全 文 ：绿玉树茎段组织培养再生体系的建立
刘召亮，何觉民* ，陈 彪，梁钾贤 (广东海洋大学农业生物技术研究所，广东湛江 524088)
摘要 ［目的］研究绿玉树茎段组织培养再生苗的条件，确定各培养阶段的最佳培养条件，为绿玉树组培苗工厂化生产和相关研究提供
参考。［方法］以绿玉树茎段作为外植体试验材料，研究了不同培养基对萌芽率、增殖倍数、生根率的影响。［结果］萌芽培养最佳的诱
导培养基为 1 /2MS +0． 02 mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA，分化率为 89． 7%;继代培养最佳培养基为 1 /2MS +0． 02 mg /L NAA +0． 60 mg /L
6-BA +3． 00 mg /L AD，增殖倍数为5． 70;生根培养最佳培养基为1 /2MS +0． 40 mg /L NAA +0． 40 mg /L IBA，生根率达100%，移栽成活率
达 80%。［结论］初步确定了绿玉树茎段组织培养的生长条件。
关键词 绿玉树;茎段;组织培养
中图分类号 S79 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)17 －10161 －03
Establishment of Tissue Culture Regeneration Systems of Stem Segments of Euphorbia tirucalli
LIU Zhao-liang et al (Agricultural Biotechnology Institute，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，Guangdong 524088)
Abstract ［Objective］The aim was to study the conditions of tissue culture regeneration seedling by using the stem segments of Euphorbia tiru-
calli and determine the optimum culture condition of each culture stage，so as to provide references for the factory production and relative study of
tissue culture seedling of E． tirucalli．［Method］Taking the stem segments of E． tirucalli as explants，the effects of various mediums on germination
rate，multiplication coefficient and rooting rate were studied．［Result］ The optimum induction medium of germination culture was 1 /2MS +
0． 02 mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA，with differentiation rate of 89． 7%;the best subculture medium was 1 /2MS +0． 02 mg /L NAA +0． 60 mg /L
6-BA +3． 00 mg /L AD，with multiplication coefficient of 5． 70;the optimum rooting culture medium was 1 /2MS +0． 40 mg /L NAA +0. 40 mg /L
IBA，with rooting rate of 100% and transplanting survival rate of 80% ．［Conclusion］The tissue culture conditions of stem segments of E． tirucalli
were determined primarily．
Key words Euphorbia tirucalli;Stem segment;Tissue culture
基金项目 广东省科技攻关计划项目(2009B0203030092006B20201007)。
作者简介 刘召亮(1983 － )，男，山东临沂人，硕士研究生，研究方向:能
源作物育种。* 通讯作者，教授，从事作物遗传育种研究，E-
mail:hejm@ gdou． edu． cn。
收稿日期 2011-03-04
绿玉树(Euphorbia tirucalli)是被子植物门双子叶植物纲
大戟科大戟属植物，又名光棍树、橡胶大戟、光枝树、龙骨树、
神仙棒、绿珊瑚、青珊瑚、铅笔树、白乳木、牛奶树、麒麟树
等［1］。绿玉树原产非洲各国，在亚洲、欧洲、美洲和澳洲都有
引种栽培，在我国主要分布于广东、海南、云南等地［2］。绿玉
树枝条中含有丰富的白色或黄白色乳汁，具有通便利尿和治
疗水肿、肿瘤、结核、牛皮癣及催乳等功效［3 －4］。且其乳汁中
富含大戟甾醇、萜类、酯类和其他碳氢化合物，化学成分接近
或超过汽油标准，可以与其他物质混合或经简单加工成原
油，作为绿色燃料油替代石油［5 －6］。Calvin的研究指出，在不
适合生产粮食的干旱地区栽培绿玉树，每年 1 hm2 可产 10 ～
50桶油［7］。而绿玉树榨汁后的渣还可以用作沼气和造纸原
料等，具有极高的研究价值。
绿玉树在非原产地以枝条扦插繁殖，繁殖速度慢，且需
要材料多，而组织培养技术的应用可以加快繁殖效率，推动
工厂化大规模生产［8］。蒋丽娟等对绿玉树外植体的研究表
明［9］，绿玉树的萌芽和增殖依赖于昂贵的玉米素，且需要量
较大，限制了绿玉树的繁育，使其进行工厂化组培苗生产还
有一定难度。笔者对不同培养基和不同 NAA、IBA、6-BA 和
KT浓度配比对绿玉树茎段组织培养的影响进行研究［10］，以
期找到经济可行的绿玉树组培苗繁育方法。
1 材料与方法
1． 1 材料 经种质资源筛选引种自广东省徐闻县的绿玉
树，由广东海洋大学农业生物技术研究所提供。
1． 2 外植体消毒方法 9 月从田间取绿玉树当年生芽段 3
～4 cm，用流水冲洗 0． 5 h，再用稀释的 1%消佳净消毒液预
处理1 min，接种前用75%乙醇冲洗30 s，用0． 1%HgCl2 和吐
温-80处理 6 min，无菌水冲洗 6 次，然后分别接种到准备好
的培养基上。
1． 3 培养方法
1． 3． 1 萌芽培养。消毒过的绿玉树茎段切成 1 ～ 2 cm，接种
到萌芽培养基 MS + 0． 02 ～ 0． 10 mg /L NAA + 0． 60 ～ 3． 00
6-BA、MS +0． 10 mg /L NAA +0． 20 ～1． 00 mg /L KT和 1 /2MS
+0． 02 ～0． 10 mg /L NAA +0． 60 ～ 3． 00 mg /L 6-BA。培养条
件为温度 26 ～ 28 ℃，每天光照 8 ～ 10 h，光强为 3 000 lx 左
右。在接种后 24 d进行观察和统计。
1． 3． 2 增殖培养。切下萌芽培养长出的新生芽，接种到
1 /2MS +0． 02 ～ 0． 10 mg /L NAA + 0． 60 ～ 3． 00 mg /L 6-BA +
3. 00 mg /L AD培养。接种 40 d 后，从不同处理中随机抽取
20瓶，培养条件与萌芽培养相同。统计芽长≥0． 5 cm 的新
芽数量。
1． 3． 3 生根培养。当试管苗长至 4 ～ 5 片叶时，转接到
1 /2MS 0. 40 mg /L IBA、1 /2MS + 0. 40 mg /L NAA、1 /2MS +
0. 40 mg /L IBA +0. 40 mg /L NAA的生根培养基上，培养条件
与萌芽培养相同。20 d后统计根的生长状况。
1． 3． 4 驯化和移栽。绿玉树组培苗比较容易生根，当试管
苗根数 3条左右、根长 2 cm以上，将其从培养架上取下，连
同培养瓶置于有遮阴网的室外苗圃中，炼苗 3 ～ 5 d，使其尽
快适应外界环境。移栽前，用水冲洗掉培养基，移栽到装有
消过毒的基质培养杯中(营养土∶叶康 = 1∶4) ，一起放到篮子
中，并将篮子用薄膜包裹起来，保持空气湿度。移栽后 20 d
统计成活率。
2 结果与分析
2． 1 绿玉树的萌芽培养 由表 1 可知，在 MS + 0． 02 mg /L
NAA基础上，6-BA为 1． 00 mg /L时绿玉树的萌芽率稍高，为
53． 3%;在 MS +0． 10 mg /L NAA基础上，6-BA由 1. 00 mg /L
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(17):10161 － 10163 责任编辑 郑丹丹 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.17.192
增至 3． 00 mg /L时，绿玉树萌芽率降低，愈伤组织增多，堵塞
基部，影响其正常生长。在 MS +0． 10 mg /L NAA基础上，KT
分别为 0． 20、0． 60、1． 00 mg /L时，绿玉树萌芽率有降低趋势，
且萌芽率总体偏低。当培养基为 1 /2MS +0. 02 mg /L NAA +
0. 60 mg /L 6-BA 和 1 /2MS + 0． 02 mg /L NAA + 1． 00 mg /L
6-BA时，绿玉树萌芽率较高，分别为 80． 0%和 89． 7%(图
1) ，而且接种后萌动时间较其他处理短。在同样 NAA 和 6-
BA配比浓度的组合中，1 /2MS培养基上绿玉树的萌芽率均
高于 MS培养基。
图 1 外植体在 1 /2MS +0． 02 mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA培
养基上萌芽状态
Fig． 1 Germination state of explants under the medium of 1 /2
MS +0． 02 mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA
表 1 不同培养基和植物生长调节剂对绿玉树萌芽的影响
Table 1 Effects of different mediums and plant growth regulators on
the germination of E． tirucalli
基本
培养基
Base
medium
植物生长
调节剂
Plant growth
regulator∥mg /L
接种外
植体数
Number
of explants
抽芽数
New number
of budding
explants
萌芽率
Germinati
on rate∥%
MS 0． 02 NAA +0． 60 6-BA 26 12 46． 2
MS 0． 02 NAA +1． 00 6-BA 30 16 53． 3
MS 0． 02 NAA +3． 00 6-BA 29 8 27． 6
MS 0． 10 NAA +1． 00 6-BA 30 14 46． 7
MS 0． 10 NAA +3． 00 6-BA 31 11 35． 5
MS 0． 10 NAA +0． 20 KT 27 9 33． 3
MS 0． 10 NAA +0． 60 KT 29 6 20． 7
MS 0． 10 KT +1． 00 KT 28 5 17． 9
1 /2MS 0． 02 NAA +0． 10 6-BA 29 22 75． 9
1 /2MS 0． 02 NAA +0． 60 6-BA 30 24 80． 0
1 /2MS 0． 02 NAA +1． 00 6-BA 29 26 89． 7
2． 2 绿玉树的增殖 由表 2 可知，1 /2MS + 0． 02 mg /L NAA
+0． 60 mg /L 6-BA +3． 00 mg /L AD培养基上绿玉树增殖有
效芽多，增殖倍数为 5． 70，生长较快;其次为 1 /2MS + 0． 02
mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA + 3． 00 mg /L AD，增殖倍数为
4． 35(图 2) ，长势较慢;1 /2MS +0. 10 mg /L NAA +3． 00 mg /L
6-BA +3． 00 mg /L AD增殖效果最差，增殖倍数为 3． 60，基部
愈伤组织明显增多，影响到植物后期的生长。
表 2 不同浓度配比 NAA和 6-BA对绿玉树增殖的影响
Table 2 Effects of different concentration ratios of NAA and 6-BA on the multiplication of E． tirucalli
植物生长调节剂
Plant growth
regulator∥mg /L
接种瓶数
Number of
inoculated bottles
新生芽数(≥0． 5 cm)
Number of
new buds (≥0． 5 cm)
增殖系数
Multiplication
Coefficient
生长状况
Growth
state
0． 02 NAA +0． 60 6-BA +3． 00 AD 20 114 5． 70 丛生芽多，长势好
0． 02 NAA +1． 00 6-BA +3． 00 AD 20 87 4． 35 芽多，有效芽少，伸长困难
0． 10 NAA +1． 00 6-BA +3． 00 AD 20 59 2． 95 有愈伤组织产生，生长较慢
0． 10 NAA +3． 00 6-BA +3． 00 AD 20 72 3． 60 愈伤组织多，堵住基部，影响生长
注:基本培养基均为 1 /2MS。
Note:Basic mediums are 1 /2MS．
图 2 绿玉树在 1 /2 MS +0． 02 mg /L NAA +1． 00 mg /L 6-BA +
3． 00 mg /L AD培养基上增殖诱导生长状态
Fig． 2 Multiplication state of E． tirucalli under the medium of
1 /2MS + 0． 02 mg /L NAA + 1． 00 mg /L 6-BA + 3． 00
mg /L AD
2． 3 绿玉树的生根 绿玉树的生根诱导比较容易，但生根
质量较差。由表 3可知，虽然在 1 /2MS中不附加任何生长调
节剂绿玉树也可以生根，但生根率不高，且根较短，不易移栽
成活。在培养基中加入少量 IBA和NAA，均可以提高生根质
量，生根率高达80%以上。其中，以1 /2MS +0． 40 mg /L NAA
+0． 40 mg /L IBA 培养基生根效果最好，生根率可达 100%
(图 3)。
图 3 绿玉树在 1 /2 MS +0． 40 mg /L NAA +0． 40 mg /L IBA培
养基上生根状态
Fig． 3 Rooting state of E． tirucalli under the medium of 1 /2MS
+0． 40 mg /L NAA +0． 40 mg /L IBA
2． 4 绿玉树的驯化和移栽 经过驯化移栽后，绿玉树组培
26101 安徽农业科学 2011 年
苗生长良好(图 4) ，成活率可达 80%，但开始有些会出现黄 叶、落叶现象，可能是空气湿度过低造成的。
表 3 不同培养基对绿玉树生根的影响
Table 3 Effects of different mediums on the rooting of E． tirucalli
培养基 Mediums
生根时间
Number of
rooting days∥d
平均根长
Average length
of root∥cm
生根条数
Number
of roots∥条
生根率
Rooting
rate∥%
生长状况
Growth
state
1 /2MS 13 0． 3 1 ～3 75 根短
1 /2MS +0． 40 mg /L NAA 10 4． 2 3 ～5 95 根细而长，呈白色
1 /2MS +0． 40 mg /L IBA 10 3． 2 2 ～3 80 根短而粗，呈暗色
1 /2MS +0． 40 mg /L NAA +0． 40 mg /L IBA 8 4． 6 3 ～6 100 根长而粗，须根较多
图 4 将组培苗从培养瓶移栽到培养杯
Fig． 4 Growth state of tissue culture seedlings in culture cups
3 小结与讨论
蒋丽娟对绿玉树离体组织培养的研究表明，绿玉树的
萌芽培养和增殖培养都依赖于玉米素，使用量较大，价格昂
贵，不利于大规模应用［11］。该试验旨在利用常用的生长调
节剂的不同组合，探索适合工厂化生产的绿玉树茎段再生
体系。结果表明，萌芽培养用 1 /2MS + 0． 02 mg /L NAA +
1. 00 mg /L 6-BA，24 d 后萌芽率可达 89． 7%;增殖培养用
1 /2MS + 0． 02 mg /L NAA + 0． 60 mg /L 6-BA + 3． 00 mg /L
AD，生长较快，有效芽多，增殖倍数平均可达 5． 70;生根培
养用1 /2MS + 0． 40 mg /L NAA + 0． 40 mg /L IBA，根多而长，
且须根较多，远远超过了 Uchida 等用 LS + 0． 02 mg /L TDZ
培养的效果(增殖系数为 1． 44)［12］，为绿玉树组培苗工业化
生产提供了参考。
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檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
397 －399.
(上接第 10156页)
注:M为 MarkerDL2000;1为健康组培苗;2为阴性对照;3为样品。
Note:M:MarkerDL2000;1． Healthy leaf;2． Negative control;3．
Samples．
图 1 RT-PCR 检测甘蔗叶片样品中的 SCYLV
Fig． 1 SCYLV in sugarcane leaves samples detected by RT-PCR
影响重大，需要对广西蔗区品种及品系进行黄叶病调查，同
时也为育种工作者的抗病育种提供参考。
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