全 文 ：中药罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌ＴＡＣＥ后ＶＥＧＦ和
Ｂｃｌ－２表达的影响
冯兵１，２，３，朱莹２，３，贺嵩敏２，３，朱亚珍２，郑广娟２，３＊
（１．广州中医药大学第二临床医学院，广东 广州　５１０００６；２．广东省中医院中药药理实验室，广东 广州　５１０１２０；３．广东省中
医药科学院中药药理实验室，广东 广州　５１０００６）
摘要：目的　观察罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌经肝动脉化疗栓塞术（ＴＡＣＥ）后细胞中 ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达的影响，探讨罗勒
胶囊对肝肿瘤ＴＡＣＥ后乏氧微环境的影响及意义。方法　建立大鼠移植性肝癌模型，１０ｄ后将造模成功的大鼠随机分为５
组。对ＴＡＣＥ＋生理盐水组和ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高、中、低剂量组４组大鼠进行ＴＡＣＥ，并分别给予生理盐水１０ｍＬ／（ｋｇ·ｄ）
和罗勒胶囊３００、１５０、７５ｍＬ／（ｋｇ·ｄ）ｉｇ，对非ＴＡＣＥ对照组大鼠只进行开腹操作，不进行ＴＡＣＥ。给药１０ｄ后取出移植性肝
癌病理标本，免疫组化法检测肿瘤组织中ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达情况。结果　瘤质量：行ＴＡＣＥ的４组大鼠与非ＴＡＣＥ组比较
均明显减轻（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高剂量组较ＴＡＣＥ＋生理盐水组显著减轻（Ｐ＜０．０５）；ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２阳
性表达率：ＴＡＣＥ＋生理盐水组与非ＴＡＣＥ组比均显著升高（Ｐ＜０．０１）；ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高、中、低剂量组较ＴＡＣＥ＋生理盐
水组显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高剂量组较ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊中、低剂量组显著降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。结论
　中药罗勒胶囊能改善肝肿瘤局部的乏氧微环境并促进细胞凋亡，使肿瘤组织中ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达降低，抑制大鼠移植性
肝癌ＴＡＣＥ术后肿瘤的侵袭和转移。
关键词：罗勒胶囊；大鼠移植性肝癌；经肝动脉化疗栓塞术；血管内皮生长因子；凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２
中图号：Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－０４８２（２０１３）０２－０１４６－０５
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｂａｓｉｌ　Ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｏｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２　ｆｏｒ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　Ｌｉｖｅｒ　Ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｆｔｅｒ　ＴＡＣＥ
ＦＥＮＧ　Ｂｉｎｇ１，２，３，ＺＨＵ　Ｙｉｎｇ２，３，ＨＥ　Ｓｏｎｇ－ｍｉｎ２，３，ＺＨＵ　Ｙａ－ｚｈｅｎ２，ＺＨＥＮＧ　Ｇｕａｎｇ－ｊｕａｎ２，３＊
（１．Ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０００６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０１２０，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａ－
ｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，５１０００６，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２ｆｏｒ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｌｉｖｅｒ
ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｒａｎｓｃａｔｈｅｔｅｒ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ（ＴＡＣＥ）ａｎｄ　ｔｏ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐ－
ｓｕｌｅｓ　ｏｎ　ｈｙｐｏｘｉａ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ａｆｔｅｒ　ＴＡＣＥ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｈｅｐａｔｏｍａ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｈｅｐａｔｏｍａ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂ－
ｌｉｓｈｅｄ．Ｔｅｎ　ｄａｙｓ　ｌａｔｅｒ，ｔｈｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｉｖｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｒａｎｄｏｍｌｙ．Ｔｈｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ＴＡＣＥ　ａｎｄ　ｓａｌｉｎｅ（Ａ），
ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ＴＡＣＥ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ（Ｂ），ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ＴＡＣＥ　ａｎｄ　ｍｏｄｅｒａｔｅ－ｄｏｓｅ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ（Ｃ），ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ＴＡ－
ＣＥ　ａｎｄ　ｌｏｗ－ｄｏｓｅ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ（Ｄ）ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　１０ｍＬ／ｋｇ／ｄ　ｓａｌｉｎｅ，３００ｍｇ／ｋｇ／ｄ／Ｌｕｏｌｅ　ｃａｐｓｕｌｅ，１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｂａｓｉｌ
ｃａｐｓｕｌｅ　ａｎｄ　７５ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｆｉｆｔｈ　ｇｒｏｕｐ（Ｅ）ａｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｊｕｓｔ　ｗｉｔｈ　ｌａｐａｒｏｔｏｍｙ．
Ａｆｔｅｒ　ｔｅｎ　ｄａｙｓ　ｏｆ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｐｅｃｉｍｅｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｗａｓ　ｔａｋｅｎ　ｏｕｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ
ＶＥＧＦ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２ｉｎ　ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ａｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｉｇｈｔ，ｇｒｏｕｐ
Ａ，Ｂ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ　ｗｅｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｓｍａｌｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｇｒｏｕｐ　Ｅ（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｌｉｇｈｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ
ｇｒｏｕｐ　Ａ （Ｐ＜０．０５）．Ａｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２，ｂｏｔｈ　ｇｒｏｕｐ　Ａ　ａｎｄ　Ｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．
０１）；ｇｒｏｕｐｓ　Ｂ，Ｃ　ａｎｄ　Ｄ　ｖｉｓｉｂｌｙ　ｄｅｃｅａｓｅｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｇｒｏｕｐ　Ａ（Ｐ＜０．０１）；ｇｒｏｕｐｓ　Ｂ　ｗａｓ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ
ｏｆ　ｇｒｏｕｐｓ　Ｄ　ａｎｄ　Ｅ（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅｓ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｈｙｐｏｘｉａ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｏｃａｌ　ｐａｒｔ　ｏｆ
ｒａｔ　ｈｅｐａｔｏｍａ，ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｄｅｐｒｅｓｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ　ｏｆ
ｔｕｍｏｒ　ａｆｔｅｒ　ＴＡＣＥ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｂａｓｉｌ　ｃａｐｓｕｌｅ；ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｒａｔｓ；ＴＡＣＥ；ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｇｅｎｅ　Ｂｃｌ－２
—６４１—
南京中医药大学学报２０１３年３月第２９卷第２期
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＮＡＮＪＩＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＣＭ　Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．２　Ｍａｒ．２０１３
收稿日期：２０１３－０１－１１；修稿日期：２０１３－０２－２２
基金项目：国家自然科学基金（８１２０２９６０／Ｈ２８１０）；广东省中医药局科研项目（２０１２２１４４）
作者简介：冯兵（１９８３－），男，湖北十堰人，广州中医药大学２０１２级博士研究生，广东省中医院助理研究员。＊通信作者：ｚｈｅｎｇｇｕａｎｇｊｕａｎ＠
１６３．ｃｏｍ
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2013.02.016
　　肝细胞癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前
主要以手术治疗为主，但长期治疗效果不佳。经导
管肝动脉化疗栓塞术（ｔｒａｎｓｃａｔｈｅｔｅｒ　ａｒｔｅｒｉａｌ　ｃｈｅ－
ｍｏｅ－ｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ，ＴＡＣＥ）作为肝癌非手术治疗的主
要手段之一应用广泛，但其５年生存率仍然较低［１］。
研究表明，ＴＡＣＥ治疗后，肿瘤局部出现乏氧状态，
乏氧可诱导多种基因、蛋白如乏氧诱导因子－ｌα、凋
亡抑制基因Ｂｃｌ－２、血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）等的
表达而促进肿瘤局部血管的新生、抑制肿瘤细胞的
凋亡［２］。肝细胞癌的肿瘤中央由肝动脉供血，周边
则由肝动脉及门静脉双重供血，ＴＡＣＥ后肝动脉被
栓塞，血供减少，但肿瘤细胞未达到完全坏死，残存
的肿瘤细胞受缺血、缺氧作用使 ＶＥＧＦ分泌增加，
促进新生血管的生成，与门静脉形成侧支循环，增加
了转移的机会。研究发现活血化瘀中药能改善肿瘤
局部乏氧状态，促进细胞凋亡，对放疗、化疗有增效
作用［３］。罗勒胶囊的主要成分为罗勒多糖，罗勒多
糖是从活血化瘀中药罗勒中提取的有效成分，前期
研究发现其对几种移植瘤模型具有抗转移作用［４］。
本实验通过对移植性肝癌大鼠进行 ＴＡＣＥ后用罗
勒胶囊进行治疗，检测肿瘤细胞中ＶＥＧＦ和凋亡抑
制基因Ｂｃｌ－２表达，探讨罗勒胶囊对肝肿瘤局部血
管新生和细胞凋亡的调节作用，阐明其对肿瘤侵袭
转移干预的作用机制。
１　材料
１．１　动物与瘤株
ＳＰＦ级 Ｗｉｓｔａｒ大鼠８０只，雌性，体质量（２００±
３０）ｇ，购于山东中医药大学实验动物中心，合格证
号：ＳＣＸＫ（鲁）２００８００１５。肿瘤细胞 Ｗａｌｋｅｒ－２５６瘤
株购于上海医药工业研究院。
１．２　药物与试剂
罗勒胶囊（本实验室从中药罗勒中分离提取精
制取得）。超液态碘油（上海华联制药有限公司，批
号：２０００８０４１３）。５－Ｆｕ注射液（０．０２５ｇ／ｍＬ）（上海
旭东海普药业公司生产，批号：０７０３０５）。Ａｎｔｉ－Ｂｃｌ－２
（ｂｓ－００３２Ｒ）、Ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ（ｂｓ－１３１３Ｒ）（北京博奥森
生物技术有限公司生产）。ＳＰ－９００１免疫组化试剂
盒（批号：Ｋ８２７２１Ｅ）、ＤＡＢ 显色试剂盒 （批 号：
３７５２３０ＡＪ，北京中杉金桥生物有限公司生产）。
１．３　仪器
倒置相差显微镜（日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ，ＸＤＳ－２００Ｄ），
电子天平（上海精科天平厂，ＹＰ６００），台式离心机
（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，ＭＯＤＥＬ５８０４），电热干燥箱（重庆
实验仪器设备厂，ＣＳ１０１－１ＤＳ），石蜡切片机（德国莱
卡，ＬＥＩＣＡ－ＲＭ２１３５），控温水浴箱（上海苏达实验
仪器有限公司，ＧＫＣ）。
２　方法
２．１　动物模型的建立
将 Ｗａｌｋｅｒ－２５６瘤株接种于传代 Ｗｉｓｔａｒ大鼠右
后肢内侧皮下，一周后皮下长出肿瘤结节者待用。
无菌条件下取出实体瘤，切成１ｍｍ３ 大小的碎块备
用。将８０只实验大鼠腹腔麻醉，打开腹腔，暴露肝
脏，用眼科镊刺破肝包膜，于肝表面成３０°刺入３～５
ｍｍ，形成一隧道，然后将取出的瘤块植入，用小块
明胶海绵封堵创口，压迫止血待无持续岀血后逐层
关腹，消毒手术切口［５］。术后１０ｄ经超声监测选取
符合条件的肿瘤长至１ｃｍ的６５只大鼠。
２．２　带瘤大鼠经肝动脉化疗栓塞术（ＴＡＣＥ）治疗
将造模成功的６５只大鼠，随机分为５组，每组
１３只：非ＴＡＣＥ对照组、ＴＡＣＥ＋生理盐水组、ＴＡ－
ＣＥ＋罗勒胶囊高剂量组、ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊中剂量
组、ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊低剂量组。对 ＴＡＣＥ４组大
鼠进行ＴＡＣＥ，对非ＴＡＣＥ对照组大鼠只进行开腹
操作，不进行ＴＡＣＥ。沿上次手术切口逐层剪开腹
腔，在手术显微镜下，用眼科弯镊分离肝总动脉和胃
十二指肠动脉，经胃十二指肠动脉将自制的微导管
插至肝固有动脉内，经导管分别注入５－Ｆｕ　２０ｍｇ／
ｋｇ，加超液态碘油０．５ｍＬ／ｋｇ，术后拔管，结扎胃十
二指肠动脉近端，分笼饲养［６－７］。ＴＡＣＥ成功后，对
ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高、中、低剂量组分别ｉｇ罗勒胶
囊３００、１５０、７５ｍＬ／（ｋｇ·ｄ），ＴＡＣＥ＋生理盐水组
给予生理盐水１０ｍＬ／（ｋｇ·ｄ），非ＴＡＣＥ组不予用
药，连续ｉｇ　１０ｄ。由于手术过程复杂及感染等原因，
部分大鼠死亡。取出移植肿瘤肝叶，剥离肿瘤，称质
量。免疫组化法检测肿瘤组织中ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２的
表达。
２．３　免疫组织化学的检测与判定
采用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶连结法
（ＳＰ）进行免疫组化染色，操作步骤按照试剂盒说明
进行，以已知阳性组织切片为阳性对照。光镜下观
察并拍照，每组３０个视野计数表达ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２
的瘤细胞数，计算阳性细胞表达百分率。ＶＥＧＦ表
达阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰，细胞浆（部分
细胞核）内有棕褐色颗粒沉着。Ｂｃｌ－２表达产物主要
位于细胞浆，少数细胞核染色，染色阳性呈棕黄色。
２．４　统计学处理
—７４１—冯兵，等：中药罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌ＴＡＣＥ后ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达的影响　第２期
实验数据采用统计软件包ＳＰＳＳ１３．０进行统计
分析处理，以珚ｘ±ｓ表示，采用单因素方差分析，Ｐ
＜０．０５有统计学意义。
３　结果
３．１　形态观察
５组荷瘤大鼠的肝叶均见肿瘤生长，呈圆形，结
节状，无包膜，灰白色，鱼肉样，质硬。肿瘤称质量，
与非ＴＡＣＥ组比较，ＴＡＣＥ各组瘤质量均减轻，有
显著性差异（Ｐ＜０．０５）；各ＴＡＣＥ组间，ＴＡＣＥ＋罗
勒高剂量组与ＴＡＣＥ＋生理盐水组比较有显著性差
异（Ｐ＜０．０５）；ＴＡＣＥ＋罗勒中、低剂量组与ＴＡＣＥ
＋生理盐水组比较，无显著性差异（表１）。表明罗
勒胶囊可以降低ＴＡＣＥ术后大鼠肝癌瘤质量，对术
后大鼠移植性肝癌细胞增殖有抑制作用，且与用药
剂量有一定关系。
表１　各实验组大鼠移植性肝癌瘤质量（珚ｘ±ｓ，ｇ）
组别 ｎ
剂量／
（ｍＬ·ｋｇ－１）
瘤质量
非ＴＡＣＥ对照组 １１ － ３．２９５±０．８７６
ＴＡＣＥ＋生理盐水组 ９ － ２．５４０±０．６９１＊
ＴＡＣＥ＋罗勒高剂量组９　 ３００．００　 １．９２４±０．５１５＊＊△
ＴＡＣＥ＋罗勒中剂量组１０　 １５０．００　 ２．３９６±０．６２８＊
ＴＡＣＥ＋罗勒低剂量组９　 ７５．００　 ２．４５８±０．７３５＊
　　注：与非ＴＡＣＥ对照组比较，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；与ＴＡ－
ＣＥ＋生理盐水组比较，△Ｐ＜０．０５。
３．２　ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２的表达
光镜下观察切片，ＶＥＧＦ的表达产物主要定位
于细胞浆（部分细胞核），染色呈棕褐色颗粒，多集中
在肿瘤血管周围，与新生血管的分布有较好的一致
性，染色明显高于背景（图１）。各实验组肿瘤组织
ＶＥＧＦ免疫组化表达结果见表２。
　 　 　
　　　　　　　阳性对照片　　　　　　　　阴性对照片　　　　　　　非ＴＡＣＥ组　　　　　 ＴＡＣＥ＋生理盐水组
　 　
　　　　　　　　　　　ＴＡＣＥ＋罗勒高剂量组　　　ＴＡＣＥ＋罗勒中剂量组　　ＴＡＣＥ＋罗勒低剂量组
图１　免疫组化法检测肝肿瘤组织中ＶＥＧＦ的表达（×１００）
　　Ｂｃｌ－２的表达产物主要位于细胞浆，少数细胞核
染色，染色阳性呈棕黄色，在瘤内坏死区周围及残存
癌组织中可见灶状分布的Ｂｃｌ－２阳性染色细胞，染
色明显高于背景（图２）。各实验组肿瘤组织Ｂｃｌ－２
免疫组化表达结果见表２。
　 　 　
　　　　　　　　阳性对照片　　　　　　　阴性对照片　　　　　　　非ＴＡＣＥ组　　　　　 ＴＡＣＥ＋生理盐水组
　 　
　　　　　　　　　　　ＴＡＣＥ＋罗勒高剂量组　　　ＴＡＣＥ＋罗勒中剂量组　　ＴＡＣＥ＋罗勒低剂量组
图２　免疫组化法检测肝肿瘤组织中Ｂｃｌ－２的表达（×１００）
—８４１— 南京中医药大学学报２０１３年３月第２９卷第２期
表２　各实验组肿瘤组织ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２免疫组化表达结果（珚ｘ±ｓ，％）
组别 ｎ　 ＶＥＧＦ阳性表达率 Ｂｃｌ－２阳性表达率
非ＴＡＣＥ对照组 １１　 ４０．２４±３．２１　 ４１．１６±４．１３
ＴＡＣＥ＋生理盐水组 ９　 ６２．５９±３．１３＊＊ ５９．８４±３．１６＊＊
ＴＡＣＥ＋罗勒高剂量组 ９　 ３０．４５±２．５７＊＊ △△ ３２．６３±４．１９＊＊ △△
ＴＡＣＥ＋罗勒中剂量组 １０　 ４１．６５±３．０８△△ ▲▲ ３７．２４±４．３４＊ △△ ▲
ＴＡＣＥ＋罗勒低剂量组 ９　 ５７．１４±２．６８＊＊ △△ ▲▲ ４９．２３±３．３６＊＊ △△ ▲▲
　　　　　　　　　　　　注：与非ＴＡＣＥ对照组比较，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１；与ＴＡＣＥ＋生理盐水组比较，
△△Ｐ＜０．０１；与ＴＡＣＥ＋罗勒大剂量组比较，▲Ｐ＜０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１。
４　讨论
恶性肿瘤细胞过度增殖及凋亡抑制是肿瘤细胞
的共同特征，肿瘤的无限制侵袭性增殖依赖于持续
和广泛的新生血管生成，这些新生血管网络系统为
肿瘤的生长提供充分的氧和养料，保证肿瘤细胞的
快速增殖能力［８］。肿瘤血管的生长受多种生成因子
调控，而ＶＥＧＦ是一种重要的促血管生成因子，甚
至被认为是最强的血管形成因子，由正常或肿瘤细
胞分泌产生。细胞凋亡主要由以Ｃａｓｐａｓｅ家族为代
表的凋亡活化基因和以Ｂｃｌ－２家族为代表的凋亡抑
制基因共同调控，其中Ｂｃｌ－２在多种因素诱导的凋
亡抑制中起作用，它可抑制与凋亡相关的线粒体早
期改变，其过度表达可能通过与细胞周期调节基因
相互作用而促进增殖。
ＶＥＧＦ是一种选择性促内皮细胞分裂原，能够
促进内皮细胞增殖和血管形成。同时，ＶＥＧＦ也是
重要的血管渗透因子，能增加后毛细血管和小静脉
等微小血管对大分子的通透性，引起血浆蛋白渗出
到血管间隙，外漏的纤维蛋白原凝固成纤维蛋白而
沉积，纤维蛋白可作为临时性基质支持新生血管的
生长［９］。ＶＥＧＦ还可通过旁分泌或自分泌作用刺激
肿瘤细胞生长，在肿瘤细胞中过度表达［１０］。Ｌｉｃｈｔ－
ｅｎ－ｂｅｒｇｅｒ等［１１］研究显示，ＶＥＧＦ还可诱导淋巴管
增生和扩张，使肿瘤细胞易于进人淋巴管和淋巴结
而导致淋巴道转移。
Ｂｃｌ－２基因（即Ｂ细胞淋巴瘤／白血病－２基因）
是一种原癌基因，它具有抑制凋亡的作用。其表达
产物能阻断内源性核酸内切酶的ＤＮＡ切割活性，
从而阻断细胞的程序性死亡［１２］。Ｂｃｌ－２的激活和过
表达能抑制细胞的凋亡，延长细胞的存活期。Ｂｃｌ－２
基因家族是目前发现的抗凋亡作用最强的基因之
一，它在细胞凋亡过程中处于调控机制的终末部分，
对肿瘤的发生、发展和治疗均有重要意义。
已有研究证实 ＶＥＧＦ可诱导和促进血管内皮
细胞中Ｂｃｌ－２的高表达，同时，Ｂｃｌ－２又可以抑制由
ＮＯ诱导的血管内皮细胞的凋亡，促进了血管的形
成［１３］。Ｐｉｄｇｅｏｎ等［１４］发现 ＶＥＧＦ诱导了癌细胞中
Ｂｃｌ－２的高表达，而抗ＶＥＧＦ抗体可抑制Ｂｃｌ－２的高
表达，促进了肿瘤细胞的凋亡。有文献报道［１５］在培
养人皮肤微血管内皮细胞中加入 ＶＥＧＦ后发现
Ｂｃｌ－２的表达增加了１１．２倍，而且两者剂量呈正相
关。将插入了Ｂｃｌ－２的逆转录病毒转染内皮细胞，
转染后的内皮细胞更易受生长因子刺激，内皮细胞
自发形成血管出芽结构能力增加。研究发现ＶＥＧＦ
能维持内皮细胞存活，与诱导Ｂｃｌ－２表达相关［１６］，一方
面，Ｂｃｌ－２可以通过调节血管形成因子、影响肿瘤微环境
和调控肿瘤血管内皮细胞凋亡等机制促进肿瘤血管
形成，另一方面 ＶＥＧＦ又促进凋亡抑制基因的表
达，两者之间形成正反馈，促进肿瘤的进展、转移。
本实验结果显示，对移植性肝癌大鼠行ＴＡＣＥ
后，与非 ＴＡＣＥ对照组比较，ＴＡＣＥ＋生理盐水组
肿瘤组织中ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２的的阳性表达率均明显
增强（Ｐ＜０．０１）。表明 ＴＡＣＥ造成了肿瘤局部的
乏氧，使肿瘤局部微环境中 ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达增
高，ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２产生协同作用，促进肿瘤组织血
管的新生，抑制肿瘤细胞的凋亡，为肿瘤的持续生长
提供了条件。给予罗勒胶囊治疗后，与ＴＡＣＥ＋生
理盐水组比，ＴＡＣＥ＋罗勒胶囊高、中、低剂量组
ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达率均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＴＡ－
ＣＥ＋罗勒胶囊高剂量组与ＴＡＣＥ＋罗勒中、低剂量
组比较ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达率均有显著性差别（Ｐ
＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。实验结果还显示移植性肝癌大
鼠行ＴＡＣＥ后肿瘤组织中的 ＶＥＧＦ与Ｂｃｌ－２阳性
表达呈正相关。分析其原因，可能是罗勒胶囊可以
调节肿瘤局部乏氧状况，使与肿瘤组织血管新生密
切相关的 ＶＥＧＦ和与抑制细胞凋亡相关的基因
Ｂｃｌ－２表达下降，二者产生协同作用，抑制肿瘤局部
血管的新生，促进肿瘤细胞的凋亡，从而降低了肿瘤
持续生长并发生侵袭转移的几率，且这一作用与用
药剂量有一定关系。
—９４１—冯兵，等：中药罗勒胶囊对大鼠移植性肝癌ＴＡＣＥ后ＶＥＧＦ和Ｂｃｌ－２表达的影响　第２期
综上所述，中药罗勒胶囊能明显改善大鼠移植
性肝癌ＴＡＣＥ术后肿瘤局部的乏氧微环境，使肝癌
组织中ＶＥＧＦ的表达显著下降，并下调Ｂｃｌ－２的表
达；肝肿瘤组织中 ＶＥＧＦ的表达与Ｂｃｌ－２的表达呈
正相关；经罗勒胶囊治疗大鼠术后瘤体减小，瘤质量
下降；表明罗勒胶囊可能具有改善ＴＡＣＥ后肿瘤局
部乏氧和抑制肿瘤细胞增殖的作用，且具有一定的
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（编辑：董宇）
—０５１— 南京中医药大学学报２０１３年３月第２９卷第２期