全 文 ：贵州不同产地苗药飞龙掌血中总生物碱和白屈菜红碱的含量测定
张艳焱，徐 剑，张永萍* (贵阳中医学院药学院，贵州贵阳 550002)
摘要 ［目的］测定贵州不同产地苗药飞龙掌血中总生物碱和白屈菜红碱的含量。［方法］采用反滴定法测定总生物碱含量，并采用高
效液相色谱法测定白屈菜红碱的含量，色谱柱为 Diamonsil C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －浓度 0． 1%磷酸水溶液(V/V，
28∶ 72)，检测波长为 270 nm，流速为 1． 0 ml /min。［结果］总生物碱、白屈菜红碱的平均回收率分别为 97． 5%和 99． 8%;RSD 分别为
2. 71%和 0． 40%。［结论］该分析方法准确、灵敏、可靠，可用于飞龙掌血中总生物碱和白屈菜红碱的含量测定。
关键词 飞龙掌血;总生物碱;白屈菜红碱;高效液相色谱法
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)27 －13322 －02
Determination of Total Alkaloid and Chelerythrine in Toddalia Asiatica from Different Places in Guizhou
ZHANG Yan-yan et al (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550002)
Abstract ［Objective］To determine the contents of total alkaloid and chelerythrine in Toddalia asiatica from different places in Guizhou．
［Method］Total alkaloid was determined by back-titrantion method，and chelerythrine was determined by HPLC method，using Diamonsil C18
column (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，and acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid(V /V，28∶ 72)as mobile phase，with the detection wavelength
at 270 nm and flow rate of 1． 0 ml /min． ［Result］The average recoveries of total alkaloid and chelerythrine were 97． 5% and 99． 8% with
RSD = 2． 71% and 0． 40% respectively． ［Conclusion］This analysis method is accurate，sensitive and reliable to determine the contents of
alkaloid in Toddalia asiatica．
Key words Toddalia asiatica;Total alkaloid;Chelerythrine;HPLC
基金项目 贵州省科技厅基金资助项目(黔科合中药专字 200407 号)。
作者简介 张艳焱(1978 －) ，女，江苏江都人，讲师，博士，从事中药、民
族药活性成分及新药研究，E-mail:zhangyanyan111 @ sina．
com。* 通讯作者，教授，硕士生导师，E-mail:zgygpg@ 126．
com。
收稿日期 2012-04-28
飞龙掌血是芸香科飞龙掌血属植物飞龙掌血(Toddalia
asiatica Lam．)的根或根皮，为贵州苗族习用药材。其味辛、
微苦，性温，具有祛风止痛、散瘀止血和解毒消肿之功效，主
治风湿痹痛、跌打损伤和瘀滞崩漏等症，主要含白屈菜红碱
等生物碱类成分和香豆素类成分［1］。据文献报道，飞龙掌血
中生物总碱类成分具抗炎镇痛生理活性［2 －4］。笔者采用反
滴定法和 HPLC法分别对贵州不同产地飞龙掌血药材中总
生物碱和白屈菜红碱进行含量测定，以期为飞龙掌血中总生
物碱和白屈菜红碱的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。飞龙掌血(Toddalia asiatica Lam．) ，分别
采自贵州贵阳、花江、清镇、高坡、贞丰、关岭、惠水和龙里，由
贵阳中医学院药学院鉴定教研室鉴定。
1． 1． 2 主要仪器。Waters-515型高效液相色谱系统:Waters-
2487检测器和威玛龙色谱工作站，购自美国 Waters 公司;
HS10260D型超声波清洗仪。
1． 1． 3 主要试剂。白屈菜红碱对照品，实验室自制，经
HPLC归一化法测定其纯度高于 98． 0%;乙腈为色谱纯，其
余试剂均为分析纯，市售;超纯水，自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 总生物碱的含量测定。精密称取不同产地飞龙掌血
样品的粉末 5． 000 g，分别置于 100 ml具塞三角瓶中，加入 30
ml氯仿和 6滴浓氨水，摇匀，放置过夜，超声提取 3 次，合并
氯仿液，提取液回收氯仿后，加入 10 ml乙醚溶解，准确加入
10 ml浓度 0． 01 mol /L的H2SO4 标准液，再加入蒸馏水，尽量
挥去乙醚，分别滴入 2 滴甲基红 －溴甲酚绿指示剂，用已标
定好的浓度 0． 01 mol /L 的 NaOH 滴定，测定总生物碱的
含量。
1． 2． 2 白屈菜红碱的含量测定。
1． 2． 2． 1 色谱条件。色谱柱为 Diamonsil C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm);流动相为乙腈 －浓度 0． 1%磷酸水溶液(V/V，28∶
72);检测波长为 270 nm;流速为 1． 0 ml /min;柱温为 25 ℃。
1． 2． 2． 2 对照品的制备。精密称取白屈菜红碱 10 mg于 10
ml容量瓶中，用无水甲醇定容，配制成浓度为 1 mg /ml 的白
屈菜红碱对照品贮备液。
1． 2． 2． 3 供试品溶液的制备。精密称取 1． 500 g 飞龙掌血
药材，用 25 ml无水甲醇超声提取 30 min，滤过，重复提取 2
次，合并提取液，减压浓缩至一定体积，用无水甲醇定容到 25
ml容量瓶中，摇匀，以微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，滤液作为供
试品溶液。
1． 2． 2． 4 系统适应性试验。取对照品溶液和供试品溶液适
量，在“1． 2． 2． 1”的色谱条件下注入液相色谱仪中，绘制色谱
图，考察系统适应性。
1． 2． 2． 5 方法学考察。①线性关系的考察。分别精密吸取
1、2、4、6、8和 10 μl对照品液注入液相色谱仪，在上述色谱条
件下进行峰面积测定，以峰面积积分值为纵坐标(Y) ，以进样
浓度(μg /ml)为横坐标(X)进行线性回归，计算回归方程。
②精密度试验。精密吸取对照品溶液 5 μl，重复进样 5 次，
计算峰面积的 RSD。③稳定性试验。取供试品溶液，分别于
0、1、2、4 和 6 h注入液相色谱仪，计算白屈菜红碱的含量的
RSD。④加样回收率试验。精密称取 1． 500 g已知含量的飞
龙掌血药材粉末，分别精密加入适量对照品溶液，并按供试
品处理方法制备，同法测定，计算白屈菜红碱的平均回收率
和 RSD。
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(27):13322 － 13323
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.27.059
1． 2． 2． 6 样品的含量测定。取不同产地飞龙掌血药材各 3
批，按供试品制备方法制备样品液，用“1． 2． 2． 5”方法进行测
定，计算药材中白屈菜红碱的含量。
2 结果与分析
2． 1 总生物碱的含量测定 计算得贵阳、花江、清镇、高坡、
贞丰、关岭、惠水和龙里的飞龙掌血中总生物碱的含量分别
为 4． 52、5． 64、4． 36、4． 75、7． 12、11． 06、9． 12和 10． 06 mg /g;其
中，以关岭的飞龙掌血中总生物碱的含量最高，惠水的次之，
清镇的最低。测得平均回收率为 97． 5%，RSD 为 2． 71% (n
=9)。
2． 2 白屈菜红碱的含量测定
2． 2． 1 系统适应性试验。图 1 表明，系统的分离度良好，各
峰间无明显干扰。以白屈菜红碱色谱峰计算，保留时间为
15． 32 min，理论塔板数不低于 5 000，表明系统适应性良好。
注:A为白屈菜红碱对照品;B为飞龙掌血。
图 1 HPLC图谱
2． 2． 2 方法学考察。①线性关系的考察。计算得线性回归
方程为 Y = 890 867． 95X － 44 672． 1，R = 0． 999 7。试验结果
表明，在 1． 0 ～10． 0 μg /ml 范围内白屈菜红碱浓度与峰面积
的线性关系良好。②精密度试验。计算得峰面积的 RSD 为
0. 80%，表明试验精密度良好。③稳定性试验。计算得白屈
菜红碱的含量的 RSD 为 1． 80%，表明试验稳定性良好。④
加样回收率试验。计算得白屈菜红碱的平均回收率为
99. 8%，RSD为 0． 40%，表明该方法准确、灵敏、可靠，可用于
飞龙掌血中总生物碱和白屈菜红碱的含量测定。
2． 2． 3 含量测定。计算得贵阳、花江、清镇、高坡、贞丰、关
岭、惠水和龙里的飞龙掌血中白屈菜红碱的含量分别为
2. 19、2． 77、2． 07、2． 67、4． 46、7． 25、5． 45 和 5． 91 mg /g;其中，
以关岭的飞龙掌血中白屈菜红碱的含量最高，龙里的次之，
清镇的最低。
3 讨论
(1)制备样品溶液测定白屈菜红碱含量时，对不同的提
取方法和提取时间、次数作了比较。试验结果显示，超声法
提取率高于回流法，故采用超声提取法，提取 2 次，每次 30
min为宜。
(2)试验测定了 8个产地的飞龙掌血中总生物碱的含量
和白屈菜红碱的含量，以关岭的含量最高，清镇的含量最低。
试验结果表明，同一产地的飞龙掌血中 2 个成分含量都较
高，与文献报道的结果一致。
(3)试验采用该色谱条件测定白屈菜红碱的含量［5］，白
屈菜红碱与其他组分分离度好，重现性好，精密度高，且含量
测定操作方法简便，可作为制定苗药飞龙掌血药材质量标准
的依据。
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824 －825．
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3 结论
试验采用超声法提取法提取平贝母中的总生物碱，并采
用比色法测定其含量。研究结果表明，不同平贝母表现类型
的总生物碱含量存在一定差异，但是没有达到显著水平。各品
系的总生物碱含量顺序是:紫茎绿叶 ＞紫茎紫叶 ＞绿茎绿叶。
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3233140 卷 27 期 张艳焱等 贵州不同产地苗药飞龙掌血中总生物碱和白屈菜红碱的含量测定