全 文 ：（总 ）广西中医药 2016年 2月第 39卷第 1期
基金项目：广西卫生厅适宜技术研究与开发项目（编号：S201417-05）
星毛冠盖藤（Pileostegia to－
mentella Hand.-Mazz.）为虎耳草科
冠盖藤属植物，分布于湖南、广东、
广西等省，具有祛风除湿、散瘀止
痛、消肿解毒功能，主治腰腿酸痛、
风湿麻木、跌打损伤、骨折、外伤出
血、痈肿疮毒［1］。其同属植物冠盖
藤（Pileostegia viburnoides Hook.f.et
Thoms.）具有抗肿瘤、抗炎镇痛等
多种药理活性［2-3］。目前有关星毛
冠盖藤的药理研究尚无文献报道，
实验证实，星毛冠盖藤中含有黄酮
类化合物［4］，而黄酮类化合物具有
抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、调节免
疫、防治血管硬化等功能［5］。超声
提取因其能缩短提取时间、效率
高、溶剂用量少、低温不破坏有效
成分等优点，广泛用于天然物质的
提取。本实验优选星毛冠盖藤中总
黄酮的超声乙醇浸提工艺，为后续
的开发利用提供科学依据。现报道
如下。
1 实验材料
1.1 仪器 AL204电子天平［梅特
勒-托利多仪器（上海）有限公司］；
TU-1810紫外可见分光光度计（北
京普析通用仪器有限责任公司）；
KQ-100VDE型双频数控超声波清
洗器（昆山市超声仪器有限公司，
最大功率：100 W，频率：28/45 kHz）。
1.2 药材 星毛冠盖藤茎和枝，
2014年 7月采于广西金秀瑶族自
治县，经广西壮族自治区药用植物
研究所鉴定为星毛冠盖藤，烘干，
粉碎，过 40目筛，备用。
1.3 试剂 芦丁对照品（上海彩
佑实业有限公司，批号为KB140211，
纯度≥98%）；无水乙醇（分析纯，
天津市富宇精细化工有限公司）；
氯化铝（分析纯，台山市粤侨试剂
塑料有限公司）。
2 方法与结果
2.1 星毛冠盖藤中总黄酮的含量
测定
2.1.1 对照品溶液的制备 精密
称取芦丁对照品 6.0 mg，置 25 ml
容量瓶中，加适量 60％乙醇溶解并
定容，摇匀，得 0.24 mg/ml 的对照
品溶液，备用。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密
称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，置
250 ml具塞玻璃锥形瓶中，超声提
取前无预浸泡处理，加入 60%乙
醇200 ml，在 40 ℃水浴（用仪器的
水浴加热功能和流动水控制温
度），超声功率 100 W的条件下，
28/45 kHz（每 5秒转换频率 1次）
超声提取 40 min。用相应浓度乙醇
补足重量，摇匀，抽滤，取续滤液，
放冷至室温，作为供试品溶液。
2.1.3 反应试剂的添加 精密吸
取一定量待测溶液，加入 25 ml
容量瓶中，再精密加入 0.1 mol/L
AlCl3溶液 1.0 ml，反应 40 min后，
加 60％乙醇定容至刻度。供试品溶
液与 AlCl3溶液反应会产生少量的
白色絮状沉淀，定容前过滤。
2.1.4 最佳吸收波长的选择 以
试剂为空白，取适量对照品溶液和
供试品溶液，按“2.1.3”项下方法操
作后在 190～1 100 nm范围内进行
光谱扫描，结果芦丁在可见光区域
有唯一波峰出现于 412 nm 处，样
品在可见光区域无吸收波峰出现，
在紫外光区域芦丁与样品于 270 nm
有一致的波峰，故选择 270 nm为
星毛冠盖藤中总黄酮超声乙醇浸提工艺的优化
谢金攀 谢裕安 杨 帆 毛赛兰 广西医科大学附属肿瘤医院 530021 南宁市河堤路 71号
梁琼平 金秀瑶族自治县瑶医医院 545708
庞赵生 金秀瑶族自治县瑶医药研究所 545708
摘 要 目的：优选星毛冠盖藤中总黄酮的超声乙醇浸提工艺。方法：以料液比、乙醇体积分数、超声处理
时间、浸泡时间为考察因素，以总黄酮含量为评价指标，以正交试验优选星毛冠盖藤中总黄酮的提取工艺。结
果：优选出的最佳提取工艺为：在 40 ℃水浴，超声功率 100 W的条件下，加入 20倍量 65%乙醇，室温下浸泡星毛
冠盖藤 3 h，超声提取 50 min。结论：所选工艺合理、可行，可用于星毛冠盖藤中总黄酮的提取。
关键词 星毛冠盖藤；总黄酮；超声提取；正交试验
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1003-0719（2016）01-0069-05
·中药方剂·
·69·69
（总 ） 广西中医药 2016年 2月第 39卷第 1期
最佳吸收波长。加三氯化铝后光谱
扫描图见图 1。
2.1.5 标准曲线的测定 分别精
密吸取对照品溶液 0 ml、1.0 ml、
2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml，置
25 ml 容量瓶中，按“2.1.3”项下方
法精密加入反应试剂，显色 40 min，
加 60％乙醇至刻度，摇匀。以第 1
份为空白，在 270 nm波长处测定
吸光度（A）。以芦丁对照品溶液的
浓度（C）为横坐标，A为纵坐标，进
行线性回归，得回归方程为 A=
35.732C-0.0002（R2=0.9999），芦丁
对照品溶液的浓度在 0～0.048 mg/ml
范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.1.6 样品含量测定 精密量取
供试品溶液 2 ml，按“2.1.3”项下方
法操作，以不加供试品溶液为空
白，在 270 nm波长处测定吸光度，
根据回归方程计算各样品中总黄
酮含量。
2.2 方法学考察
2.2.1 精密度试验 精密量取供
试品溶液 2 ml，按“2.1.3”项下方法
操作，测定吸光度，连续测定 6次。
结果 RSD＝0.18％（n＝6），表明仪器
精密度良好。
2.2.2 稳定性试验 精密量取供
试品溶液 2 ml，按“2.1.3”项下方法
操作，分别在 0 h、0.5 h、1.0 h、2.5 h、
3.0 h、3.5 h、4.0 h测定吸光度。结
果 RSD＝1.02％（n＝7），表明供试品
溶液在 4 h内稳定性良好。
2.2.3 重复性试验 精密称取星
毛冠盖藤粉末 10.0 g，共 6份，按
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，
再分别精密量取供试品溶液 2 ml，
按“2.1.3”项下方法操作，测定吸光
度。结果 RSD＝0.53％（n＝6），表明
本方法重复性良好。
2.2.4 加样回收率试验 精密称取
0.5 g已知总黄酮含量（2.29 mg/g）
的星毛冠盖藤粉末，共 18份，分别
倒入 50 ml 具塞尖底玻璃离心瓶
中，其中 9份分为 3 组，分别精密
加入 7.63 ml、9.54 ml、11.45 ml 的
芦丁对照品溶液［6］，另外 9份作为
本底管［7］，超声提取前未浸泡，各
加 60%乙醇至 20倍量、超声提取
40 min，按“2.1.5”项下方法操作，
测定总黄酮的含量。计算得平均加
样回收率为 98.85％，RSD＝1.20％
（n＝9）。
2.3 单因素试验
2.3.1 超声功率单因素试验 精
密称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，共
5份，各加入 15倍量 55％乙醇，超
声提取前未浸泡，分别在 60 W、
70 W、80 W、90 W、100 W 超声功
率下超声提取 40 min，按“2.1.5”项
下方法测定总黄酮含量。结果如图
2所示，随超声功率的提高（100 W
内）总黄酮提取率呈线性上升，故
选择超声功率为 100 W。
2.3.2 料液比单因素试验 精密
称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，共 5
份，分别加入 5、10、15、20、25倍量
55％乙醇，超声提取前未浸泡，超
声提取 40 min，按“2.1.5”项下方法
测定总黄酮含量。结果如图 3 所
示，用 20倍量的乙醇提取得到的
总黄酮含量最高。
2.3.3 乙醇体积分数单因素试验 精
密称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，共
5 份，分别加入 20 倍量的 55％、
65％、75％、85％、95％的乙醇，超声
提取前未浸泡，超声提取 40 min，
按“2.1.5”项下方法测定总黄酮含
量。结果如图 4所示，在 65％乙醇
中提取得到的总黄酮含量最高。
图 1 光谱扫描图
波长（nm）
吸
光
度
（
Ab
s）
超声功率（W）
图 2 超声功率对总黄酮含量的影响
总
黄
酮
含
量
（
m
g/
g）
·70· 70
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2.3.4 超声提取时间单因素试验 精
密称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，共
5份，各加入 20倍量的 65％乙醇
超声提取，超声提取前未浸泡，超
声处理时间分别为 30 min、40 min、
50 min、60 min、70 min，按“2.1.5”
项下方法测定总黄酮含量。结果如
图 5所示，当提取 50 min时，总黄
酮的溶出已达到极限。
2.3.5 浸泡时间单因素试验 精
密称取星毛冠盖藤粉末 10.0 g，共
5份，分别加入 20倍量的 65％乙
醇室温下浸泡 1 h、2 h、3 h、4 h、5 h
后，超声提取 50 min，按“2.1.5”项
下方法测定总黄酮含量。结果如图
6所示，浸泡 2 h后总黄酮含量已
趋于平衡。
2.4 正交试验优选提取工艺 根
据单因素试验结果，在 40 ℃水浴
和超声功率 100 W的条件下，选取
浸泡时间（A）、料液比（B）、乙醇体
积分数（C）、超声提取时间（D）为
考察因素，以总黄酮含量为评价指
标，选用 L9（34）正交表进行试验，
因素水平见表 1。正交试验结果见
表 2。取离差平方和（SS）最小的因
素 A 为误差列［8］，方差分析结果
见表 3。
由表 2、表 3的统计学分析结
果可知，在考察范围内，各因素影
响提取工艺的主次顺序为 B＞C＞
D＞A，即料液比＞乙醇体积分数＞超
声提取时间＞浸泡时间，因素 B、C
和 D对提取工艺的影响有统计学
意义（P＜0.05或 P＜0.01）。最佳提取
工艺条件为 A2B2C2D2，即用 20倍
量的 65％乙醇室温下浸泡 3 h 后
超声提取 50 min。
2.5 验证试验 精密称取星毛冠
盖藤粉末 10.0 g，共 3 份，按上述
优选的最佳提取工艺进行提取，其
中 3 份测得总黄酮含量分别为
5.921 mg/g、5.918 mg/g、5.919 mg/g，
平均总黄酮含量为 5.920 mg/g，高
于表 2中的最高值，表明所选工艺
稳定、可行，可用于星毛冠盖藤中
总黄酮的提取。
3 讨 论
因为高温会破坏成分，所以本
研究未采用回流提取法和热水提
取法。随着提取时间的增加，由于
超声的热效应，水浴温度会有所升
高，故本实验同时采用流动水控制
水浴温度。虽然黄酮类化合物因分
子中具有酚羟基而显酸性，但碱性
乙醇用量（倍）
图 3 料液比对总黄酮含量的影响
总
黄
酮
含
量
（
m
g/
g）
乙醇体积分数（%）
图 4 乙醇体积分数对总黄酮含量的影响
总
黄
酮
含
量
（
m
g/
g）
提取时间（min）
图 5 超声提取时间对总黄酮含量的影响
总
黄
酮
含
量
（
m
g/
g）
·71·71
（总 ） 广西中医药 2016年 2月第 39卷第 1期
条件下的处理和后期的酸化对成
分研究均产生一定程度的干扰，因
此不将溶剂的 pH 值作为考察因
素。综上考虑，本实验在 40 ℃水
浴，以超声功率、料液比、乙醇体积
分数、超声提取时间、浸泡时间为
考察因素，通过单因素和正交试
验，优选最佳提取工艺条件。
实验表明在其它条件不变时，
60~100 W范围内的超声功率对星
毛冠盖藤中总黄酮的提取率有所
影响（图 2），但 100 W以上的超声
功率是否更佳则有待进一步探究。
同等条件下，随着料液比的增加，
溶剂过多，可能是由于分散了作用
于药材的超声能量，导致总黄酮的
提取量更低（图 3）。不同体积分数
的乙醇可以提取不同极性的黄酮，
高浓度的乙醇（90%~95%）适用于
游离黄酮的提取，60%浓度左右的
乙醇适用于黄酮苷类的提取［9］，从
图 4和表 2 结果可以推测星毛冠
盖藤中总黄酮以黄酮苷类为主，而
含游离黄酮较少。正交设计没有空
白列时，虽然重复试验可提高试验
精确度和可靠性，但明显增加了试
验次数。根据专业书籍［8］，选择离
差平方和中最小者作近似估计也
是允许的。尽管在表 3中取离差平
方和（SS）最小的因素 A（浸泡时
间）为误差项，但从图 6 能够看出
浸泡作为超声提取的预处理也很
有必要。提取时间和浸泡时间越
长，杂质也产生越多，超出一定范
围，对总黄酮的提取可产生不利影
响（图 5、图 6）。兼顾节约能源和节
省时间，本实验优选最佳提取工艺
条件为 A2B2C2D2，即用 20倍量的
65％乙醇室温下浸泡 3 h后超声提
取 50 min。根据验证试验结果，表
明提取工艺合理、可行，可用于星
毛冠盖藤中总黄酮的提取。
浸泡时间（h）
图 6 浸泡时间对总黄酮含量的影响
表 1 因素水平表
水平
因素
A（h） B（g/ml） C（%） D（min）
1 2 1∶15 55 40
2 3 1∶20 65 50
3 4 1∶25 75 60
表 2 正交试验方案安排与结果
试验号 A B C D 总黄酮含量(mg/g)
1 1 1 1 1 3.554
2 1 2 2 2 5.892
3 1 3 3 3 4.777
4 2 1 2 3 4.561
5 2 2 3 1 4.591
6 2 3 1 2 5.284
7 3 1 3 2 3.732
8 3 2 1 3 5.235
9 3 3 2 1 5.420
K1 4.741 3.949 4.691 4.522
K2 4.812 5.239 5.291 4.969
K3 4.796 5.160 4.367 4.858
R 0.071 1.290 0.924 0.448
表 3 方差分析结果
因素 df SS MS F P
A（误差） 2 0.008 0.004
B 2 3.139 1.569 392.316 ＜0.01
C 2 1.320 0.660 164.948 ＜0.01
D 2 0.326 0.163 40.721 ＜0.05
注：F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00
总
黄
酮
含
量
（
m
g/
g）
·72· 72
（总 ）广西中医药 2016年 2月第 39卷第 1期
壮药上树虾为兰科植物聚石
斛 Dendrobium lindleyi Stend.的全
草，又名木虾公、金黄泽、上树黄
泽、鸡背石斛等，具有润肺止咳、滋
阴养胃的功效，主治肺热咳嗽，肺
结核，哮喘，痢疾，口腔炎，胃痛，小
儿疳积等［1］。现代研究表明石斛属
植物的化学成分主要有生物碱类、
多糖类、苷类、黄酮类、倍半萜类、
香豆素类以及甾体糖苷类化合物
等［2］，其中多糖成分是石斛增强免
疫、抗肿瘤［ 3］和降血糖［ 4］作用
的主要活性成分。上树虾为常用壮
药［5］，为完善其质量控制，本文采
用紫外-可见分光光度法测定其多
糖的含量，结果如下。
1 实验材料
1.1 仪器 Agilent8453 紫外-可
见分光光度仪（美国安捷伦科技公
司）；HH-S6电热恒温水浴锅（金
坛市医疗仪器厂）；FA1104电子分
析天平（上海精科天平）；LD24-1.2
离心机（北京医用离心厂）。
1.2 试剂 D-无水葡萄糖对照品
（供含量测定用，中国食品药品检
定研究院，批号：110833-201205）；
其余试剂均为分析纯。
1.3 药材 上树虾药材采自广西
各地，经广西中医药大学蔡毅教授
鉴定为兰科植物聚石斛 Dendrobi－
um lindleyi Stend.的全草。
2 实验方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液的制备 取上
树虾粉末 0.4 g（过 40目筛），精密
称定，精密加入蒸馏水 120 ml，称
基金项目：《广西壮药质量标准（第三卷）》质量评价与标准研究项目（编号：MZY
2013019）
*通信作者，教授，主要从事中药及民族药品种鉴定与开发利用工作，E-mail：Caiyi
118@163.com
紫外分光光度法测定壮药
上树虾的多糖含量
曾祥燕 颜萍花 唐玉荣 蔡 毅 *
广西中医药大学 530001 南宁市明秀东路 179号
摘 要 目的：建立壮药上树虾中多糖的含量测定方法，并对广西不
同产地的 11批上树虾样品中的多糖进行含量测定。方法：采用紫外-可
见分光光度法，以 D-无水葡萄糖为对照品，以苯酚-浓硫酸为显色系统，
检测波长为 485 nm。结果：D-无水葡萄糖溶液浓度在 0.0126～0.2516 mg/ml
范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程为：Y=11.172X（r=0.9997），11
批上树虾样品中的多糖含量在 2.21%～5.29%之间。结论：该方法灵敏，精
密度高，重现性好，结果准确，可作为上树虾药材中多糖的含量测定方法。
关键词 上树虾；多糖；紫外-可见分光光度法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A
文章编号：1003-0719（2016）01-0073-03
参考文献
［1］赵运林，喻勋林，傅晓华.湖南药用植
物资源［M］.长沙：湖南科学技术出
版社，2009：446-447.
［2］潘星星. 冠盖藤抗癌镇痛实验研究
［D］.长沙：湖南中医药大学，2013.
［3］秦莉花，钟华美，陈晓阳，等.冠盖藤
的抗炎镇痛作用［J］.中国老年学杂
志，2014，34（2）：429.
［4］李咏梅，佘朋桂，肖冰梅.星毛冠盖藤
不同药用部位的高效液相色谱分析
［J］. 中国民族民间医药，2013，22
（18）：17.
［5］刘星雨，周敏，孙体健.天然黄酮类化
合物的药理活性及分离提取［J］.中
国药物与临床，2014，14（5）：621.
［6］国家药典委员会.中华人民共和国药
典：一部［S］.北京：中国医药科技出
版社，2010：附录 130.
［7］韦丁，陈健.香菇多糖含量测定过程
中加样回收率的比较［J］.食品研究
与开发，2010，31（10）：155.
［8］刘文卿.实验设计［M］.北京：清华大
学出版社，2005：84-86.
［9］匡海学.中药化学实验方法学［M］.北
京：人民卫生出版社，2012：209-215.
（2015－12－29 收稿/编辑陈明伟）
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