全 文 ：３．３　ＧＬＥ通过活化ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白诱导细胞凋
亡　ＧＬＥ作用于ＣＮＥ２细胞后，ｃａｓｐａｓｅ（半胱氨酸
蛋白酶）９、３、７均被激活，ｃａｓｐａｓｅ　３出现裂解片段，
激活后的ｃａｓｐａｓｅ　９促进 ＰＡＲＰ的降解，阻断其
ＤＮＡ修复功能。促凋亡因子Ｂａｘ上调，抗凋亡因
子Ｂｃｌ－２下调，促进ｃａｓｐａｓｅ等的释放，诱导细胞凋
亡，见图３。
图３　ＧＬＥ对ＣＮＥ２细胞线粒体凋亡相关基因表达的影响
Ｆｉｇ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＧＬＥ　ｏｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　ｅｘ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＣＮＥ２　ｃｅｌｓ
４　讨论
线粒体途径是细胞凋亡的经典途径之一，而线粒
体膜电位的降低是细胞凋亡早期的不可逆事件，线粒
体膜电位功能丧失后导致线粒体内促凋亡蛋白和抑
凋亡蛋白平衡失调，进而引发ｃａｓｐａｓｅ级联反应发生
凋亡［３］。细胞中合成的ｃａｓｐａｓｅ以无活性的酶原状态
存在，经活化后执行其功能。细胞凋亡的起始者
（ｃａｓｐａｓｅ　９）处于上游，能够活化下游的执行者
（ｃａｓｐａｓｅ　３和７）［４］。Ｃａｓｐａｓｅ　３是细胞凋亡过程中最
主要的终末剪切酶，在凋亡中扮演着重要的作用。
ＰＡＲＰ（ｐｏｌｙ　ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）是ＤＮＡ修复酶，
是 核心成员ｃａｓｐａｓｅ的切割底物，因此，它在ＤＮＡ损
伤修复与细胞凋亡中发挥着重要作用［５］。本文结果
表明灵芝三萜组分ＧＬＥ能够激活ｃａｓｐａｓｅ途径，促进
ＰＡＲＰ降解，是肿瘤细胞线粒体途径凋亡的诱导者。
Ｂａｘ是一种Ｂｃｌ－２家族的前凋亡蛋白，响应损伤
和刺激，Ｂａｘ将重新定位于线粒体表面并破坏在正常
状态下抗凋亡的Ｂｃｌ－２蛋白的功能［６］。在胞浆中的
Ｂａｘ以单体形式存在，然而在细胞发生凋亡时，与线
粒体关联的Ｂａｘ既可能以无活性的单体形式存在，也
可能以与线粒体膜结合成相对分子质量大的活性复
合物形式存在。Ｂａｘ可以构成跨线粒体外膜的孔，并
导致膜电位的降低和细胞色素Ｃ（Ｃｙｔ　Ｃ）及凋亡诱导
因子（ＡＩＦ）的外流，细胞色素Ｃ与Ａｐａｆ－１和ＡＴＰ及
ｐｒｏ－ｃａｓｐａｓｅ－９形成复合物（凋亡体）并导致ｃａｓｐａｓｅ－９
的激活。与细胞色素 Ｃ的结合使 Ａｐａｆ－１与ｐｒｏ－
ｃａｓｐａｓｅ－９的结合能力更强。抗凋亡分子Ｂｃｌ－２起阻止
线粒体上孔的形成的作用，当Ｂａｘ与Ｂｃｌ－２形成异源
二聚体时，它就阻断了这些分子的抗凋亡作用［７］。
综上所述，ＧＬＥ能够抑制ＣＮＥ２细胞增殖并诱
导其凋亡，而线粒体途径可能是其诱导细胞凋亡的
重要机制。
参考文献：
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［收稿日期］２０１３－１０－２１
［基金项目］广东省中医药局立项资助项目（编号：２０１００７３）；广东省中山市科技局立项资助项目（编号：２０１０２Ａ０３３）　［作者简介］彭伟文，男，
主任中药师，教授，硕士生导师，电话：０７６０－８８８１５１０６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｗｗ２００６８８＠２１ｃｎ．ｃｏｍ
黑面神茎、叶不同提取物抑菌作用对比研究
彭伟文，王英晶，陆丹倩，梅全喜，戴卫波，吴飞　 （广州中医药大学附属中山市中医院，广东 中山５２８４００）
［摘要］　目的：对比研究黑面神茎、枝叶乙醇和水提取物的体外抑菌作用。方法：采用纸片扩散法比较黑面神茎、枝叶各提取
物的体外抑菌作用，并采用试管二倍稀释法测定枝叶提取物对敏感菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）和最低杀菌浓度（ＭＢＣ）。结果：
枝叶水提物对金黄色葡萄球菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ分别为１５．６２５　ｍｇ·ｍｌ－１和１２５　ｍｇ·ｍｌ－１，醇提物为３１．２５　ｍｇ·ｍｌ－１和５００　ｍｇ·
·９６８·中国医院药学杂志２０１４年６月第３４卷第１１期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｎ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１１
ｍｌ－１，抑菌率分别达２５７．０％和１１５．５％；枝叶水提物对铜绿假单胞菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ均为１２５　ｍｇ·ｍｌ－１，醇提物均为２５０　ｍｇ·
ｍｌ－１，抑菌率分别达１１５．５％和３１．０％；而茎水提物对试验菌及提取物对白色念珠菌均无抑菌作用。结论：黑面神枝叶提取物
抑菌作用明显强于茎提取物，且水提物作用较醇提物强。
［关键词］　黑面神；纸片扩散法；试管二倍稀释法
［中图分类号］Ｒ９６５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１１－０８６９－０５　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１１．０４
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ
ＰＥＮＧ　Ｗｅｉ－ｗｅｎ，ＷＡＮＧ　Ｙｉｎｇ－ｊｉｎｇ，ＬＵ　Ｄａｎ－ｑｉａｎ，ＭＥＩ　Ｑｕａｎ－ｘｉ，ＤＡＩ　Ｗｅｉ－ｂｏ，ＷＵ　Ｆｅｉ（Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，
Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　５２８４００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｃｏｎｔｒａｓｔｉｖｅｌｙ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ａｎｄ
ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍＢｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｐａｐｅｒ　ｄｉｓｃ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄ，ＭＩＣ　ａｎｄ　ＭＢＣ　ｔｏ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｍｅｄｉａ　ｔｗｏ－ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ　ＭＩＣ　ａｎｄ　ＭＢＣ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｔｏ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｅｒｅ　１５．６２５　ｍｇ·ｍｌ－１
ａｎｄ　１２５　ｍｇ·ｍｌ－１，ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　３１．２５　ｍｇ·ｍｌ－１　ａｎｄ　５００　ｍｇ·ｍｌ－１，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｏ　２５７．０％
ａｎｄ　１１５．５％；ＭＩＣ　ａｎｄ　ＭＢＣ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｔｏ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｗｅｒｅ　１２５　ｍｇ·ｍｌ－１，ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　２５０　ｍｇ·ｍｌ－１，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｏ　１１５．５％ａｎｄ　３１．０％；Ｎｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ａｎｄ　ａｌｓｏ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ａｎ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ
ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ－ｏｎｅｓ　ａｎｄ　ａｌｓｏ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｏｎｅｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ；ｄｉｓｃ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ；ｌｉｑｕｉｄ　ｍｅｄｉａ　ｔｗｏ－ｆｏｌｄ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ
　　黑面神系属大戟科黑面神属植物Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕ－
ｔｉｃｏｓａ（Ｌ．）Ｈｏｏｋ．ｆ．的干燥嫩枝叶，主产于广东、广
西等地，具清湿热、化淤滞之功效。黑面神用途广
泛，可用于皮炎、湿疹、皮肤瘙痒等多种皮肤病的治
疗；在广东和广西地区以黑面神合剂入药用于治疗
慢性支气管炎，疗效显著；此外，黑面神还作为湛江
蛇药的一种重要成分治疗毒蛇咬伤［１］。经研究［２］发
现，黑面神药材中主要含有三萜类、黄酮类、酚类和
鞣质等成分。现代研究表明，黑面神具有抑菌、抗病
毒、降胆固醇等作用。本课题组前期药理研究也已
证实，黑面神水提液具有明显的抗急性炎症作用［３］。
有文献报道［４－５］，黑面神具有较好的体内外抑菌作
用，但未见黑面神不同药用部位的体外抑菌作用研
究。本次实验初步对黑面神茎、枝叶水提物和醇提
物的体外抑菌作用进行对比研究［６－８］，旨在为其抑菌
作用机制及抑菌有效成分的深入研究奠定基础。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　仪器　ＬＲＨ－２５０Ａ生化培养箱（广东省医
疗器械厂）；ＸＳＷ－ＣＪ－２Ａ标准型净化工作台（吴江市
津化设备总厂）；ＬＭＱＲ－４０６０型立式灭菌器（山东
新华医疗器械股份有限公司）；ＤＬ－ＺＤ１浊度仪（珠
海迪尔生物工程有限公司）。
１．１．２　药材　黑面神枝叶、茎均购自广州至信药业
有限公司，经广州中医药大学生药鉴定教研室黄海
波教授鉴定为大戟科黑面神属植物Ｂｒｅｙｎｉａｆｒｕｔｉ
ｃｏｓａ（Ｌ．）Ｈｏｏｋ．ｆ．的干燥枝叶和茎。
１．１．３　试剂及培养基　９５％乙醇（ＡＲ）、纯化水、即
用 ＭＨ琼脂培养基（江门市凯琳贸易有限公司）、营
养肉汤（广东环凯微生物科技有限公司）。
１．１．４　 菌株 　 革兰阳性菌：金黄色葡萄球菌
（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）ＡＴＣＣ２５９２３；革兰阴性菌：
铜绿假单胞菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ２７８５３；大肠
埃希菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＴＣＣ２５９２２；真
菌：白色念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）ＡＴＣＣ６４５４８。４
种标准菌株均为卫生部临床检验中心提供。
１．２　方法
１．２．１　黑面神乙醇提取物的制备　将黑面神茎、枝
叶粉碎成粗粉。分别称取黑面神茎、叶粗粉各
１０．０ｇ，置于２５０　ｍｌ量瓶中，加１００　ｍｌ　９５％乙醇，
加热回流提取１．０ｈ，共提取２次，趁热抽滤并用
９５％乙醇清洗滤渣及容器２～３次，合并滤液，减压
浓缩至约５　ｍｌ，用纯化水转移至１０　ｍｌ量瓶中并定
容至刻度，得质量浓度为１　ｇ·ｍｌ－１的茎、叶醇提物
供试品。
１．２．２　黑面神水提取物的制备　分别称取黑面神
·０７８· 中国医院药学杂志２０１４年６月第３４卷第１１期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｎ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１１
茎、叶粗粉各１０．０ｇ，加１００　ｍｌ纯化水，同上提取、
定容，得质量浓度为１　ｇ·ｍｌ－１的茎、叶水提物供试
品。
１．２．３　菌悬液的配制　３种试验标准菌种金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌经平板分离培养
２４　ｈ后，用无菌接种环挑取数个菌落置于生理盐水
稀释液中，用浊度仪校正浓度至０．５的麦氏标准液。
经平板培养的白色念珠菌同法配成浓度为１的麦氏
标准液。
１．２．４　药敏纸片的制备　将普通定性滤纸用打孔
机打成若干圆形纸片，直径为６．０ｍｍ，作为空白纸
片。用移液管精密量取各药液０．１　ｍｌ，分别将１０片
空白纸片放入药液中直至浸润完全，取出晾干，备
用。阴性对照纸片采用等量无菌水同法制备。
１．２．５　纸片扩散法比较黑面神各提取物抑菌作用
及抑菌率的测定　分别取上述菌悬液，在无菌操作
条件下，用不同无菌棉棒均匀涂抹在琼脂培养基上，
再用无菌镊子将晾干的药敏纸片和阴性对照纸片均
匀间隔贴于各琼脂培养基表面，轻压纸片使接触良
好，将培养皿放入３７℃恒温培养箱培养１８～２４　ｈ
后取出，测量并记录各抑菌圈直径，计算平均直径。
判断标准：不敏感（≤６　ｍｍ，－），低度敏感（≤７
ｍｍ，＋），中度敏感（＞７　ｍｍ，＋＋），高度敏感（≥１５
ｍｍ，＋＋＋）。
抑菌率计算公式如下：
抑菌率（％）＝
试验组抑菌圈平均直径－空白滤纸片直径
空白滤纸片直径 ×１００％
１．２．６　试管二倍稀释法测定枝叶提取物 ＭＩＣ
（１）药液的稀释：取醇提物或水提物以普通肉汤
倍比稀释成１∶２，１∶４，１∶８，１∶１６，１∶３２，１∶６４，１∶１２８
共７个浓度，即含中药质量浓度分别为５００．０，
２５０．０，１２５．０，６２．５，３１．３，１５．６，７．８　ｍｇ·ｍｌ－１。每
个浓度平行３份，并分别设不含中药的肉汤培养液
为空白对照。
（２）菌液的加入：每支试管内分别加入备用的菌
悬液５０μｌ，并分别设含中药而不加菌液的肉汤培养
基为自身对照，置３７℃温箱培养１８～２４　ｈ。
（３）结果判断：在对照管符合要求的情况下，凡
无肉眼可见的细菌生长的药物最低浓度即为药物对
该测试菌的 ＭＩＣ。
１．２．７　枝叶提取物 ＭＢＣ测定　分别从各肉眼观
察无菌生长的试管中精密量取１００μｌ移种于相应
培养基的琼脂平板上作次代培养，经３７℃培养过
夜，观察有无细菌生长。以平板上计数少于５个菌
落作为该药物对测试菌的 ＭＢＣ。
１．２．８　数据处理　实验计量数据用珚ｘ±ｓ表示，对
数据采用ＳＰＳＳ　１７．０软件中 Ｏｎｅ－ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ进
行单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。
２　结果
２．１　黑面神茎、枝叶醇提物和水提物的抑菌作用及
抑菌率测试结果　结果见表１和图１。黑面神枝叶
水提、醇提物和茎醇提物对３种细菌均有不同程度
的抑菌作用，而茎水提物对试验菌无抑菌作用，且提
取物对白色念珠菌均无抑菌作用。
对金黄色葡萄球菌而言：与阴性对照相比，枝叶
水提、醇提物和茎醇提物均有极显著统计学意义（Ｐ
＜０．０１）；３种提取物之间比较，枝叶水提物的抑菌
活性显著强于醇提物（Ｐ＜０．０１），枝叶醇提物的抑
菌活性亦优于茎醇提物。
对铜绿假单胞菌而言：与阴性对照相比，枝叶水
提物和醇提物均有极显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）；２
种提取物之间比较，枝叶水提物的抑菌效果优于醇
提物（Ｐ＜０．０５）。
对黑面神枝叶水提物而言：金黄色葡萄球菌、铜
绿假单胞菌和大肠杆菌分别表现出高度、中度、中度
敏感，抑菌圈平均直径分别为２１．４２，１０．８８，８．６４
ｍｍ。
对黑面神枝叶醇提物而言：金黄色葡萄球菌和
铜绿假单胞菌均表现出中度敏感，抑菌圈平均直径
分别达１２．９３　ｍｍ和７．８６　ｍｍ。
对黑面神茎醇提物而言：仅金黄色葡萄球菌表
现出中度敏感，抑菌圈平均直径达１０．３４　ｍｍ。
　　黑面神枝叶水提物对金黄色葡萄球菌和铜绿假
单胞菌的抑菌率高达２５７．０％和１１５．５％，显示出强
抑菌效果；枝叶醇提物对金黄色葡萄球菌和铜绿假
单胞菌的抑菌率分别为１１５．５％和３１．０％，茎醇提物
对金黄色葡萄球菌的抑菌率为７２．３％，与水提物相
表１　黑面神提取物抑菌作用及抑菌率结果（珚ｘ±ｓ，ｎ＝８）
Ｔａｂ　１　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍＢｒｅｙｎｉａｆｒｕｔｉｃｏｓａ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝８）
试验菌
阴性
对照
枝叶水提 枝叶醇提 茎醇提
抑菌圈直径／ｍｍ 抑菌率／％ 抑菌圈直径／ｍｍ 抑菌率／％ 抑菌圈直径／ｍｍ 抑菌率／％
金黄色葡萄球菌 ２１．４２±０．６９ａ ２５７．０　 １２．９３±０．３０ａ １１５．５　 １０．３４±０．３７ａ ７２．３
绿脓杆菌 ６．００ １０．８８±１．６４ａ １１５．５　 ７．８６±０．２１ａ ３１．０ － －－
大肠杆菌 ８．６４±０．８１ａ ４４．０ － － － －
注：“－”表示无抑菌作用；所有阴性对照均无抑菌环产生；与阴性对照比较，ａＰ＜０．０１
·１７８·中国医院药学杂志２０１４年６月第３４卷第１１期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｎ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１１
图１　黑面神提取物对试验菌的抑菌作用
Ａ．金黄色葡萄球菌；Ｂ．铜绿假单胞菌；Ｃ．大肠杆菌；Ｄ．白色念珠菌
Ｆｉｇ　１　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｏ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｆｒｏｍＢｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ
Ａ．Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ；Ｂ．Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ；Ｃ．Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｄ．Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ
比明显下降；枝叶水提物对大肠杆菌的抑菌率达
４４．０％。
以上结果表明标准菌金黄色葡萄球菌对黑面神
各提取物的敏感性最强，其次为铜绿假单胞菌，且枝
叶水提物作用较醇提物强。
２．２　ＭＩＣ和 ＭＢＣ测试结果　结果见表２和图２、
３。在对照组符合要求，即空白对照组试验菌生长良
好，自身对照组无任何菌生长的前提下，枝叶水提组
７．８　ｍｇ·ｍｌ－１和６２．５　ｍｇ·ｍｌ－１试管中分别有金黄色
葡萄球菌和铜绿假单胞菌生长；醇提组１５．６　ｍｇ·
ｍｌ－１和１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１试管中分别有金黄色葡萄球
菌和铜绿假单胞菌生长。符合要求的各药液经次代
培养后，枝叶水提物１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１的平板上金黄
色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的菌落数均少于５；醇
提物５００．０ｍｇ·ｍｌ－１和２５０．０ｍｇ·ｍｌ－１的平板上金
黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的菌落数均少于５。
表２　黑面神枝叶提取物对敏感菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ测试结
果（ｍｇ·ｍｌ－１，ｎ＝３）
Ｔａｂ　２　ＭＩＣ　ａｎｄ　ＭＢＣ　ｔｏ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ
ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ　ｆｒｏｍＢｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ（ｍｇ·ｍｌ－１，ｎ＝３）
菌种
水提物 醇提物
ＭＩＣ　 ＭＢＣ　 ＭＩＣ　 ＭＢＣ
金黄色葡萄球菌 １５．６　 １２５．０　 ３１．３　 ５００．０
铜绿假单胞菌 １２５．０　 １２５．０　 ２５０．０　 ２５０．０
３　讨论
本实验采用纸片扩散法筛选黑面神茎、叶不同
提取物的敏感菌，选用金黄色葡萄球菌和铜绿假单
胞菌作为试验菌。通过试管二倍稀释法分别测定了
黑面神枝叶醇提液和水提液对２种试验菌的最低抑
菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明生药质量浓度为
１　ｇ·ｍｌ－１的黑面神枝叶水提物的抑菌作用与醇提取
物比较显著增强，而茎提取物几乎不表现抑菌效果，
这也验证了民间以黑面神干燥嫩枝叶为药用部位治
疗各类皮肤疾病的疗效。目前市面上销售的黑面神
图２　枝叶提取物对金黄色葡萄球菌的 ＭＩＣ测试结果
Ａ．水提物（１５．６　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｂ．水提物（７．８　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｃ．醇提物
（３１．３　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｄ．醇提物（１５．６　ｍｇ·ｍｌ－１）
Ｆｉｇ　２　ＭＩＣ　ｔｏ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖ－
ｅｓ
Ａ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（１５．６　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｂ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（７．８　ｍｇ·
ｍｌ－１）；Ｃ．ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（３１．３　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｄ．ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
（１５．６　ｍｇ·ｍｌ－１）
图３　枝叶提取物对铜绿假单胞菌的 ＭＩＣ测试结果
Ａ．水提物（１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｂ．水提物（６２．５　ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｃ．醇提物
（２５０．０ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｄ．醇提物（１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１）
Ｆｉｇ　３　ＭＩＣ　ｔｏ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈ－ｌｅａｖｅｓ
Ａ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｂ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（６２．５　ｍｇ·
ｍｌ－１）；Ｃ．ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（２５０．０ｍｇ·ｍｌ－１）；Ｄ．ａｌｃｏｈｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ
（１２５．０ｍｇ·ｍｌ－１）
有枝叶和茎２种，主要以黑面神茎为主，本文在此基
础上进行茎和枝叶不同溶媒提取液的抑菌作用对比
研究，对搞清其入药部位和提取方法具有实用意义。
目前，有关黑面神枝叶抑菌作用的机制尚不清
楚，是药物作用于细胞壁的有效成分还是干扰细胞
核内核酸的合成过程还需要进一步研究。另外，黑
面神枝叶水提物中抑菌有效成分为何种单一成分，
或者为几种成分协同作用，还有待进一步深入探讨
研究。
本实验仅对黑面神提取物体外抑菌作用进行初
步研究，但药物体外抗菌环境不同于体内，有效抗菌
浓度在体内能否达到从而控制感染，还需通过建立
动物模型进行体内实验，进一步证明其抗菌作用，设
·２７８· 中国医院药学杂志２０１４年６月第３４卷第１１期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｎ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１１
定客观的评价标准，为黑面神临床应用提供科学依
据。
参考文献：
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东科技出版社，１９９０：３６２．
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Ｂｕｌ，２００４，５２：１０８６－１０９０．
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版社，１９７７：２３８６．
［５］　中国人民解放军第一八七医院．黑面神合剂新复方治疗慢性气
管炎２６２例疗效总结［Ｊ］．广东医药资料：慢性支气管炎专刊，
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［６］　易刚强，李云耀，李晓龙，等．紫背金盘水提物和醇提物抑菌作
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初步研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１１，２２（３）：６２２－６２３．
［收稿日期］２０１３－０９－１９
［基金项目］２０１２年河北省医学科学研究重点课题计划（编号：２０１２００８２）　［作者简介］周春华，男，硕士，主管药师，研究方向：药物分析，电
话：０３１１－６６００７３８５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｃｈｕｎｈｕａ８０＠１２６．ｃｏｍ
液－质联用法测定孟鲁司特钠咀嚼片的生物等效性
周春华，卢彦芳，任进民，张志清　 （河北医科大学第二医院药学部，河北 石家庄０５００００）
［摘要］　目的：建立液－质联用（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法测定人血浆中孟鲁司特钠浓度，研究孟鲁司特钠咀嚼片在健康受试者体内的
药动学及生物利用度，并与市售孟鲁司特钠咀嚼片比较，评价其生物等效性。方法：２０名男性健康志愿者单剂量、自身交叉口
服孟鲁司特钠受试片剂和参比片剂各１０　ｍｇ。血浆中加入内标辛伐他汀，经沉淀蛋白法处理血浆样品，采用ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法测
定孟鲁司特钠血药浓度。用ＤＡＳ药动学软件计算药动学参数并评价生物等效性。结果：孟鲁司特钠在１．０～１　０００．０ｎｇ·
ｍｌ－１范围内线性关系良好。受试制剂和参比制剂的 ＡＵＣ０－２４　ｈ分别为（３　４０４．７±２　２４８．５）ｎｇ·ｍｌ－１·ｈ和（３　５１７．１±２　３１３．２）
ｎｇ·ｍｌ－１·ｈ；ＡＵＣ０－∞分别为（３　５１６．０±２　３０２．３）ｎｇ·ｍｌ－１·ｈ和（３　６２１．８±２　３６６．２）ｎｇ·ｍｌ－１·ｈ；Ｃｍａｘ分别为（６４６．３±３８４．１）ｎｇ·
ｍｌ－１和（６１２．４±４０９．２）ｎｇ·ｍｌ－１；ｔｍａｘ分别为（２．００±０．７８）ｈ和（２．１３±０．７６）ｈ；ｔ１／２分别为（５．３１±１．１６）ｈ和（４．９３±１．２８）ｈ。结
论：建立的方法适用于孟鲁司特钠药动学研究，经方差分析及双单侧ｔ检验结果显示，２种制剂生物等效。
［关键词］　孟鲁司特钠；液－质联用法；药动学；生物等效性
［中图分类号］Ｒ９６９．１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）１１－０８７３－０５　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．１１．０５
Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｅｗａｂｌｅ　ｔａｂｌｅｔ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏ－
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
ＺＨＯＵ　Ｃｈｕｎ－ｈｕａ，ＬＵ　Ｙａｎ－ｆａｎｇ，ＲＥＮ　Ｊｉｎ－ｍｉｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉ－ｑｉｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｂｅｉ　Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ，ａｎｄ　ｓｔｕｄｙ
ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ
ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｅｗａｂｌｅ　ｔａｂｌｅｔ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｏｄｙ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｏｒａｌ　ｏｆ　１０　ｍｇ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｔｅｓｔ　ｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ｔａｂｌｅｔｓ　ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｔｏ　２０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　ｉｎ　ａ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｃｒｏｓｓ－ｏｖｅｒ　ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗａｓ　ｓｐｉｋｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｅｒｎａｌ
ｓｔａｎｄａｒｄ　ｏｆ　ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ，ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ．Ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｂｉｏａｖａｉｌ－
ａｂｉｌｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＤＡＳ　ｓｏｆｔｗａｒｅ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｗａｓ　１．０－１０００．０ｎｇ　ｍｌ－１．
Ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｅｗａｂｌｅ　ｔａｂｌｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ＡＵＣ０－２４　ｈ
ｗｅｒｅ（３　４０４．７±２　２４８．５），（３　５１７．１±２　３１３．２）ｎｇ·ｍｌ－１·ｈ；ＡＵＣ０－∞ ｗｅｒｅ（３　５１６．０±２　３０２．３），（３　６２１．８±２　３６６．２）ｎｇ·ｍｌ－１·
ｈ；Ｃｍａｘｗｅｒｅ（６４６．３±３８４．１），（６１２．４±４０９．２）ｎｇ·ｍｌ－１；ｔｍａｘ ｗｅｒｅ（２．００±０．７８），（２．１３±０．７６）ｈ；ｔ１／２ｗｅｒｅ（５．３１±１．１６），
（４．９３±１．２８）ｈ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ．Ｔｈｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉ－
ｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｅｓｔ　ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｅｗａｂｌｅ　ｔａｂｌｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ　ｓｏｄｉｕｍ；ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ；ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ
·３７８·中国医院药学杂志２０１４年６月第３４卷第１１期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｊｕｎ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．１１