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黑面神枝叶水提物治疗小鼠慢性皮炎-湿疹疗效观察



全 文 :收稿日期:2014-01-21; 修订日期:2014-11-17
基金项目:广东省中医药局立项资助项目(No. 2010073);
广东省中山市科技局立项资助项目(No. 20102A033)
作者简介:彭伟文(1967-),男(汉族),湖南娄底人,中山市中医院药学部
主任中药师,广州中医药大学教授,硕士研究生导师,学士学位,主要从事
中药制剂开发与研究工作.
黑面神枝叶水提物治疗小鼠慢性皮炎 -湿疹疗效观察
彭伟文,王英晶,王书芹,王 静,梅全喜,吴 飞
(广州中医药大学附属中山市中医院,广东 中山 528400)
摘要:目的 观察黑面神枝叶水提物对慢性皮炎 -湿疹模型小鼠的治疗作用。方法 采用 2,4 -二硝基氟苯诱导小鼠慢
性皮炎 -湿疹模型,将 60 只小鼠分为正常组,基质对照组,模型组,皮炎平组,黑面神枝叶水提物高、低剂量组,每组各 10
只。每日外用相应药物 2 次,连续使用 12 天。使用游标卡尺测量并计算左右耳厚度差;电子分析天平称量并计算耳肿胀
度及肿胀抑制率;解剖胸腺、脾脏称重并计算相应指数;光学显微镜下观察小鼠耳组织病理学变化。结果 黑面神枝叶水
提物一定剂量能有效减轻慢性皮炎 -湿疹小鼠耳组织增厚、肿胀,显著抑制免疫器官指数,改善其病理学改变,并且存在
剂量依赖关系。结论 黑面神枝叶水提物对小鼠慢性皮炎 -湿疹有良好的治疗作用,如进一步开发利用,有望研制成一
种治疗慢性皮炎 -湿疹的外用新药。
关键词:黑面神; 小鼠; 慢性皮炎; 湿疹
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 12. 057
中图分类号:R275 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2014)12-2954-02
慢性皮炎 -湿疹是皮肤科常见疾病之一,病因及发病机制相
当复杂,涉及Ⅰ、Ⅳ型超敏反应、细菌感染、真菌感染以及机体免
疫失衡等多方面。目前,慢性皮炎 -湿疹主要采用糖皮质激素、
H1 受体拮抗剂、免疫调节剂、抗菌药等进行局部或全身药物治
疗。然而,这些种类的药物均具有较为严重的副作用,价格普遍
昂贵且易产生耐药性,极大程度限制其临床应用。相比之下,中
医中药不良反应小,适宜多种慢性疾病的治疗且疗效确切成为治
疗慢性皮炎 -湿疹皮肤病的优势。黑面神为大戟科黑面神属植
物 Breynia fruticosa(L.)Hook. f.的干燥嫩枝叶,主产于广东、广西
等地,具“清湿热、化瘀滞”之功效,广泛用于皮炎、湿疹、皮肤瘙
痒等多种皮肤病的治疗且疗效显著[1]。本课题组前期药理研究
已证实,黑面神具有抑菌[2]、抗炎[3]、免疫抑制、抗皮肤 I 型超敏
反应[4]等作用,此外还具有抗病毒[5]作用。因此,本实验自制黑
面神枝叶水提物软膏,通过研究其对小鼠慢性皮炎 -湿疹的治疗
作用[6 ~ 9],为进一步开发利用黑面神提供科学依据。
1 材料与仪器
1. 1 动物 SPF级昆明小鼠 60 只,体质量(20 ± 2)g,雌雄各半,
购于广东省医学实验动物中心,动物生产许可证号:SCXK(粤)
2008 - 0002。饲养于广东省中山市中医院中药药理实验室,实验
动物使用许可证号:SYXK(粤)2010 - 0109。
1. 2 试药 黑面神枝叶水提物软膏制备方法:将黑面神枝叶粉碎
成粗粉。称取黑面神枝叶粗粉适量于圆底烧瓶,置于电热套中,
加 10 倍量水加热回流提取 1. 0 h,共提取 4 次,趁热滤过,合并滤
液,置于高压蒸气锅中浓缩至稠膏,所得物转移至已称重的蒸发
皿中,放置于烘箱中烘至干膏,称重。按比例称取十八醇、凡士
林、甘油、轻质液状石蜡置水浴锅上加热溶解搅拌均匀,备用;将
蒸馏水缓慢加入油相液体中,边加边搅拌使混合均匀,冷凝,作为
软膏基质,备用;将所得提取物干膏加少量水使溶解,于水浴锅上
缓慢加入到软膏基质中,边加边搅拌使溶解,转移至研钵中,沿同
一方向搅拌数分钟,冷凝,使呈软膏状,即得。称重,计算每克软
膏相当于生药量。复方醋酸地塞米松乳膏(999 皮炎平,规格:
20g∶ 15mg)试剂:2,4 -二硝基氟苯(2,4 - DNFB)。
1. 3 仪器 游标卡尺(靖江量具有限公司);BS224S 型电子天平
(北京赛多利斯仪器系统有限公司,d = 0. 0001g);YLS - Q4 耳肿
打耳器(山东省医学科学院设备站)、微量移液器(上海求精生化
试剂仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 实验分组与给药 将小鼠按体质量、性别随机分成 6 组,每
组 10 只:①正常组(不作任何处理);②基质对照组(40g 空白基
质 /kg);③模型组(不作任何处理);④阳性组[皮炎平,0. 015 g /
(kg·d)];⑤试药高剂量组(5 倍临床用药剂量);⑥试药低剂量
组(2. 5 倍临床用药剂量)。
依据分组,于实验第 3 日小鼠右耳正反两面涂抹相应软膏
0. 2 g /(kg·次),2 次 /d,若于激发当日,则在激发前 1h 给药,连
续给药 12 d后,擦净小鼠右耳残留药物,检测各项指标。
2. 2 小鼠慢性皮炎 -湿疹模型的制备 将小鼠于实验前 1 天用
剃毛机腹部脱毛暴露皮肤,面积约 2 cm × 2 cm。实验当天用移液
枪移取质量 /体积分数 0. 5%DNFB -丙酮溶液 50 μl均匀涂抹于
小鼠腹部脱毛皮肤处致敏,次日再致敏一次。5 天后于小鼠右耳
壳正反两侧均匀涂抹 0. 2%DNFB -丙酮溶液 30 μl激发,同时左
耳涂等剂量丙酮溶液作为对照,每隔 3 天激发 1 次,共激发 3 次。
2. 3 疗效评价
2. 3. 1 试药对模型小鼠耳厚度差的影响 用游标卡尺单盲法测
量小鼠诱导前右耳中部厚度(d0),以后每次激发后 24 h 测量 1
次(d8、d11、d14),计算激发前后右耳厚度差。
2. 3. 2 试药对模型小鼠耳质量差的影响 末次激发后 24 h,颈部
脱臼处死小鼠,仔细拭净鼠耳残留物,沿耳廓基线剪下两耳,用直
径 8 mm打孔器在左右耳中部同一部位打孔取圆形耳片,立即用
电子分析天平称量耳片质量,并计算肿胀度及肿胀抑制率。肿胀
度 =右耳重量 -左耳重量;肿胀抑制率(%)=[(模型组平均肿
胀度 -给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度]× 100%。
2. 3. 3 试药对模型小鼠免疫器官指数的影响 末次激发后 24 h
处死并解剖小鼠,取胸腺和脾脏,立即称重,分别计算胸腺和脾脏
指数,并进行统计学分析。胸腺或脾脏指数 =胸腺或脾脏质量
(g)/体重 × 10。
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 12 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 12
2. 3. 4 模型小鼠耳组织病理学观察 分别将 6 组小鼠右耳片放
入体积分数 10%甲醛 - PBS溶液中固定,4 μm石蜡切片,苏木精
和伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色,在光学显微镜下观察耳
片病理学变化。
2. 4 统计学处理 所有数据采用 SPSS17. 0 统计分析软件,结果
采用 珋x ± s表示,组间比较采用单因素方差分析,方差齐性者采用
LSD检验,方差不齐者采用 Dunnttt,s 检验。以 P < 0. 05 为差别
有统计学意义,P < 0. 01 为差别有显著统计学意义。
3 结果
3. 1 小鼠耳厚度差的变化 与正常组相比,基质对照组小鼠的耳
厚度差无明显改变,表明基质对小鼠皮肤无刺激作用;模型组小
鼠的耳厚度差明显增加,有显著统计学差异(P < 0. 01),表明模
型适用;与模型组相比,阳性组和试药高剂量组可以明显减小耳
厚度差,且均有显著统计学差异(P < 0. 01)。结果表明,黑面神
枝叶水提物一定剂量可明显改善慢性皮炎 -湿疹模型鼠耳增厚。
结果见表 1。
表 1 黑面神对慢性皮炎 -湿疹模型小鼠耳厚度差的影响(珋x ± s)
组别 d0 d8 ~ d0 d11 ~ d0 d14 ~ d0
正常组 0. 165 ± 0. 021 0. 011 ± 0. 01 0. 021 ± 0. 015 0. 022 ± 0. 012
基质对照组 0. 153 ± 0. 023 0. 022 ± 0. 021 0. 03 ± 0. 011 0. 029 ± 0. 015
模型组 0. 165 ± 0. 018 0. 138 ± 0. 023## 0. 214 ± 0. 042## 0. 211 ± 0. 036##
阳性组 0. 158 ± 0. 02 0. 041 ± 0. 014**0. 125 ± 0. 05** 0. 131 ± 0. 028**
试药高剂量组0. 163 ± 0. 018 0. 077 ± 0. 008**0. 141 ± 0. 032**0. 162 ± 0. 035*
试药低剂量组0. 163 ± 0. 022 0. 134 ± 0. 019 0. 206 ± 0. 022 0. 203 ± 0. 016
与正常组相比,##P <0. 01;与模型组相比,**P <0. 01,* P <0. 05;n =10
3. 2 小鼠耳质量差的变化 与正常组相比,基质对照组无明显差
异,表明基质对小鼠皮肤无刺激作用;模型组小鼠右耳明显充血
肿胀,质量明显比左耳增加,有显著统计学差异(P < 0. 01);与模
型组相比,阳性组小鼠右耳皮肤无红肿充血现象,能显著抑制小
鼠耳肿胀,有显著统计学差异(P < 0. 01);黑面神水提高剂量组
小鼠右耳皮肤可见轻微发红,但无肿胀现象,有显著统计学差(P
< 0. 01),低剂量组小鼠右耳多数可见红肿充血现象,右耳血管清
晰可见,耳肿胀度与模型组小鼠相近,无治疗作用。高剂量组与
低剂量组相比,有显著统计学差异(P < 0. 01)。结果见表 2。
表 2 黑面神对慢性皮炎 -湿疹模型小鼠耳质量差的影响
组别 肿胀度 /mg 肿胀抑制率 /%
正常组 - -
基质对照组 - -
模型组 7. 3 ± 0. 6## -
皮炎平组 0. 6 ± 0. 2** 91. 78
试药高剂量组 2. 1 ± 0. 7** 71. 23
试药低剂量组 6. 6 ± 0. 3 -
与正常组相比较,##P < 0. 01;与模型组相比较,**P < 0. 01
3. 3 小鼠免疫器官指数的变化 与正常组相比,基质对照组和模
型组小鼠免疫器官指数均无明显变化,无统计学意义(P >
0. 05);与模型组相比,阳性组小鼠胸腺和脾脏指数均显著下降,
具有显著统计学意义(P < 0. 01),且脾脏指数下降更明显,与胸
腺指数相比,差别具有统计学意义(P < 0. 05);与模型组相比,
黑面神高、低剂量组小鼠胸腺和脾脏指数均显著下降,具有显著
统计学意义(P < 0. 01),两组间无统计学差异。结果见表 3。
3. 4 小鼠耳组织病理学变化 与正常组相比,基质对照组小鼠无
明显改变。模型组小鼠右耳鳞状上皮表面角化过度、增厚,上皮
细胞间未见水肿,真皮浅层血管扩张,炎细胞数量明显多于正常
组,可见较多的单核细胞浸润及个别粒细胞。皮炎平组表皮稍增
厚,真皮内充血水肿缓解,未见明显单核细胞浸润。试药高剂量
组病理变化与阳性组相似,炎性细胞数明显低于低剂量组,但多
于正常组。结果表明,黑面神枝叶水提物一定剂量能抑制慢性皮
炎 -湿疹小鼠皮损中炎症细胞浸润,改善耳片病理改变。结果见
图 1 ~ 2。
表 3 黑面神对慢性皮炎 -湿疹模型
小鼠免疫器官指数的影响(珋x ± s)
组别
脾脏
指数(mg /10g)抑制率 /%
胸腺
指数(mg /10g)抑制率 /%
正常组 0. 334 ± 0. 006 - 0. 325 ± 0. 038 -
基质对照组 0. 335 ± 0. 007 - 0. 320 ± 0. 042 -
模型组 0. 335 ± 0. 006 - 0. 337 ± 0. 019 -
皮炎平组 0. 086 ± 0. 021** 74. 33 0. 203 ± 0. 006** 39. 76
试药高剂量组 0. 242 ± 0. 039** 27. 76 0. 267 ± 0. 015** 20. 77
试药低剂量组 0. 262 ± 0. 036** 21. 79 0. 272 ± 0. 029** 19. 29
与模型组相比较,* P <0. 05;**P <0. 01
A.正常组 B.基质对照组 C.模型组
D.阳性组 E.试药高剂量组 F.试药低剂量组
图 1 黑面神对慢性皮炎 -湿疹小鼠耳病理学改变的影响
A.正常组 B.基质对照组 C.模型组 D.阳性组
E.试药高剂量组 F.试药低剂量组
图 2 黑面神治疗小鼠慢性皮炎 -湿疹结果
4 讨论
中医中药治疗湿疹有上千年历史,疗效好,副作用小。但目
前中药外用多是水煎外洗或外敷,质量、用药量难以控制,使用不
便,加上部分药物有局部刺激作用,有时大面积外洗会导致药物
的系统吸收。本试验所选中药黑面神具有清热祛湿、活血解毒的
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 12 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 12 期
功效,在民间和临床上广泛用于治疗慢性支气管炎及皮炎、湿疹
等各类皮肤病,疗效确切,具有较大的药用研究价值。本试验采
用经典 DNFB诱发的小鼠慢性皮炎 -湿疹模型,观察自制黑面神
枝叶水提物软膏的治疗作用,旨在为该药的开发及临床应用提供
实验依据,验证该药治疗皮炎湿疹等的可行性。
慢性皮炎 -湿疹的发病机制涉及Ⅰ、Ⅳ型过敏反应、细菌感
染、真菌感染以及机体免疫失衡等多方面。本课题组前期实验已
证实,黑面神具有抑菌、抗炎、免疫抑制和抗皮肤 I型超敏反应等
作用,再加之临床应用疗效确切,这都为黑面神治疗慢性皮炎 -
湿疹皮肤病奠定科学依据。
本次实验结果显示,黑面神枝叶水提物 40g 生药 /(kg · d)
能有效减轻慢性皮炎 -湿疹小鼠耳组织增厚、肿胀,显著抑制免
疫器官指数,改善其病理学改变,且存在剂量依赖关系,为后续进
一步深入研究其作用机制打下基础。
参考文献:
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收稿日期:2014-02-17; 修订日期:2014-07-28
作者简介:樊丽军(1963-),女(汉族),河北张家口人,张家口学院高级实
验师,主要从事免疫学、病原生物学教学研究工作.
神经根型颈椎病中西医结合疗法
樊丽军,姜丽杰
(张家口学院,河北 张家口 075000)
摘要:目的 对神经根型颈椎病中西医结合疗法进行探讨。方法 93 例神经根型颈椎病患者,随机分为综合治疗组和对
照组。46 例对照组患者采取常规方法来进行治疗,而 47 例综合治疗组则采用中西医结合方法来进行治疗,联合应用健
康教育、颈椎医疗体操治疗、颈椎牵引、理疗、药枕康复法治疗。结果 47 例综合组患者中痊愈 28 例(59. 6%),显效 13 例
(27. 7%),好转 4 例(8. 5),无效 2 例(4. 20%),优良率为 41 例(87. 0%);而 46 例对照组患者中痊愈 17 例(40. 0%) ,显
效 11 例(23. 9%) ,好转 12 例(26. 0%),无效 6 例(13. 0%),优良率为 28 例(61. 0%),两组患者疗效比较差异有显著性
意义(P < 0. 05)。结论 中西医结合治疗采用一系列的综合康复治疗措施(如颈椎健康教育、医疗体操、颈椎牵引、理疗、
药枕等),对于神经根型颈椎病具有较好的疗效,且没有不良反应及并发症,值得在临床上广泛应用。
关键词:颈椎病; 中西医结合; 康复疗法
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 12. 058
中图分类号:R4 /78 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2014)12-2956-02
神经根型颈椎病是临床常见的疾病,以往多采用非手术治疗
为主收到一定的疗效,但临床经验表明,单一疗效不够理想[1 ~ 5]。
本文就神经根型颈椎病中西医结合疗法进行探讨。现报道如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取 2012 年 10 月到 2013 年 10 月我院收治的
93 例神经根型颈椎病患,随机分为综合治疗组和对照组。综合
治疗组 47 例,男 29 例,女 18 例;年龄 26 ~ 53 岁,平均(43. 5 ±
10. 8)岁。对照组 46 例,男 31 例,女 15 例;年龄 28 ~ 55 岁,平均
(46. 3 ± 11. 2)岁;病史最长为 8 年,最短为 11 天。两组患者有可
比性。
1. 2 治疗方法 46 例对照组患者采取常规方法来进行治疗,而
47 例综合治疗组则采用中西医结合方法来进行治疗,联合应用
健康教育、颈椎医疗体操治疗、颈椎牵引、理疗、药枕康复法治疗,
具体措施如下[6 ~ 10]。
1. 2. 1 颈椎牵引 颈椎牵引:患者采用仰卧位牵引、颌枕带固定,
颈椎前曲 15 ~ 35 度。每次 30min,每日 1 次,10 次一疗程;牵引
力设定值依年龄、病情、体质情况而定,首次治疗最大牵引力值
3daN,再根据患者的自觉症状递增,最大值为 8 ~ 10daN。
1. 2. 2 药枕康复法 制作一个中药圆枕(药圆枕长 35 厘米左右,
直径 10 ~ 15 厘米,根据患者颈长情况而定)要有一定硬度受压不
变形。保持头颅舒适正好为药枕枕头放在颈下,头仰着睡。
中药圆枕药枕处方:当归、羌活、蒿本、制川乌、黑附片、川芎、
赤勺、红花、地龙、血竭、石菖蒲、灯芯草、细幸、桂枝、丹参、防风、
威灵仙各 100 g,乳香、没药各 67g,冰片 6. 7g,上述药除冰片外共
研磨细末和入冰片装入枕芯。
1. 2. 3 理疗 首先,采用频率 2400Hz、脉冲式的微波,微波治疗
时间持续 12min。然后,再选用颈椎病处方及电脑中频治疗仪
(k8832 - T型),每次 15min,每日一次,电流强度以耐受量来确
定。
1. 2. 4 颈椎病的医疗体操 ①颈前屈后伸:双手虎口插腰,低头
使颏部尽量触第一领扣,仰头面部于屋顶平行;②颈左右侧屈:耳
垂尽量触到肩峰处;③颈缓慢左右旋转:先用头部旋转,在以颏尽
量接触肩峰。并结合颈部穴位自我按摩:每天早晚各 1 次,用拇
指指端点或中指压在食指上,手指头用力,按压颈部肩井、极泉、
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 12 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 12