全 文 ：收稿日期:2013-11-11
作者简介:王吉文(1989-) ，男，在读硕士研究生，专业方向:中药质量控制与分析;Tel:13751757695，E-mail:wangjiwenlj@ 136. com。
* 通讯作者:房志坚，Tel:0760-88207998，E-mail:jian139@ tom. com。
HPLC测定铁包金不同部位中蒽醌类成分的含量
王吉文1，房志坚1* ，成金乐2，严寒静1
(1. 广东药学院，广东 广州 510006;2. 中山市中智药业集团有限公司，广东 中山 528437)
摘要 目的:建立 HPLC 同时测定铁包金不同部位中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法:色谱柱为迪
马 ODS C18(250 mm ×4. 6 mm，5μm) ;流动相为甲醇-0. 2%磷酸溶液(74∶ 26) ;流速:1. 0 mL /min;柱温:35 ℃;检测
波长:254 nm。结果:大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在进样量为 0. 00201 ～ 0. 0804 μg(r = 0. 9998) ，0. 0066 ～
0. 264 μg(r = 0. 9997) ，0. 0124 ～ 0. 496(r = 0. 9998)范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为
100. 43%、101. 29%、98. 36%。铁包金根的总蒽醌含量高于藤茎。结论:该方法简便、重复性好，结果准确可靠，可
用于铁包金药材的质量控制。
关键词 铁包金;大黄素;大黄酚;大黄素甲醚;含量测定;药用部位
中图分类号:Ｒ282. 6 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)06-0957-04
Determination of Anthraquinones from Different Medicinal Parts of Berchemia lineata by HPLC
WANG Ji-wen1，FANG Zhi-jian1，CHENG Jin-le2，YAN Han-jing1
(1. Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China;2. Zhongshan Zhongzhi Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Zhong-
shan 528437，China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method for determination of emodin，chrysophanol and physcion from different medici-
nal parts of Berchemia lineata. Methods:Samples were analyzed on Diamonsil ODS C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，with the mobile
phase consisted of methanol-0. 20% phosphoric acid solution(74∶ 26). The flow rate was 1. 0 mL /min，column temperature was set at
35 ℃，and detection UV wavelength was 254 nm. Ｒesults:The linear range of emodin，chrysophanol and physcion was 0. 00201 ～
0. 0804 μg，0. 0066 ～ 0. 264 μg and 0. 0124 ～ 0. 496 μg，with the average recovery was 100. 43%，101. 29% and 98. 36%，respective-
ly. The content of total anthraquinones in root was higher than that in taten of Berchemia lineata. Conclusion:The method is simple，ac-
curate and reliable for quality control of Berchemia lineata.
Key words Berchemia lineata (L.)DC.;Emodin;Chrysophanol;Physcion;Assay;Medicinal part
铁包金为鼠李科勾儿茶属植物细叶勾儿茶
Berchemia lineata (L. )DC. 的根或藤茎，味苦，性
平，有止咳、祛痰、散疼之功效，广泛用于痈疽疔毒、
咳嗽咯血、消化道出血、跌打损伤、烫伤、风湿骨痛、
风火牙痛等症〔1〕。现代研究表明铁包金在抗肝损
伤〔2〕、抗肿瘤〔3〕、抗炎镇痛〔4〕等方面具有明显作用。
据报道，铁包金质量评价所选指标性成分主要为黄
酮类化合物槲皮素〔5〕。近年来，化学成分研究发现
铁包金中含有大量蒽醌类化合物〔6〕，蒽醌类化合物
具有较强的抗炎、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、保肝、利胆、
镇痛等生物活性〔7〕。本实验对铁包金根、藤茎部位
含有的蒽醌类成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚水解
前后的含量分别进行了测定，旨在为其质量综合评
价提供新的参考。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) ;
CP225D型电子天平(德国 Sartorius 公司) ;KQ-500
型超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)。
大黄素(批号:110756-200110)、大黄酚(批号:
110796-200311)、大 黄 素 甲 醚 (批 号:110758-
200307)对照品均购自中国食品药品检定研究院。
甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
铁包金药材经笔者房志坚副教授鉴定均为鼠李
科勾儿茶属植物细叶勾儿茶 Berchemia lineata (L. )
DC. 的根与茎藤，样品来源信息见表 1。
表 1 铁包金样品来源
样品编号 采集地 采集时间 品种
1 广东广州 2013. 9 栽培
2 广东中山 2012. 12 野生
3 广东封开 2013. 8 野生
4 广东怀集 2012. 11 野生
5 广东化州 2013. 2 野生
6 广东清远 2012. 9 野生
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 迪马 ODS C18色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm，5μm) ;流动相 ∶ 甲醇-0. 2% 磷酸溶液
·759·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2014.06.002
(74∶ 26) ;流速:1. 0 mL / min;进样量:20 μL;柱温:
35 ℃;检测波长:254 nm。理论板数按大黄素色谱
峰计不得低于 5 000。此色谱条件下，供试品溶液色
谱图中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均得到较好分
离。混合对照品和铁包金样品色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)与铁包金样品根(B)、
藤茎(C)的 HPLC图
1. 大黄素 2. 大黄酚 3. 大黄素甲醚
2. 2 对照品溶液的制备 取大黄素、大黄酚、大黄
素甲醚对照品适量，精密称定，置于 10 mL 量瓶中，
用甲醇溶解并定容，混匀，得混合对照品溶液Ⅰ，其
中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚浓度分别为 4. 0、
13. 2、24. 8 μg /mL。再分别取大黄素、大黄酚、大黄
素甲醚对照品适量，精密称定，置于 10 mL 量瓶中，
用甲醇溶解并定容，混匀，得混合对照品溶液Ⅱ，其
中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚浓度分别为 1. 6、
5. 0、22. 3 μg /mL。
2. 3 供试品溶液的制备
2. 3. 1 游离蒽醌供试品溶液的制备:分别取铁包
金根与藤茎粉末(过二号筛)2. 0 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，加甲醇 40 mL，称定重量，超声(500 W，
45 kHz)5 min后水浴回流 1 h，放冷，再称定重量，用
甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液 15 mL，
挥去溶剂，加水 10 mL混悬后，用氯仿萃取 5 次(前
2 次每次 20 mL，后 3 次每次 10 mL) ，合并氯仿液，
蒸干，残渣加甲醇溶解转移至 10 mL量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，即得。
2. 3. 2 总蒽醌供试品溶液的制备:精密量取
“2. 3. 1”项下续滤液 15 mL，置具塞锥形瓶中，挥去
溶剂，分别加入 20 mL水与 2 mL 浓盐酸，超声处理
1 min，加入 20 mL氯仿，加热回流 1 h，放冷，置分液
漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分
取氯仿层，酸液继续用氯仿萃取 3 次，每次 15 mL，
合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇溶解转移至 10 mL量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系与检测限、定量限考察:取混合对
照品溶液Ⅰ0. 5、1、4、8、12、16、20 μL 进样，测定其
峰面积，以进样量(10 －2 μg)为横坐标，峰面积为纵
坐标，绘制标准曲线。将对照品溶液稀释至 S /N = 3
时确定各成分的检测限，S /N = 10 时确定各成分的
定量限。3 种成分的回归方程、线性范围、检测限、
定量限见表 2。
表 2 线性关系测定结果
组分 回归方程 r 线性范围 /10 －2μg 检测限 /ng 定量限 /ng
大黄素 Y = 3056973. 88X － 5846. 52 0. 9998 0. 201 ～ 8. 04 1. 0 2. 9
大黄酚 Y = 4067159. 38X － 10214. 57 0. 9997 0. 66 ～ 26. 4 0. 5 1. 4
大黄素甲醚 Y = 1347754. 82X － 15785. 52 0. 9998 1. 24 ～ 49. 6 2. 2 5. 9
2. 4. 2 精密度试验:精密吸取混合对照品溶液Ⅱ
20 μL，连续重复进样 6 次，结果大黄素、大黄酚、大
黄素甲醚峰面积的 ＲSD 分别为 0. 65%、0. 70%、
0. 43%。结果表明，仪器精密度良好。
2. 4. 3 稳定性试验:精密吸取铁包金(广东封开)
根按“2. 3. 2”项下的方法制备供试品溶液，于 0、2、
4、6、8、12 h进样，依法测定，结果总蒽醌测定中大黄
素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的 ＲSD 分别为
0. 98%、1. 06%、1. 67%。结果表明，供试品溶液在
12 h内稳定。
2. 4. 4 重复性试验:精密称取铁包金(广东封开)
根样品 6 份，每份 2. 0 g，按“2. 3. 2”项下的方法制备
供试品溶液，进样，依法测定，结果总蒽醌测定中大
黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的 ＲSD 分别为
1. 73%、2. 22%、1. 49%。结果表明，本方法重复性
较好。
2. 4. 5 加样回收率试验:取已知含量的铁包金(广
东封开)根样品 6 份，每份约 1. 0 g，精密称定，置于
锥形瓶中，精密加入混合对照品溶液Ⅱ5 mL，按
“2. 3. 2”项下的方法制备供试品溶液，精密吸取各
供试品溶液 20 μL依法测定，记录峰面积，计算。结
果见表 3。
2. 5 样品含量测定 取 6 批铁包金样品，按“2. 3”
项下分别制备测定游离蒽醌的供试品溶液与测定总
·859· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月
表 3 大黄素、大黄酚、大黄素甲醚加样回收率测定结果
成分 样品含量 /μg 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
大黄素 8. 0999 8. 04 16. 2152 100. 94 100. 43 1. 95
7. 9081 8. 04 15. 9043 99. 46
7. 9445 8. 04 15. 8726 98. 61
8. 0373 8. 04 16. 3186 103. 00
7. 8047 8. 04 15. 7067 98. 28
8. 0935 8. 04 16. 3176 102. 29
大黄酚 30. 0957 25. 80 55. 6473 99. 04 101. 29 2. 23
30. 2113 25. 80 56. 8180 103. 13
30. 0987 25. 80 56. 4265 102. 05
29. 8089 25. 80 55. 8763 101. 04
28. 1583 25. 80 55. 0123 104. 09
30. 0535 25. 80 55. 4325 98. 37
大黄素甲醚 113. 2330 111. 60 223. 9842 99. 24 98. 36 1. 49
113. 4360 111. 60 223. 1643 98. 32
109. 4278 111. 60 218. 0612 97. 34
112. 7561 111. 60 219. 9937 96. 09
111. 3234 111. 60 223. 1563 100. 21
113. 0571 111. 60 223. 4768 98. 94
表 4 不同产地不同部位铁包金药材样品蒽醌类成分含量(mg/g)
采集地 采集部位
大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
游离 结合 游离 结合 游离 结合
总蒽醌
广东广州 根 0. 0057 0. 0048 0. 0099 0. 0278 0. 0219 0. 1219 0. 1919
广东中山 根 0. 0064 0. 0035 0. 0511 0. 0445 0. 0896 0. 2370 0. 4322
广东封开 根 0. 0085 0. 0018 0. 0181 0. 0170 0. 0633 0. 0739 0. 1825
广东怀集 根 0. 0131 0. 0139 0. 0320 0. 0471 0. 1255 0. 2128 0. 4444
广东化州 根 0. 0118 0. 0037 0. 0270 0. 0292 0. 1036 0. 1286 0. 3040
广东清远 根 － 0. 0027 0. 0087 0. 0605 － 0. 1078 0. 1796
广东广州 藤茎 － 0. 0124 － 0. 0033 － － 0. 0157
广东中山 藤茎 0. 0027 0. 0060 0. 0077 0. 0077 0. 0246 0. 0390 0. 0876
广东封开 藤茎 0. 0031 0. 0030 0. 0073 0. 0085 0. 0182 0. 0323 0. 0724
广东怀集 藤茎 － 0. 0044 0. 0046 0. 0054 － 0. 0188 0. 0331
广东化州 藤茎 0. 0053 0. 0094 0. 0083 0. 0073 － 0. 0218 0. 0522
广东清远 藤茎 0. 0021 0. 0159 0. 0056 0. 0046 － 0. 0215 0. 0497
注:“ －”表示含量低于检测限
蒽醌的供试品溶液，进样，测定峰面积，计算含量。
结果见表 4。
3 讨论
3. 1 本实验曾采用甲醇、甲醇-25%盐酸(4 ∶ 1)回
流提取的方法进行测定，结果图谱杂质峰干扰大，与
待测成分分离不够理想，最终确定采用甲醇回流提
取后，氯仿萃取、加酸水解萃取的方法分别测定游离
蒽醌与总蒽醌的含量。流动相考察了甲醇-水、甲
醇-磷酸不同比例等度与梯度洗脱，结果表明当流动
相为甲醇-0. 2%磷酸溶液(74 ∶ 26)时，图谱基线平
稳，分离度好，样品峰形对称。
3. 2 由表 4 结果可知，6 批铁包金样品根部位总蒽
醌含量明显高于藤茎部位，其中大黄素甲醚含量最
高，其次为大黄酚、大黄素。总体规律明显能得出，
根部位中大黄素甲醚与藤茎部位中大黄素甲醚多以
结合态存在。综合各地根、藤茎部位总蒽醌含量来
看，广东中山(根 0. 4322 mg /g;茎 0. 0876 mg /g)最
高，广东广州(根 0. 1919 mg /g;茎 0. 0157 mg /g)最
低，除各地生长环境不同外，推测其原因很可能与生
长年限密切相关，其中广东中山采集的样品最粗壮，
广东广州采集的样品最为幼小。
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参 考 文 献
［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 中华本草
［M］．第五册 . 上海:上海科学技术出版社，1999:232-
234.
［2］吴玉强，邓家刚，钟正贤，等 . 铁包金提取物抗肝损伤作
用的研究［J］．时珍国医国药，2009，20(4) :854-855.
［3］陈小龙 . 铁包金抗肿瘤作用研究［D］．武汉:中南民族
大学，2011.
［4］吴玉强，杨兴，邓家刚，等 . 铁包金提取物镇痛抗炎作用
的研究［J］．时珍国医国药，2008，19(4) :825-826.
［5］张荣祥，阮婧华，王道平 . 反相高效液相色谱法测定铁
包金中槲皮素的含量［J］．贵州教育学院学报，2009，20
(12) :4-6.
［6］张国利，滕红丽，陈科力 . 壮药铁包金的化学成分及药
理作用研究进展［J］．中国医药导报，2011，8(6) :5-8.
［7］ 南海江，许旭东，陈士林，等 . 大黄属植物研究进展
［J］．天然产物研究与开发，2009，21(4) :690-701.
收稿日期:2013-10-08
基金项目:吉林省科技支撑计划重点项目(20100928)
* 通讯作者:张克勤，Tel:0432-63509641，E-mail:kqzhang01@ hotmail. com。
野生与栽培乌腺金丝桃不同部位中总黄酮及芦丁的含量变化
刘 潼1，张南翼2，常桂英1，3，肖凤艳1，3，张克勤1，3*
(1. 吉林农业科技学院，吉林 吉林 132101;2. 东北师范大学生命科学学院，吉林 长春 130024;3. 长白山
动植物资源利用与保护吉林省高校重点实验室，吉林 吉林 132101)
摘要 目的:测定野生与栽培乌腺金丝桃不同部位中总黄酮及芦丁的含量。方法:采用乙醇超声提取法提取
乌腺金丝桃不同部位总黄酮及芦丁，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定栽培和野生乌
腺金丝桃(叶、茎、花)中的总黄酮含量。结果:乌腺金丝桃不同部位中总黄酮含量有很大差异，其中野生乌腺金丝
桃中含量大小为叶 ＞花 ＞茎;栽培乌腺金丝桃中含量大小为叶 ＞花 ＞果 ＞茎，栽培乌腺金丝桃各部位中总黄酮含
量均大于野生乌腺金丝桃各部位中总黄酮含量，但未达到统计学上显著水平，而芦丁含量均达到极显著差异。结
论:乌腺金丝桃不同部位黄酮含量有差异，其中叶中含量最高，茎中最少;栽培乌腺金丝桃含量高于野生乌腺金丝
桃。
关键词 乌腺金丝桃;总黄酮;芦丁;含量
中图分类号:Ｒ282. 6 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)06-0960-04
Changes of Total Flavonoids and Ｒutin Contents in Different Parts of
Wild and Cultivated Hypericum attenuatum
LIU Tong1，ZHANG Nan-yi2，CHANG Gui-ying1，3，XIAO Feng-yan1，3，ZHANG Ke-qin1，3
(1. Jilin Agricultural Science and Technology College，Jilin 132101，China;2. College of Life Science，Northeast Normal University，
Changchun 130024，China;3. Jilin Province High School Key Laboratory of Utilization and Protection of Animal and Plant Ｒesources in
Changbai Mountain，Jilin 132101，China)
Abstract Objective:To determine the content of total flavonoids and rutin in different parts of wild and cultivated Hypericum at-
tenuatum. Methods:Ethanol ultrasonic extraction method was used to extract total flavonoids and rutin in different parts of Hypericum at-
tenuatum． With rutin as reference substance，UV spectrophotometry and high performance liquid chromatography were applied to deter-
mine the total flavonoids and rutin content in Hypericum attenuatum samples(leaves，stems and flowers). Ｒesults:There were great
differences between the total flavonoids in different parts of Hypericum attenuatum that the content of flavonoids in the wild one was
leaves ＞ flowers ＞ stems;The content of flavonoids in the cultivated was leaves ＞ flowers ＞ fruits ＞ stems. The content of flavonoids in
each part of cultivated Hypericum attenuatum was higher than that in the wild，but did not reach a statistically significant level，while the
difference of content of rutin was extremely significant. Conclusion:There are differences between the content of flavonoids in different
parts of Hypericum attenuatum. The highest content is found in leaves and the lowest in stems． The content of flavonoids in cultivated
Hypericum attenuatum is higher than that in the wild.
Key words Hypericum attenuatum Choisy;Total flavonoids;Ｒutin;Content
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