全 文 ：中国中西医结合杂志 2以又年 6月第 24 卷基础理论研究特集
气短 、浮肿等临床表现 , 久服可减少西药强心利尿剂用
量和心衰反复发作 ,提高生活质量囚 。 本实验研究进一
步证明 ,心复力冲剂可对抗异丙肾上腺素所致大鼠的心
肌损伤 ,明显改善心肌的病理形态变化 , 降低心脏系数 ,
逆转心肌细胞重塑 ,对受损心肌细胞具有明显保护和预
防作用 , 从而提示心复力冲剂保护心肌细胞 、逆转细胞
重塑可能是其防治心力衰竭的机制之一 。
参 考 文 献
1 戴闺柱 , 顾复生 , 戚文航 ,等 . 慢性收缩性心力衰竭治疗建议 .
中华心血管病学杂志 万1卫 ,洲 l) : 7` 刀 .
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(本文编辑 王卫霞 )
余甘子减少高脂血症对兔动脉壁损伤作用的实验研究
王绿娅 , 王大全 2 潘晓冬 ` 杜兰平 ’ 石风茄 ’ 秦彦文 ,
蔺 洁 , 郭恒怡 2 张兰珍 3
摘要 目的 探讨余甘子能否减少高脂血症对兔动脉壁的损伤及机制 。 方法 将 24 只新西 兰雄性白
兔随机分为对照组 、 余甘子组 (4 9 ·吨 一 ’ · d 一 ’ )和高胆固醉血症模型组 , 每组 8 只 。 酶法检测 3 组血脂含量 , 8
周后处死 ,组织匀浆测定主动脉和肝脏脂质含量 , 图像分析法刚定主动脉内膜粥样硬化斑块面积和 内膜面积
与中膜面积 ,光镜观察动脉内膜病 变 。 结果 实验 8 周后余甘子组与高脂组相比 , ( 1 )能显著抑制血清总胆
固醉 (代 ) 、低密度脂蛋白胆固醉 ( LDI J . C )水平的上升 ,增加血清高密度脂蛋 白胆固醉 (DH L C ) ; ( 2) 降低主动
脉和肝脏脂质含童 ; ( 3) 主动脉斑块面积 、 内膜厚度与 中膜厚度比值 明显降低 。 结论 余甘子可能通过调整
家兔脂质代谢 , 防止兔实验性粥样斑块的形成 。
关键词 高胆固醉血症 ;动脉粥样硬化 ;余甘子
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基金项 目 :国家自然科学墓金项目 (N o . 3望刀的 3 9 )
作者单位 : 1 . 北京市心肺血管疾病研究所动脉粥样硬化研究室 (北京 1《洲狡9 ) ; 2 . 中国医学科学院基础医学研究所 ; 3 . 北京中医药大学
通讯作者 : 王绿娅 ,侧 : 13 30 1刀印 75 , E佣` l :面声匆肠@ ~
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中国中西医结合杂志 2X( 抖年 6月第 24 卷基础理论研究特集
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脂质代谢异常是动脉粥样硬化 ( A )S 的主要因素
之一 ,近年来发现用中药降脂也有较好疗效 。 余甘子
是大戟科植物余甘子的果实 , 又名安摩乐果 , 分布于云
南 、福建等地 , 资源丰富 。 早年民间常用于治疗高血
压 、头痛 、 咽喉肿痛等 , 目前对余甘子的研究多集中在
抗感染 、抗癌 、免疫调节〔’】等方面 , 但已见余甘子鲜果
汁降血脂临床观察 2[, 3〕及动物实验 [4〕的报道 , 证实其
有降脂降压的功效 。 刘凤书等 5[] 针对新鲜果汁不易保
存并易被氧化 ,研制了余甘子榨汁 、 干燥新工艺 ,使出
汁率由原来的 25 % 提高到 40 % , 维生素 C 、 类 so D 等
含量提高并干燥成粉 。 但此余甘子粉是否仍然具有降
脂作用 ,及其能否减轻血管壁的损伤进而减缓 AS 的发
生 ,尚缺乏足够的基础研究支持。 本研究旨在探讨云
南余甘子新鲜果汁浓缩粉对实验性高脂血症模型家兔
动脉壁的保护作用 , 为开发利用我国丰富的余甘子资
源提供科学依据 。
平铺于滤纸上 。 以 or %福尔马林固定 , 用透明纸覆盖
描绘内膜斑块病变图形及整条主动脉轮廓 , 经北京航
空航天大学图像分析仪处理 , 测量斑块面积占主动脉
面积的百分比 。 每例定位切取胸主动脉上段 2 c m , 常
规石蜡切片 , HE 染色 , 部分弹力膜 (We ige rt) 染色 ;每组
取 2 例做冰冻切片 , uS dan m染色 。 并取 HE 染色病理
切片 , 用 比KA 显微镜将病理切片信号输入视频印相
机 ,以北京航空航天大学图像分析仪测量主动脉内模
斑块最大厚度 , 内模斑块厚度与中膜厚度比 。
6 统计学方法 应用 S 巧 or . 0 软件 , 两组间比
较用 t 检验统计分析 。
结 果
材料与方法
1 材料 余甘子粉 : 由鲜果汁提取浓缩而成 ,
10 k g 鲜果可提取 40 kg 鲜果汁 , 10 时鲜果汁可浓缩
干燥为 8 9 , 由中国林业科学院昆明资源昆虫研究所
提供 。
2 动物分组及复制模型 健康纯种新西兰家兔
24 只 ,雄性 ,体重 (2 . 2 土 0 . 5 ) k g , 中国药品生物制品鉴
定所实验动物繁育场提供 。 在本院动物室饲喂 1周基
础饲料 , 随机分为 3 组 , 每组 8 只 。 对照组喂普通饲
料 ,高脂组喂高脂饲料 (普通饲料 + 0 . 5% 总胆固醇 ) ,
治疗组喂高脂饲料和余甘子粉 ( 4 9 · k g 一 ’ · d 一 ’ ) 。 共喂
养 8 周 。 自由饮水 ,分笼喂养 , 保持通风 。
3 血脂测定 实验前及实验 4 周 、 8 周 , 空腹 12
h
, 清晨从兔耳缘静脉取血 卜 2 血 ,分别采用氧化酶法
测定血清总胆固醇 ( CT )和甘油三醋 (飞 ) , 采用 I , TA -
M扩十沉淀法测定高密度脂蛋白一胆固醇 (DH L c ) ,低密度脂蛋白一胆固醇 ( DL -L )C 用 irF ed ew al d 公式计算 。
4 组织脂质测定 剥离动脉内膜和中膜 , 滤纸吸
干后称重剪碎 (肝组织此后步骤和动脉一致 ) ;试管中 ,
加入 6 耐 提取液 (氯仿 : 甲醇 二 2 : 1 ) , 浸泡 24 h 容量瓶
定容至 25 耐 ,印℃水浴干燥 24 h ;加人 1血无水乙醇溶
解 ;胆固醇试剂盒测定 。
5 病理形态学检查 实验 8 周后 , 用 2% 戊巴比
妥钠 2 浏 / k g 体重麻醉动物 ,取胸主动脉 , 沿纵轴剖开 ,
由于腹泻感染等原因 , 实验结束时动物存活 20 只
(对照组 7 只 , 高脂组 6 只 ,治疗组 7 只 ) 。
1 各组血脂水平比较 见表 1。 高脂组 4 周和 8
周后 代 和 兀浓度明显高于实验前 ( 尸 < 0 . 01 ) ; 实验
后 8 周高脂组 、余甘子组 代 、兀 和 DL L C 与对照组 比
较 , 明显升高 (分别为 p < 0 . 01 、 p < 0 . 05 和 p < 0 . 05 ) ,
说明复制模型成功 ,但余甘子组显著低于高脂组 ( P <
0
.
05 ) ;实验后 8 周高脂组 、余甘子组 DH L一 C 与对照组
比较明显升高 ( 尸 < 0 . 01 ) ,余甘子组明显高于高脂组
( 尸 < 0 . 01 ) 。 表明余甘子能明显抑制代 、兀 和 DL 卜C
的上升趋势 ,并能提高 H D L C 水平 。
2 余甘子对家兔主动脉和肝脏脂质的影响 见
表 2 。 实验 8 周后余甘子组主动脉和肝脏脂质均比高
脂组降低 (尸 < 0 . 05 ) 。 提示余甘子能减少主动脉壁和
肝脏脂积 。
3 病理形态学观察 实验 8 周后 , 肉眼可见对照
组家兔主动脉内膜表面光滑未见粥样硬化病变 。 高脂
组 6 只中 5 只病变严重 , 主动脉内膜可见广泛的乳白
色脂质条纹和明显突出的 AS 斑块形成 , 约 50 % 的内
膜被粥样硬化斑块覆盖 。 余甘子组 7 只中 2 只病变较
重 ,其余 5 只病变明显减轻 , SA 斑块比较局限且薄 。
光学显微镜观察 (图略 ) : 对照组主动脉内膜由单
层内皮细胞覆盖 , 内弹力膜整齐 ; 中膜 SM C排列规整 ,
外膜较薄 ;高脂组主动脉内膜下有大量泡沫细胞 , 约
8 一 14层 ,一些泡沫细胞裂解 ,脂质类物质游离于细胞
外 , We igert 染色可见斑块内大量胶原纤维形成
, 内弹
力板分离断裂 , 可见中膜平滑肌细胞排列不规则并向
内膜迁移 , 可见大量脂质沉积 。余甘子组 主动脉病变
中国中西医结合杂志么】又年 6月第 24 卷基础理论研究特集
裹 1 各组动物血清咒 、犯 、 HDL C及 L D I产 C 比较 (伽怕 F L , 无 + :
组别 n 代 化 班 ) L C U兀 . C
对照 1 .伪 士 0 . 25
职261 . 5 3 士 0 . 26
0 573 士 0
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1 1
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568一卿姗一柳14 32 土 2 .刀 l 4 5() 士 0 . 1 . 179 士 0 . 142 13 . 85 1士 1 .
余甘子 0周
4周
8周
1
.
11 士 0 . 98 0
.
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8
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5 3 士 1 . 25 0
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7 10士 0 . 128 ( )
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1 1
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注 :与对照组同期比较 , ` p < .0 仍 , ` . p < .0 01 ;与高脂组同期比较 , △ p < .0 仍 ,必尸 < 0 . 01
裹 2 各组主动脉和肝脏脂质结果比较 (解 gm 湿重 , * 士 , ) 发生机理及探索防治手段的突破 口 ,而脂质代谢与 SA
组 别 。 主动脉脂质 肝脏脂质 的关系一直倍受学者们的关注 。
对 照 7 1 . 25 士 .5 67 52 .印 士 .8 田 余甘子 (愚郊阮了“腼 emb lica L . )系大戟科叶下株落
高 脂 6 41 .2 1土 8 . 52 · 186 .肠 * or . 47 · 叶小乔木或灌木果树 , 原产印度 、 巴基斯坦等国 , 在我
余甘子 7 .16 40 * .5 54n 10 .59 * .65 3△ 国栽培利用约 1 80 年历史 6[] 。 主要分布于云南 、 贵
注 :与对照组比较 , . p < 。 . 01 ;与高脂组比较 , △尸 < 。 . 05
明显轻于高脂组 , 内弹力板完整 ,仅见较少的病灶 ,泡
沫细胞有 2 一 5 层 。 脂质浸润明显少于高脂组 ,有的仅
见内皮下疏松及少量细胞外脂质沉积 , 少见明显的平
滑肌细胞增生及大量的弹力纤维形成 。
图像分析仪测量斑块面积占主动脉面积的百分比
及内膜斑块厚度及内膜厚度 / 中膜比值 ,见表 3 。 余甘
子组与高脂组比较斑块面积 、 内膜 / 中膜厚度比均显著
减少 (尸 < 0 . 05 、 尸 < 0 . 01 ) 。 提示余甘子可减少实验性
高脂血症所诱发的动脉内膜增生 。
表 3 各组家兔主动脉粥样硬化斑块面积比较 (无 土 , )
组 别 SA 斑块面积比
(% )
内膜 /中膜厚度比
对 照
高 脂
余甘子
6 50
.印 士 12 . 36
内膜斑块厚度
(~ )
0
.刀 土 0 .伪
0
.
72 士 0 . 13 1 . 3 8 土 0 . 38
7 3 9
.
46 士 6
.
5 3
份
0
.
3 5土 0 . 12二 0 .砚 土 0 . 32 “ .
注 :与高脂组比较 , ’ p < .0 05 , 什 尸 < 0 . 01
讨 论
AS 性心脑血管疾病是危害人类健康的常见疾病 ,
以脂质和纤维成分在动脉中堆积为特征 。 内膜下脂质
沉积 、 血管平滑肌细胞和胶原增殖 、泡沫细胞形成为主
要特征的广泛性动脉病变 。 SA 一旦发生 ,就会因为动
脉壁弹性下降 、动脉管腔狭窄 、继发性血栓形成而导致
相应脏器缺血 ,严重时可危及生命 。 作为心脑血管疾
病的共同病理基础 , SA 一直是人们研究心脑血管疾病
州 、福建 、 广东 、广西 、 台湾等省区 , 分布广泛 , 资源丰
富 ,特别为藏族习用药材 。 余甘子风味独特 ,含有丰富
的维生素 C 、 碳水化合物 、 蛋白质 、 有机酸 、纤维素 、多
种维生素及矿物质 。 现代研究表明 , 余甘子还含有防
癌 、抗衰老等功效 。 故近年来 ,对余甘子功能因子的研
究及其相应功能食品的开发越来越引起重视 。 但是药
效因产地不同存在差异 。 夏泉等图报道有 17 个国家
及民族将余甘子作为一种重要的传统药物使用 , 余甘
子与保肝 、抗癌 、 健胃、 抗诱变 、 抗衰老等 35 种功能有
关 ,是一种具有广阔开发前景的药用植物 。 目前余甘
子已经成为联合国卫生组织指定在全世界推广种植的
3种保健植物之一至8 1。
血浆脂质在动脉壁的沉积是 SA 发生和发展的必
要条件 , sA 斑块的发生与血脂水平增高有关91[ , 脂质
的作用主要在于损伤内皮 , 活化单核细胞 ,随后被吞噬
形成泡沫细胞 ,促进 AS 的形成 , 本研究结果显示高脂
组随着血清 代 及 功L C 水平的升高 , 主动脉壁和肝
脏脂质沉积 , 三L动脉壁受损可见内皮不完整 、 内膜胶原
纤维增生 、 内弹力板破坏 、平滑肌细胞迁移 、变性 , 局部
脂质沉积 ,形成 SA 斑块 , 这些变化均表明高脂血症动
物模型复制成功 。 给药 8 周后 ,余甘子能明显抑制高
胆固醇饮食家兔的血清 CT ,降低血清咒 , 升高 H DL . C ,
并能减少主动脉壁 和肝脏脂质沉积 和 SA 的形成 。
代 、兀 等被视为 SA 病变中的危害因子 , DH L C 则是
SA 病变中的保护因子 , H DL C 具有促进组织细胞内胆
固醇的清除 , 能对抗氧化 DL L 的毒性的作用 , 因此
中国中西医结合杂志 2X( 又年 6月第 24 卷基础理论研究特集
DH L c 浓度升高可抑制 sA 形成 。 郑宝东 [’川报道余甘
子鲜果汁可使大鼠血清总胆固醇值显著下降 , DH L
C / T C 比值显著升高并可显著提高血清超氧化物歧化
酶活性并降低血清脂质过氧化物水平 ; 凡ut[ 3〕报道印
度余甘子鲜果汁不仅预防家兔血脂增高并增加主动脉
管腔直径 , 上述报道与我们的结果相一致 。 余甘子鲜
果汁降血脂的机理可能与余甘子具有大量多酚类成分
可抑制脂肪酶的活性作用 , 从而使脂肪分解与吸收减
少 , 促进脂肪排泄与转化 ; nA il a 等【川报道余甘子鲜
果汁可抑制小鼠肝 HMG CoA 还原酶活性 , 通过抑制
体内胆固醇合成而起到降脂作用 , 提示调整脂质代谢
紊乱有可能是余甘子抗高胆固醇饮食家兔血管壁受损
机理之一 。
高胆固醇血症是众多内皮细胞损伤原因之一 , 内
皮损伤是 sA 的始动环节 {’ 21 。 体外实验0[] 表明 , 外界
的一些刺激可使内皮细胞产生和分泌血小板源生长因
子 、纤维母细胞生长因子和内皮素等几种促进平滑肌
细胞增殖的因子增多和生长抑制因子减少 ,从而引起
平滑肌细胞的增殖 , 促进中膜平滑肌细胞迁人内皮下
间隙 、胶原合成增强 ,是 SA 病变发生中的重要病理过
程之一 。 本实验中家兔饲喂高胆固醇饮食 8 周后 , 高
脂组光镜下可见内皮细胞大部分脱落 , 主动脉粥样斑
块形成 ,提示高胆固醇饮食引起家兔主动脉内皮细胞
损伤是导致 SA 形成的重要原因之一 。 余甘子组虽有
病变 ,但与高脂组比较 , 主动脉病变明显轻于高脂组 ,
仅见较少的病灶 ,泡沫细胞有 2 一 5 层 。 脂质浸润明显
少于高脂组 ,仅见内皮下疏松及少量细胞外脂质沉积 ,
平滑肌细胞增生及弹力纤维生成均减少 。 经图像分析
仪测量治疗组与高脂组比较斑块面积 、内膜 / 中膜厚度
比均显著减少 ,提示余甘子可保护内皮细胞和基底膜
完整 、抑制胶原纤维和内膜的增生 、减少平滑肌细胞增
殖迁移 , 并有减少 SA 斑块形成的作用 。 我们曾报
道〔’ 2 ]余甘子对血管壁的保护机理可能与其所具有的
多酚类抗氧化物质可减少脂质过氧化物 、 Ox 一DL L 的生
成 ,并抑制内皮素表达 ,减轻内皮细胞受损 , 进而降低
平滑肌细胞增殖程度 , 减少泡沫细胞形成 , 延缓 SA 的
发生 、发展进程 ,最终 SA 病变减轻 。
总之 ,本实验初步证实云南余甘子具有调整血浆
脂质代谢 ,保护血管内皮 , 抑制了高胆固醇血证引起
的家兔主动脉壁损伤和 SA 形成 ,这将为 AS 防治的研
究提供一个新思路 , 具体机理有待于进一步深入研
究 。
(感谢由中国林业科学院昆明资源昆虫研究所刘风书与李
绍家教授对本研究的大力支持 )
参 考 文 献
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(本文编辑 陈冬燕 )