全 文 ：第 32 卷 第 12 期
2 0 1 4年 1 2月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 12
Dec． 2 0 1 4
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学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 12． 039
黑面神枝叶水提物抑菌有效部位的筛选研究
彭伟文，王英晶，陆丹倩，梅全喜，戴卫波，吴飞
(广州中医药大学附属中山中医院药学部，广东 中山 528400)
摘 要:目的:筛选黑面神枝叶水提物的抑菌有效部位。方法:运用系统溶剂萃取法将黑面神枝叶水提物
分为氯仿、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇及剩余水层部位，采用试管二倍稀释法分别进行 4 个不同极性部位对金黄
色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌的体外抑菌实验研究，用以筛选抑菌作用的有效部位，并测定
对敏感菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:乙酸乙酯部位对 3 种菌种的抑菌作用最强，其
MIC均为 62． 5 mg /mL，MBC均为 250 mg /mL;其次为水饱和的正丁醇部位和剩余水层部位，其对试验菌种的 MIC
分别为 125 mg /mL和 62． 5 mg /mL，正丁醇部位的 MBC分别为 500 mg /mL、500 mg /mL、250 mg /mL;氯仿部位对试
验菌种均无抑菌作用。结论:黑面神枝叶水提物抑菌有效成分主要集中于乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
关键词:黑面神;系统溶剂萃取法;试管二倍稀释法;抑菌作用;有效部位
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)12-2937-03
Study on Antibacterial Effective Parts of Water Extracts of
Branch － Leaves from Breynia Fruticosa
PENG Weiwen，WANG Yingjing，LU Danqian，MEI Quanxi，DAI Weibo，WU Fei
(Zhongshan Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Zhongshan 528400，Guangdong，China)
Abstract:Objective:To preliminarily study the antibacterial effective parts of water extracts of branch － leaves from
Breynia fruticosa． Methods:Using fluorescence methods，the water extracts of branch － leaves from Breynia fruticosa were
divided into four parts，including chloroform，ethyl acetate，N － butyl alcohol and remaining water part． Using liquid media
two － fold dilution method，bacteriostasis experiment studies in vitro are made respectively to staphylococcus aureus，resist-
ant staphylococcus aureus and pseudomonas aeruginosa of four different polar parts to screen effective parts of bacteriosta-
sis，and determine the sensitive bacteria minimum inhibitory concentration (MIC)and minimum bactericidal concentration
(MBC)． Ｒesults:Ethyl acetate part showed the strongest bacteriostasis to three bacteria． All the MIC was 62． 5 mg /mL，
MBC was 250 mg /mL，followed by the N － butyl alcohol of water saturation part and remaining water part． The MIC of the
tested strains was 125 mg /mL and 62． 5 mg /mL and the MBC of N － butanol part was 500 mg /mL，500 mg /mL and 250
mg /mL． Chloroform part had no bacteriostasis to the test strains． Conclusion:The antibacterial active ingredients of water
extracts of branch － leaves from Breynia fruticosa are mainly concentrated in ethyl acetate part and N － butanol part．
Key words:Breynia fruticosa;fluorescence methods;liquid media two － fold dilution method;antibacterial action;ef-
fective fraction
收稿日期:2014 － 07 － 22
基金项目:广东省中医药局项目(2010073);广东省中山市科技局
项目(20102A033)
作者简介:彭伟文(1976 －)，男，湖南娄底人，主任中药师、教授，硕
士研究生导师，研究方向:中药制剂开发与研究。
黑面神系属大戟科黑面神属植物 Breynia fruticosa(L．)
Hook． f．的干燥嫩枝叶，主产于广东、广西等地，具“清湿
热、化瘀滞”之功效。黑面神用途广泛，可用于皮炎、湿疹、
皮肤瘙痒等多种皮肤病的治疗;在广东和广西地区以黑面
神合剂入药用于治疗慢性支气管炎，疗效显著;此外，黑面
神还作为湛江蛇药的一种重要成分治疗毒蛇咬伤［1］。经
研究发现黑面神主要含有三萜类、黄酮类、酚类和鞣质等成
分［2］。现代研究表明，黑面神具有抑菌、抗病毒、抗炎及免
疫抑制等作用。有文献报道［3 － 4］，黑面神具有较好的体内
外抑菌作用。本课题组前期研究也已证实，黑面神嫩枝叶
提取物抑菌作用明显强于茎提取物，且水提物作用较醇提
物强，但未见关于黑面神抑菌有效部位及成分的文献报道。
本次实验初步对黑面神嫩枝叶水提物体外抑菌有效部位进
行筛选［5 － 10］，旨在为其抑菌作用有效物质及作用机制的深
入研究奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 药材 黑面神嫩枝叶购自广州至信药业有限公司，
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经广州中医药大学生药鉴定教研室黄海波教授鉴定为大戟
科黑面神属植物 Breynia fruticosa(L．)Hook． f．的干燥嫩枝
叶。
1． 1． 2 菌株 革兰阳性菌:金黄色葡萄球菌(Staphylococ-
cus aureus)ATCC25923、耐药金黄色葡萄球菌(resistant
Staphylococcus aureus);革兰阴性菌:铜绿假单胞菌(Esche-
richia coli)ATCC27853。3 种标准菌株均为卫生部临床检
验中心提供。
1． 1． 3 试剂及培养基 氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、蒸馏水、
营养肉汤(广东环凯微生物科技有限公司)。
1． 1． 4 仪器 LＲH － 250A 生化培养箱(广东省医疗器械
厂);XSW － CJ － 2A 标准型净化工作台(吴江市津化设备
总厂) ;LMQＲ －4060 型立式灭菌器(山东新华医疗器械股
份有限公司) ;DL － ZD1 浊度仪(珠海迪尔生物工程有限公
司);BS224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司
d = 0． 0001 g) ;KQ3200E医用超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司);ＲE － 2000B型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪
器厂) ;一次性灭菌玻璃试管。
1． 2 方法
1． 2． 1 黑面神嫩枝叶水提物不同极性部位的制备 将黑
面神嫩枝叶粉碎成粗粉。称取黑面神嫩枝叶粗粉适量于圆
底烧瓶，置于电热套中，加 10 倍量水加热回流提取 1． 0h，
共提取 3 次，趁热滤过，合并滤液，减压浓缩至适量体积。
所得浓缩液依次用氯仿、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇萃取，
分别萃取 5 次，回收各萃取溶剂，剩余水层溶液减压浓缩至
少量体积，合并萃取所得物及剩余水层所得物并转移至已
称重的蒸发皿中，置于水浴锅上于适宜温度下蒸干溶剂，再
放置于烘箱中烘至干膏，备用。
1． 2． 2 菌悬液的配制 3 种试验标准菌种金黄色葡萄球
菌、耐药金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌经平板分离培养
24 h后，用无菌接种环挑取数个菌落置于生理盐水稀释液
中，用浊度仪校正浓度至 0． 5 麦氏标准液。
1． 2． 3 试管二倍稀释法测定嫩枝叶水提物各极性部位
MIC (1)药液的稀释:取各极性部位所得干膏配制成 1
mg /mL的溶液，以普通肉汤倍比稀释成 1 ∶ 2、1 ∶ 4、1 ∶ 8、1 ∶
16、1 ∶ 32、1 ∶ 64、1 ∶ 128 共 7 个浓度，即含提取物浓度分别
为 500． 0 mg /mL、250． 0 mg /mL、125． 0 mg /mL、62． 5 mg /
mL、31． 3 mg /mL、15． 6 mg /mL、7． 8 mg /mL。每个浓度平行
3 份，并分别设不含中药的肉汤培养液为空白对照。
(2)菌液的加入:每支试管内分别加入备用的菌悬液
50 μL，并分别设含提取物而不加菌液的肉汤培养基为自身
对照，置 37 ℃温箱培养 18 ～ 24 h。
(3)结果判断:在对照管符合要求的情况下，凡无肉眼
可见的细菌生长的提取物最低浓度即为提取物对该测试菌
的 MIC。
1． 2． 4 嫩枝叶水提物各极性部位 MBC测定 分别从各肉
眼观察无菌生长的试管中精密量取 100 μL 移种于相应培
养基的琼脂平板上作次代培养，经 37 ℃培养过夜，观察有
无细菌生长。以平板上计数少于 5 个菌落作为该极性部位
提取物对测试菌的 MBC。
2 结 果
2． 1 MIC测试结果
在对照组符合要求，即空白对照组试验菌生长良好，自
身对照组无任何菌生长的前提下，黑面神嫩枝叶水提物各
极性部位对 3 种试验菌种表现出不同程度的抑菌作用。其
中，氯仿层 500 mg /mL 的试管中均有细菌生长，即氯仿层
对 3 种试验菌均无抑菌作用;乙酸乙酯层较正丁醇层和剩
余水层对 3 种试验菌的抑菌作用都强，31． 3 mg /mL的试管
中 3 种试验菌均有生长，即乙酸乙酯层对 3 种试验菌的
MIC均为 62． 5 mg /mL;水饱和的正丁醇层 62． 5 mg /mL 的
试管中均有细菌生长，即正丁醇层对 3 种试验菌种的 MIC
均为 125 mg /mL;剩余水层 500 mg /mL的试管中有铜绿假单
胞菌生长，即水层对铜绿假单胞菌无抑菌作用，31． 3 mg /mL
的试管中有金葡菌和耐药金葡菌生长，即水层对其它两种菌
的 MIC均为 62． 5 mg /mL。结果见表 1和插页Ⅹ图 1 ～3。
2． 2 MBC测试结果
符合要求的各提取物溶液经次代培养后，乙酸乙酯层
250． 0 mg /mL的平板上 3 种试验菌种菌落数均少于 5，即乙
酸乙酯层对 3 种试验菌种的 MBC均为 250． 0 mg /mL;水饱
和正丁醇层 500． 0 mg /mL 的平板上金黄色葡萄球菌和耐
药金黄色葡萄球菌的菌落数均少于 5，250． 0 mg /mL 的平
板上铜绿假单胞菌的菌落数均少于 5，即正丁醇层对 3 种
试验菌种的 MBC 分别为 500 mg /mL、500 mg /mL 和 250
mg /mL。
表 1 黑面神嫩枝叶水提物各极性部位对
试验菌的 MIC和 MBC测试结果(mg /mL，n = 3)
不同极性部位 指标
试验菌种
金黄色
葡萄球菌
耐药金黄色
葡萄球菌
铜绿假
单胞菌
氯仿
乙酸乙酯
水饱和正丁醇
剩余水层
MIC 0 0 0
MBC 0 0 0
MIC 62． 5 62． 5 62． 5
MBC 250 250 250
MIC 125 125 125
MBC 500 500 250
MIC 62． 5 62． 5 0
MBC 0 0 0
3 讨 论
(1)本课题组前期试验已经证实，黑面神嫩枝叶提取
物抑菌作用明显强于茎提取物，且水提物作用较醇提物强。
在此基础上，为进一步筛选黑面神抑菌作用的有效物质成
分，本实验初步采用系统溶剂萃取法研究了黑面神嫩枝叶
水提物不同极性部位对试验菌种的抑菌作用，进而筛选出
抑菌有效部位。
(2)本次实验选用金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄
球菌和铜绿假单胞菌作为试验菌。通过试管二倍稀释法分
别测定了黑面神嫩枝叶水提物不同极性部位对 3 种试验菌
的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明乙酸乙酯层的
抑菌作用与正丁醇层及水层相比显著增强，正丁醇层及水
层也有一定的抑菌效果，而氯仿层不表现抑菌效果。
(3)黑面神嫩枝叶水提物中抑菌有效成分为何种单一
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收稿日期:2014 － 07 － 03
基金项目:浙江省医药卫生计划项目(2011KYB009)
作者简介:叶挺宇(1983 －)，男，浙江温州人，医师，硕士，研究方
向:泌尿外科常见疾病。
成分，或者为几种成分协同作用，还有待进一步深入探讨研
究。此外，有关黑面神嫩枝叶抑菌作用的机制尚不清楚，是
药物作用于细胞壁的有效成分还是干扰细胞核内核酸的合
成过程还需要进一步研究。
(4)本次试验选取菌种较少，但以试验结果来看，表明
了黑面神嫩枝叶水提物乙酸乙酯部位的抑菌效果最好，为
今后进一步研究黑面神的抑菌有效成分提供依据，并为开
发利用黑面神这一广东地产中药材奠定实验基础。
参考文献
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Vol． 32 No． 12
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 12． 040
血府逐瘀汤加减联合西药治疗
老年性前列腺增生的临床疗效
叶挺宇1，卢湧湧1，潘悦1，谢辉1，肖家全2
(1．温州医科大学附属第一医院泌尿外科，浙江 温州 325000;2．浙江省人民医院泌尿外科，浙江 杭州 310014)
摘 要:目的:探讨血府逐瘀汤加减联合西药治疗老年性前列腺增生的临床疗效，为临床诊断治疗提供参考。
方法:将本组 87 例老年性前列腺增生患者按照随机数字表法将其随机分为对照组(44 例)和观察组(43 例) ;对
照组给予口服非那雄胺片治疗，治疗组在对照组治疗基础上服用血府逐瘀汤加减;两组治疗均以 30 d 为一个疗
程。两组患者一般资料结果对比表明无显著性差异(P ＞ 0． 05)，具有可比性。结果:治疗组总有效率(95． 45%)
显著高于对照组(74． 42%) ，且具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ;治疗组治疗后前列腺体积(63． 74 ± 14． 39)cm3显著小
于对照组(80． 57 ± 12． 65)cm3，且具有显著性差异(P ＜ 0． 05);治疗组治疗后平均度数(1． 52 ± 0． 64)显著低于对
照组(2． 11 ± 0． 62)，且具有显著性差异(P ＜ 0． 05)。结论:血府逐瘀汤加减联合西药治疗老年性前列腺增生症疗
效显著，安全可靠，具有重要临床研究价值，值得推广应用。
关键词:血府逐瘀汤加减;老年性前列腺增生;临床疗效
中图分类号:Ｒ697． 3 文献标志码:B 文章编号:1673-7717(2014)12-2939-03
Clinical Efficacy of Xuefu Zhuyu Decoction Combined with Western
Medicine in Treatment of Senile Prostatic Hyperplasia
YE Tingyu1，LU Yongyong1，PAN Yue1，XIE Hui1，XIAO Jiaquan2
(1． Department of Urology，The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，Zhejiang，China;
2． Department of Urology of Zhejiang Province People＇s Hospital，Hangzhou 310014，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To investigate the effect of Xuefu Zhuyu Decoction combined with Western medicine in the treat-
ment of senile prostatic hyperplasia and to provide reference for clinical diagnosis and treatment． Methods:87 cases of se-
nile patients with benign prostatic hyperplasia according to random number table were randomly divided into control group
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