全 文 ：China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 4 中国药房 2016年第27卷第4期
矮陀陀为楝科植物地黄连属云南地黄连Munronia dela-
vayi Franch.的干燥全株，又称小地黄连、小独根、千年矮、思茅
地黄连等。其味甘、微苦，性凉，具有清热解毒、活血止痛的功
效，可用于治疗跌打瘀痛、风湿关节痛、咽喉炎、痈肿疔疮 [1]。
在民间有着“爬不得坡，离不开矮陀陀[2]”“千药万药，不如矮陀
陀”“半死不活，快服矮陀陀”等说法。该药为极具民族特色的
一种植物药[3-4]，在民间使用广泛并具有较好的临床疗效，但目
前为止对矮陀陀的药理、化学成分等方面的研究较少，只有对
其鉴别研究的相关报道[5]。笔者前期试验发现矮陀陀含有生
物碱物质，而生物碱具有抗炎、镇痛等活性[6-9]。在本试验中，
笔者采用正交试验法优选矮陀陀中总生物碱含量测定条件，
并用于不同产地矮陀陀药材的含量测定，以期为完善该药材
质量控制提供参考。
1 材料
1.1 仪器
8453型紫外可见分光光度计（美国安捷伦科技公司）；
BT224S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；
KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；PB-10
型精密酸度计（德国赛多利斯集团）；LSY型电热恒温水浴锅
（北京市医疗设备厂）。
1.2 药品与试剂
矮陀陀均采自广西，经广西中医药大学蔡毅教授鉴定为
楝科植物地黄连属云南地黄连Munronia delavayi Franch.的干
燥全株；丁溴东莨菪碱对照品（中国食品药品检定研究院，批
号：00130-201103，纯度：99.7％）；三氯甲烷、邻苯二甲酸氢钾、
溴甲酚绿均为分析纯，水为纯净水。
2 方法与结果
壮药矮陀陀中总生物碱含量测定条件优选及不同产地药材含量
比较Δ
马雯芳＊，唐玉荣，颜萍花，曾祥燕，蔡 毅#（广西中医药大学药学院，南宁 530001）
中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2016）04-0476-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.04.14
摘 要 目的：优选壮药矮陀陀中总生物碱的含量测定条件，并对不同产地药材进行含量比较。方法：采用正交试验法，以总生物
碱含量为评价指标，以溶剂用量、超声时间、超声提取次数、缓冲液pH为考察因素，优选壮药矮陀陀中总生物碱含量测定的条件。
采用优选的含量测定条件，测定 18个产地不同采收季节药材的总生物碱含量。结果：优选的含量测定条件为溶剂用量（三氯甲
烷）20 ml，超声处理 3次，每次超声 15 min，缓冲液 pH为 4.5。18个产地药材总生物碱含量在 0.6～11.98 mg/g之间，含量差异较
大。其中以隆林县、田林县在10月份采收的药材总生物碱含量最低。结论：优选的含量测定条件可用于测定壮药矮陀陀中总生
物碱的含量及该药材的质量控制。该药材生物碱含量与产地、采收季节等有关。
关键词 矮陀陀；总生物碱；含量测定；正交试验
Optimization of the Content Determination Conditions of Total Alkaloids from Zhuang Medicine Munronia
delavayi and Comparison of the Contents in M. delavayi from Different Producing Areas
MA Wenfang，TANG Yurong，YAN Pinghua，ZENG Xiangyan，CAI Yi（College of Pharmacy，Guangxi University
of TCM，Nanning 530001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize the content determination conditions of total alkaloids from Zhuang medicine Munronia
delavayi，and to determine the content of total alkaloids in M. delavayi from different producing areas. METHODS：With the con-
tent of total alkaloids as index，using solvent amount，ultrasonic time，ultrasonic extraction times and pH value of buffer as fac-
tors，the content determination conditions of total alkaloids from Zhuang medicine M. delavayi were optimized by orthogonal test.
Optimized content determination conditions were adopted to determine the content of total alkaloids in M. delavayi from 18 produc-
ing areas in different harvest time. RESULTS：The optimum content determination conditions were as follows as the amount of sol-
vent（CHCl3）20 ml，ultrasonic processing for 3 times，lasting for 15 min each time，pH value of buffer 4.5. The contents of total
alkaloids in M. delavayi from 18 producing areas were between 0.6-11.98 mg/g，showing great difference. M. delavayi from Long-
lin county and Tianlin county harvested in Oct. had the lowest content of total alkaloids. CONCLUSIONS：Optimized content deter-
mination condition can be used for the content determination of total alkaloids in Zhuang medicine M. delavayi and quality control
of it. The content determination of total alkaloids in M. delavayi is related to producing area and harvest time.
KEYWORDS Munronia delavayi；Total alkaloids；Content determination；Orthogonal test
Δ基金项目：广西壮药质量标准（第三卷）质量评价与标准研究项
目（No.GXZC2014-G3-1577-YLZB-B-3）；广西自然科学基金创新研究
团队项目（No.2011GXNSFF018006）；广西“2011协同创新中心”——
壮瑶药协同创新中心（No.桂教科研〔2013〕20号）；广西壮瑶药重点实
验室（No.桂科基字〔2014〕32号）；广西重点学科（壮药学）（No.桂教科
研〔2013〕16号）；“八桂学者”工程专项经费项目
＊讲师，博士。研究方向：中药品种、品质。电话：0771-3137585。
E-mail：alswen@163.com
#通信作者：教授，硕士生导师。研究方向：中药、民族药的质量
标准。电话：0771-3137585。E-mail：caiyi118@163.com
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中国药房 2016年第27卷第4期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 4
2.1 供试品含量测定条件的优选
2.1.1 缓冲溶液的制备 称取邻苯二甲酸氢钾及氢氧化钠固
体，分别加蒸馏水溶解并定容，均制备成 0.2 mol/L的溶液；用
氢氧化钠溶液调节邻苯二甲酸氢钾溶液的 pH，制得邻苯二甲
酸氢钾缓冲液（pH＝4.5）。
2.1.2 酸性染料的制备 取约 40.0 mg溴甲酚绿粉末，置于
100 ml量瓶中，加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液（pH＝4.5）至刻度，
振摇使溶解，摇匀，即得0.04％溴甲酚绿溶液。
2.1.3 波长的选择 精密吸取丁溴东莨菪碱对照品溶液1 ml，
挥干溶剂，残渣用邻苯二甲酸氢钾缓冲液（pH＝4.5）5.0 ml溶
解并移入分液漏斗中，再精密加入 0.04％溴甲酚绿溶液 2.0
ml，摇匀，最后加入三氯甲烷 10 ml，振摇 2 min，静置 15 min
后，分出下层，用三氯甲烷定容至10 ml，加入适量无水硫酸钠
脱水；同上操作制备不含丁溴东莨菪碱的阴性对照品溶液作
为空白。分别用紫外分光光度计在 400～800 nm波长范围内
进行扫描，结果测得对照品溶液的最大吸收波长为416 nm，空
白对照不干扰测定。且供试品溶液测定结果与对照品所测基
本一致，也在 416 nm附近有最大吸收。最终确定检测波长为
416 nm。丁溴东莨菪碱对照品与供试品光谱图见图1。
2.1.4 正交试验方法考察供试品溶液制备条件 （1）正交试
验设计。根据单因素试验及结果，以三氯甲烷为提取溶剂，采
用超声提取方法提取药材，以溶剂用量（A）、超声时间（B）、超
声提取次数（C）、缓冲液 pH（D）为因素，以总生物碱含量为指
标进行正交试验。因素与水平见表1。
表1 因素与水平
Tab 1 Factors and levels
水平
1
2
3
A（溶剂用量），ml
20
25
30
因素
B（超声时间），min
15
30
45
C（超声提取次数），次
1
2
3
D（缓冲液pH）
4.0
4.5
5.0
（2）正交试验安排与结果分析。取矮陀陀药材（编号：
ATT-1）干燥粗粉 9份，每份 1 g，精密称定，置于 100 ml具塞锥
形瓶中，按正交试验设计表进行试验，平行 3次，制备样品，测
定含量，结果见表 2。试验结果经SPSS 19.0软件进行方差分
析，结果见表3。
由表 2直观分析可知，各因素作用主次顺序为C（提取次
数）＞B（提取时间）＞D（缓冲液 pH）＞A（溶剂用量）；A（溶剂
用量）因素中以K1最大，B（提取时间）因素中以K1最大，C（提
取次数）因素中以K3最大，D（缓冲液 pH）因素中以K2最大，得
出最优提取工艺为A1B1C3D2。由表3方差分析可知，各因素对
总生物碱提取均具显著影响，与直观分析结果一致。故确定
优选的含量测定条件为：溶剂用量（三氯甲烷）20 ml，超声提取
（功率：250W，频率：40 kHz）3次，每次超声15 min，缓冲液pH
为4.5。
表2 正交试验设计及结果
Tab 2 Design and results of orthogonal test
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
17.406
15.918
16.791
1.488
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
19.170
16.202
14.977
4.193
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
12.051
18.350
19.305
7.254
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
14.963
18.085
17.008
3.122
总生物碱含量，mg/g
1 2 3
4.210
6.939
6.257
6.787
5.494
3.637
7.754
3.960
5.077
4.323
6.684
6.156
7.065
5.759
3.660
7.782
3.759
5.161
4.400
6.602
6.472
6.727
5.445
3.810
7.388
3.841
5.021
平均含量，mg/g
4.311
6.742
6.295
6.860
5.566
3.702
7.641
3.853
5.086
表3 方差分析结果
Tab 3 Results of variance analysis
变异来源
A
B
C
D
E（误差）
Ⅲ型平方和
0.008
0.074
0.352
0.050
0.004
自由度
2
2
2
2
2
均方
0.004
0.037
0.176
0.025
0.000
F
17.151
166.115
793.340
113.468
P
＜0.01
＜0.01
＜0.01
＜0.01
2.1.5 供试品溶液的制备 称取粉碎后的矮陀陀粉末（过 20
目筛）1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入20 ml三氯
甲烷，称定质量，超声提取（功率：250W，频率：40 kHz）3次，每
次15 min，放冷，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，摇
匀，滤过，合并续滤液，即得。
2.2 方法学考察与结果
2.2.1 线性关系考察 精密称定丁溴东莨菪碱对照品适量，
加三氯甲烷制成每 1 ml含 0.377 2 mg的对照品贮备溶液。分
别精密吸取丁溴东莨菪碱对照品贮备溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、
8.0、10 ml，置于10 ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，制备成
丁溴东莨菪碱系列对照品溶液。按“2.1.3”项下方法操作，在
416 nm波长处测定，以吸光度（y）为纵坐标、丁溴东莨菪碱质量
浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 y＝0.002 7x+
0.033 7（r＝0.999 4）。结果表明丁溴东莨菪碱检测质量浓度线
性范围为0.018 86～0.377 2 mg/ml。
2.2.2 精密度试验 精密吸取丁溴东莨菪碱对照品溶液 1.0
ml，按“2.1.3”项下方法操作测定，平行测定 6次。结果吸光度
的RSD＝0.75％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.2.3 稳定性试验 取矮陀陀（编号：ATT-1）供试品溶液，每
隔30 min测1次吸光度。结果在5 h内吸光度的RSD＝2.00％
（n＝10），表明供试品溶液在5 h内稳定性较好。
2.2.4 重复性试验 精密称取矮陀陀药材干燥粗粉（编号：
ATT-1）1 g，共 6份，按照“2.1.5”项下确定的提取条件制备供
试品溶液，在“2.1.3”项下方法操作测定，结果含量的RSD＝
1.13％（n＝6），表明方法重复性良好。
2.2.5 加样回收率试验 精密称定已知丁溴东莨菪碱含量
（4.570 0 mg/g）的矮陀陀药材干燥粗粉（编号：ATT-1）0.5 g，共
图1 紫外扫描光谱图
a.丁溴东莨菪碱对照品；b.矮陀陀供试品
Fig 1 UV scanning spectrum
a. scopolamine butylbromide control；b. test sample of M. delavayi
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0
300 350 400 450 500 550
波长，nm
吸
光
度
a
b
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6份，分别精密加入丁溴东莨菪碱对照品溶液（2.411 4 mg/ml）
1 ml，按“2.1.5”项下确定的提取工艺制备供试品溶液，按
“2.1.3”项下方法操作测定，计算得平均加样回收率为101.50％，
RSD＝1.94％（n＝6）。
2.3 不同药材含量测定结果
分别精密称取不同批次的矮陀陀干燥粗粉约1 g，精密称
定，按“2.1.5”项下确定的提取工艺制备样品，每产地样品平行
3份，按“2.1.3”项下方法操作测定。各产地矮陀陀含量测定结
果见表4。
表4 各产地矮陀陀含量测定结果（n＝3）
Tab 4 Content determination results of M. delavayi from dif-
ferent producing areas（n＝3）
编号
ATT-1
ATT-2
ATT-3
ATT-4
ATT-5
ATT-6
ATT-7
ATT-8
ATT-9
ATT-10
ATT-11
ATT-12
ATT-13
ATT-14
ATT-15
ATT-16
ATT-17
ATT-18
产地
靖西县三合街
靖西县
隆林县
德保县
靖西县同德乡
靖西县武平乡
靖西县新甲乡
靖西县河阳村
靖西县城郊区
靖西县禄峒乡
靖西县地洲乡
隆林县
隆林县
田林县
田林县
隆林县
隆林县
田林县
采集时间
2015.05.02
2013.06.15
2014.04.27
2014.05.31
2014.05.31
2014.05.31
2014.06.01
2014.06.01
2014.06.01
2014.06.01
2014.06.01
2014.07.04
2014.10.11
2014.10.16
2015.01.10
2015.01
2015.05.26
2015.05.31
采收季节
春季
春季
春季
春季
春季
春季
夏季
夏季
夏季
夏季
夏季
夏季
秋季
秋季
冬季
冬季
春季
春季
含量，mg/g
4.57
3.86
3.39
5.17
2.37
2.07
2.99
6.75
7.34
4.49
6.62
2.72
0.69
0.60
3.80
2.08
3.83
11.98
RSD，％
0.51
1.88
1.93
2.00
1.52
1.89
0.62
1.95
0.95
1.42
1.75
1.66
1.78
1.41
1.72
0.87
1.71
0.35
3 讨论
在测定生物碱含量的几种方法中，高效液相色谱法对一
种或几种单体生物碱含量测定灵敏度高、准确性好，但对总生
物碱含量测定结果不理想；酸碱滴定法测定总生物碱的含量
结果误差较大；酸性染料比色法测定较准确，且操作简单，近
年来应用广泛，故本试验采用酸性染料比色法测定总生物碱
含量[10-12]。
在前期试验中对不同提取溶剂进行了考察，其中三氯甲
烷提取所得总生物碱含量最高（3.850 0 mg/g），乙醇次之
（2.950 1 mg/g），三氯甲烷（加氨水适量）与三氯甲烷-甲醇（5 ∶
1，加氨水适量）所得更少。在前期试验中还考察了冷浸（24
h）、回流（40 min）、超声（40 min）3种提取方法的提取效果，结
果冷浸法所得总生物碱最高（4.211 5 mg/g），超声法（3.807 8
mg/g）与回流法（3.656 4 mg/g）相差不大，但从试验操作的便利
性与可行性方面考虑，最终选用超声处理法。本文对测定矮
陀陀总生物碱含量的检测波长、缓冲液pH、提取溶剂、超声提
取时间等试验条件进行了优化筛选，确定最优提取工艺为：溶
剂用量（三氯甲烷）20 ml，超声处理 3次，每次超声 15 min，缓
冲液pH为4.5。
本文对不同采收时间、不同采收地点的 18批次矮陀陀药
材总生物碱含量进行了测定，结果各批次药材总生物碱含量
在0.6～11.98 mg/g之间，含量差异较大。其中以隆林县、田林
县在 10月份采收的药材总生物碱含量最低，可能与该地区秋
季干旱少雨有关；同一产地药材在不同季节，其所含总生物碱
量存在差异，可能受季节变化影响；同时，不同产地药材在同
一季节，其所含总生物碱量亦有差异，可能与其所生长的地理
环境有关。总之，该药材生物碱含量受产地、采收季节等因素
影响明显，对其总生物碱含量与临床疗效的相关性进一步研
究，则对其质量控制更具现实意义。
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（收稿日期：2015-07-20 修回日期：2015-11-15）
（编辑：余庆华）
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