerchemialineata(L.)DC.onHepaticinjury
inMice
WUYu-qiang1 , DENGJia-gang2 ,ZHONGZheng-xian3 ,YANGXing1(1.PharmaceuticalFactoryofGuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, Nanning530023, China;
2.GuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, Nanning530001, China;3.TraditionalChineseMedicineRe-
searchInstituteofGuangxi, Nanning530001, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveefectoftheextractsofBerchemialineate(L.)DC.onliveriujuryinducedbycar-
bontetrachloride(CCl4)orα-Naphthylisothiocyanate(ANIT).MethodsTheanimalmodelswithhepaticinjurywereestab-lishedbyCCl4 andANIT.TheactivitiesofALT, ALB, T-BIL, TPandASTinserumweremeasured.ResultsInhighdosegroup, thesample1 ～ 4 couldreduceALTandASTactivitiesinserumofacuteliverdamagemiceinducedbyCCl
4
orANIT, and
elevatethecontentsoftotalproteinandthealbumininserumobviously;thesample1, 2, 4couldobviouslyreducethecontentofT
-BIL.ConclusionTheextractsofBerchemialineate(L.)DCcanprotecteliverfrominjuryinducedbyCCl4 orANIT.Keywords:Berchemialineate(L.)DC.;　Preventliverinjury
　　铁包金 Berchemialineate(L.)DC.为鼠李科植物老鼠耳的干
燥根 , 为广西民间常用中草药 , 收载于 1990年版《广西中药材标
准》 ,具有消肿解毒 、止血镇痛 , 祛风除湿功效。 民间常用于治疗
肺结核 、吐血 、腹痛 、头痛 、跌打损伤 、疔疮肿毒等 [ 1] 。 本课题组
曾对铁包金药材的抗炎 、镇痛作用进行研究 [ 2] , 结果表明铁包金
提取物具有显著的抗炎 、镇痛作用。为验证铁包金在抗肝损伤方
面的作用 , 实验将铁包金药材用不同溶剂提取并对提取物进行了
抗肝损伤的研究。
1　材料
1.1　药物与试剂 铁包金 1 ～ 4号提取物共 4个样品 , 样品 1为
氯仿层提取物 , 样品 2为石油醚层提取物 , 样品 3为醋酸乙酯层
提取物 ,样品 4为正丁醇层提取物 , 由广西中医学院制药厂提供。
联苯 双 酯 , 广 州 星 群 (药 业)股 份 有 限 公 司 生 产 , 批
号DF40037。地塞米松天津药业集团新郑股份有限公司 , 批号
·854·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4　
050720。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒 , 批号 2006017;天冬氨酸氨
基转移酶(AST)试剂盒 , 批号 2006016;总蛋白(TP)试剂盒 , 批号 2005032;
白蛋白(ALB)试剂盒 , 批号 2005041, 均为长春汇力生物技术有限公司产
品。四氯化碳(CCl4),由广东西陇化工厂生产。异硫氰酸 -α-萘酯 , 美国Sigma公司产品。
1.2　动物 KM种小鼠 , 18 ～ 22 g, 雌雄兼用 , 清洁级动物 , 由广西医科大学
实验动物中心提供 ,许可证号:SCXK桂 2003 -0003。小鼠分性别饲养于空
调室内 , 室温(22 ±2)℃, 湿度(60±5)%, 喂标准颗粒饲料 , 自由饮水和
摄食。
1.3　仪器 棱光 -722型可见分光光度计 , FA1004型万分之一电子天平 ,
由上海精密科学仪器有限公司生产。
1.4　统计学分析 采用 SPSS10统计软件分析数据。所得实验数据以 x±s
表示 , 采用 t检验作组间比较差异显著性 , P<0.05认为有显著差异 , 具有
统计学意义。
2　方法与结果
2.1　对四氯化碳(CCl4)所致肝损伤模型的影响 [ 3] 取小鼠 110只 ,雌雄各
半 , 随机分为正常对照组(蒸馏水 , 20 ml/kg), 模型组(蒸馏水 , 20 ml/kg),
高剂量铁包金样品 1 ～ 4(0.4 g/kg)组 , 低剂量铁包金样品 1 ～ 4(0.2 g/kg)
组 , 以及阳性对照药联苯双酯(0.2 g/kg)组 , 每组 10只小鼠。动物每天灌
胃给药 1次 , 连续用药 7 d。末次给药 1 h后除正常对照组外 , 各组小鼠腹
腔注射 1%CCl4花生油溶液 10 ml/kg体重。 20 h后从小鼠眼眶静脉丛取
血 , 分离血清。然后取血清按临床试剂盒方法 , 测定血清丙氨酸氨基转移酶
(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性 , 以及血清总蛋白(TP)、白蛋白
(ALB)含量。比较各给药组与模型组的显著性差异 , 评价药物的保肝降酶
作用。结果见表 1。结果表明 , 与对照组比较 , 模型组血清的 ALT, AST活
性都比对照组明显升高 ,表明造模成功(P<0.01)。 高剂量组样品 1 ～ 4和
阳性药联苯双酯能明显降低 CCl4致急性肝损伤小鼠血清中的 ALT, AST活
性(P<0.05或 P<0.01),并能明显升高血清中总蛋白和白蛋白含量(P<
0.05或 P<0.01),样品 4、样品 3低剂量组对 ALT作用不明显(P>0.05),
但对 AST活性有抑制作用(P<0.05或 P<0.01)。
表 1　铁包金提取物对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
ALT
/u· L-1
AST
/u· L-1
TP
/g· L-1
ALB
/g· L-1
正常对照 - 11.30±6.23 138.87±16.62 52.87±2.47 24.43±2.08　
模型 0.2 183.15±9.82## 265.64±8.44## 46.50±7.63# 22.43±2.49
联苯双酯 0.2 164.31±11.49＊＊245.80±13.10＊＊ 54.32±2.31＊＊ 27.67±1.86＊＊
铁色金(高)样品 1 0.4 152.31±26.15＊＊216.37±35.98＊＊ 60.53±4.18＊＊ 29.62±7.29＊＊
铁色金(高)样品 2 0.4 165.46±8.57＊＊ 223.14±52.05＊ 55.64±4.44＊＊ 27.39±2.56＊＊
铁色金(高)样品 3 0.4 176.08±9.24＊ 212.98±55.01＊＊ 60.26±3.43＊＊ 33.22±7.53＊＊
铁色金(高)样品 4 0.4 168.69±13.26＊ 238.38±27.41＊ 60.48±6.72＊＊ 29.54±5.77＊＊
铁色金(低)样品 1 0.2 167.31±23.13＊ 254.31±31.94＊ 65.24±4.16＊＊ 27.32±6.25＊
铁色金(低)样品 2 0.2 172.26±8.42＊ 263.23±50.01＊ 58.23±4.35＊＊ 25.32±2.45＊
铁色金(低)样品 3 0.2 188.04±7.20 232.48±56.21＊ 66.15±3.56＊＊ 30.21±6.55＊＊
铁色金(低)样品 4 0.2 198.69±15.21 257.39±28.29＊ 63.25±6.69＊＊ 25.23±5.47＊
　　与模型组比较 , ＊P﹤ 0.05, ＊＊P﹤ 0.01;与正常对照组比较 , #P<0.05, ##P<0.01;n=10
2.2　铁包金各提取物对异硫氰酸 -α-萘酯(ANIT)致小鼠黄疸的保护作
用 [ 4] 黄疸造型剂配制:称取 225 mg异硫氰酸 -α-萘酯(ANIT)用花生油
溶解并配成 0.6%ANIT花生油溶液 37.5ml, 按 0.15 ml/10 g体重一次灌胃
给药(90mg/kg), 投毒造型。
取小鼠 110只 ,随机分为空白对照组 、模型组 、阳性药联苯双酯(0.2 g/
kg)组 ,低剂量铁包金样品 1～ 4(0.2 g/kg)组 ,高剂量铁包金样品 1 ～ 4(0.4
g/kg)组。空白对照组和模型组给予等体积蒸馏水(20 ml/kg),其他各组每
天给药 1次 , 连续 5 d。第 6天除对照组外 ,其余各组灌胃给予 0.6%ANIT
花生油溶液中毒 , 造成黄疸型肝损伤。中毒后继续给药 2 d, 各组中毒 48 h
后摘除小鼠眼球取血分离血清 ,按试剂盒方法测定血清 T-BIL含量和 ALT
活性。比较各给药组与模型组的显著性差异 , 评价药物的退黄降酶作用。
结果见表 2。结果表明 ,与对照组比较 , 模型组血清中 T-BIL含量和 ALT
活性都比对照组明显升高 ,表明造模成功。与模型组比较 , 除样品 3降胆红
素作用无明显差异外(P>0.05), 样品 1, 2, 4组的 T-BIL含量均明显降低
(P<0.05), 各样品及阳性药联苯双酯组均可降低 ALT活性(P<0.01或 P
<0.05), 提示铁包金提取物具有明显的退黄降酶
作用。
表 2　铁包金提取物对 ANIT致小鼠黄疸的保护作用( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
T-BIL
/μmol· L-1
ALT
/μmol· L-1
空白对照 - 7.12±2.86 23.88±8.66
模型 0.2 116.83±49.54### 149.89±47.07###
联苯双酯 0.2 111.38±17.14 69.62±29.01＊＊＊
铁包金(高)样品 1 0.4 81.67±18.32＊ 74.36±18.61＊＊＊
铁包金(高)样品 2 0.4 74.98±37.38＊ 79.20±13.62＊＊＊
铁包金(高)样品 3 0.4 84.50±40.31 92.18±15.57＊＊
铁包金(高)样品 4 0.4 74.76±37.03＊ 102.92±33.29＊
铁包金(低)样品 1 0.2 83.56±17.23＊ 78.36±16.16＊＊
铁包金(低)样品 2 0.2 77.66±26.25＊ 80.23±14.25＊＊
铁包金(低)样品 3 0.2 86.50±47.43 93.28±14.65＊＊
铁包金(低)样品 4 0.2 78.65±26.22＊ 105.59±34.93＊
　　与模型组比较 , ＊P﹤ 0.05, ＊＊P﹤ 0.01, ＊＊＊P﹤ 0.001;与空
白对照组比较 , #P﹤ 0.05, ##P﹤ 0.01, ###P<0.001;n=10
3　讨论
CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型制备毒剂 ,
被广泛用于肝坏死或肝损伤的在体和离体研究。一般
认为 , 它通过细胞色素 P450将 CCl4分解为 CCl3自由基
团 ,能选择性地损伤小叶中央区的肝细胞 ,引起脂质过
氧化反应 , 破坏细胞膜结构 , 使肝细胞变性坏死 , 细胞
内转氨酶 、自由基渗入血液而活性增高 ,肝细胞受损后
肝内合成蛋白能力降低 , TP, ALB含量会减少。抗肝
损实验数据表明 , 与模型组比较 , 高剂量组样品 1 ～ 4
和阳性药联苯双酯能明显降低 CCl4致急性肝损伤小
鼠血清中的 ALT, AST活性 , 并能明显升高血清中 TP
和 ALB含量(P<0.05),低剂量组样品 3、4对 AST活
性有抑制作用(P<0.05), 对 ALT活性抑制作用不明
显(P>0.05)。提示铁包金各提取物具有一定的保肝
降酶作用。
异硫氰酸 -α-萘酯(ANIT)是一种间接肝毒剂 ,
它主要损害肝内胆管上皮细胞 , 引起毛细胆管增生及
小叶间胆管周围产生炎症 , 从而造成胆管阻塞 ,形成明
显的胆汁郁积 , 并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞
损害 , 产生胆汁郁积性黄疸 ,出现高胆红素血症和胆汁
分泌减少。抗 ANIT所致的肝损伤实验数据表明 , 与
模型组比较 , 样品 1, 2, 4组的 T-BIL含量均明显降低
(P<0.05),样品 1 ～ 4及阳性药联苯双酯组均可降低
ALT活性(P<0.05或 P<0.01)。提示铁包金提取物
具有明显的退黄降酶作用。
综上所述 , 铁包金各提取物具有一定的保肝降
酶退黄作用 , 其药理作用与所含有效成分相关 , 提
示铁包金的提取物在保肝方面具有较好的开发应
用前景 。
参考文献:
[ 1] 　覃迅云 ,罗金裕 ,高志刚.中国瑶药学 [ M] .桂林:民族
出版社 , 2002:175.
[ 2] 　吴玉强 ,杨　兴 ,邓家刚.铁包金提取物镇痛抗炎作用
的研究 [ J].时珍国医国药 , 2008, 19(4):825.
[ 3] 　王小莺 ,吴国良 ,张彩英 ,等.保肝护脾液对四氯化碳所
致小鼠急性肝损伤的保护作用 [ J] .中兽医学杂志 ,
2006, 2:10.
[ 4] 　钟正贤 , 周桂芬 , 陈学芬.健肝茶保肝作用实验研究
[ J].时珍国医国药 , 2001, 12(7):582.
·855·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期