全 文 ：正交设计法在变叶木组织培养中的应用
朱　艳　秦民坚
(中国药科大学 , 南京 210038)
　　摘　要　以琴叶变叶木(Codiaeum variegatum var.pictum)的当年生或二年生茎段诱导顶芽 、侧芽萌发 , 以其形成
的小绿叶为外植体 ,利用正交设计法考察四种不同激素对其叶片愈伤组织诱导的影响 ,结果表明:6-BA 对愈伤组织
的诱导是必需的 ,生根培养以 1/ 2MS+NAA0.5mg/1+IBA0.1mg/ l最好。
　　关键词　正交设计;琴叶变叶木;组织培养
Application of Orthogonal Design in Tissue Culture of Codiaeum variegatum
Zhu Yan , Qin Minjian
(China Pharmaceutical University ,Nanjing 210038)
Abstract　The new or last stem-segment of C.variegatum var .pictum was induced terminal bud or side bud
sprouting and took the little green leaf as explant.This experiment inspected the effect of four different phyto-
hormones on callus induction with the orthogonal design.The results showed that 6-BA was essential to induc-
tion of callus.The growth of roots was best on 1/2MS medium with the addition NAA0.5mg/1+IBA0.1mg/
1.
Key words　Orthogonal design , Codiaeum variegatum var.pictum , Tissue culture
　　变叶木(Codiaeum variegatum)原产马来西亚 ,为
大戟科变叶木属常绿灌木 ,是重要的热带 、亚热带
中 、小型观叶植物。九十年代初开始由国外引进 ,由
于其叶型 、叶色变化繁多 ,观赏时间长 ,深受人们的
欢迎 ,主要靠扦插繁殖 ,繁殖系数低 ,无法满足市场
需求。本文在前人工作(1 ,2)的基础上 ,以琴叶变叶
木(C.variegatum var.pictum)为材料 ,利用正交设
计法进行组织培养和快速繁殖 ,获得了试管苗 ,为满
足市场需求提供了一条有效的途径 。
1　材料与方法
1.1　材料
供试材料为琴叶变叶木的当年生或二年生茎
段。
1.2　培养基配方
MS为基本培养基 ,附加蔗糖 30g/ l ,琼脂 8g/ l ,
pH15.8。
1.3　培养条件
121℃下高温灭菌 20min ,材料均培养在温度
25℃±2℃,光照强度 20001x ,10h/d光周期条件下。
1.4　实验方法
接种当天剪取琴叶变叶木的当年生或二年生茎
段 ,剪去叶片 ,用自来水反复清洗表面 ,于超净工作
台内用 75%酒精消毒数秒 , 0.1%升汞消毒 15min ,
无菌水冲洗 5次 ,将消毒后的材料切分为 1cm左右
带顶芽或腋芽的茎段 ,接种到 MS +BA 1.0mg/1+
NAA0.1mg/L培养基上诱导顶芽 、腋芽萌发 ,待其长
至 5cm左右时 ,剪取叶片成 5mm左右方块接入激素
按正交设计法设计的 MS培养基中诱导愈伤组织 ,
进而产生不定芽 ,考察四种不同激素对变叶木叶片
诱导愈伤组织 、不定芽的影响;再接入生根培养基诱
导生根。本实验一方面扩大了外植体来源 ,为扩大
繁殖提供了基础 ,另一方面分析了不同浓度植物激
素对变叶木组织培养的影响 。
2　结果与分析
2.1　外植体的获得
将消毒后的材料正插于培养基MS+BA1.0mg/ l
+NAA0.1mg/1上 , 4周后侧芽或顶芽逐渐萌发出
来 ,嫩茎可长达5mm ,靠近培养基的侧芽有时可长出
一丛小绿叶 ,其中可见 3 ～ 5个极短的嫩枝 ,这与谭
文澄[ 1]的研究结果一致 。待绿叶长至 3cm 左右时 ,
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在无菌条件下剪取叶片成 5mm 左右方块作为外植
体 ,其余的可继续培养 ,不断剪取外植体 。
2.2　愈伤组织诱导及不定芽的产生
采用 L9(34)正交表 ,考察 2 ,4-D 、6-BA 、NAA 、IAA
四种激素对变叶木幼叶愈伤组织诱导的影响 。
表 1　L9(34)因子水平表
水平 A(2 , 4-D) B(6-BA) C(NAA) D(1AA)
1 0 0 0 0
2 1 1 0.1 0.1
3 2 3 0.2 0.2
表 2　不同激素及其浓度的正交实验结果
实验组 因　素
A B C D
愈伤组织的
增殖系数(%)
1 0 0 0 0 0
2 0 1 0.1 0.1 63.1
3 0 3 0.2 0.2 24.0
4 1 0 0.1 0.2 0
5 1 1 0.2 0 74.8
6 1 3 0 0.1 78.9
7 2 0 0.2 0.1 0
8 2 1 0 0.2 81.4
9 2 3 0.1 0 72.5
R(%) 66.8 219.3 61.5 41.9
注:每组接种 20瓶 ,每瓶接种 4块外植体 ,愈伤组织的增殖系数定为
愈伤块数占接种块数的百分率。(污染不计入)
根据设计安排组织了 9次实验 ,因子水平安排见表
1 ,45d后观察实验结果(见表 2)。
从表2可以看出 , BA 对于 变叶木愈伤组织的
诱导是必需的 ,与其它激素配合使用时 ,2 ,4-D的诱
导作用强于NAA ,NAA的诱导作用强于 IAA ,其中以
实验组合8效果较好。对产生的愈伤组织进行两次
断代培养(不添加 2 , 4-D),大部分愈伤组织均可产
生不定芽 ,其中以实验组合 5 、6 、8 、9产生的不定芽
相对较多 ,且形成的苗较粗壮 ,这与愈伤组织诱导过
程中添加2 , 4-D有关。
2.3　生根诱导培养
对继代培养所得到的无根小苗进行生根培养 ,
发现 1/2MS 培养基的生根效果明显比MS 好 ,加入
0.1mg/ l IBA可以提高变叶木试管苗的生根率 ,以1/
2MS+NAA0.5mg/ l+ IBA0.1mg/ l最好。
2.4　试管苗移栽
当生根试管苗长至 4 ～ 5cm 高时 ,在温室下再培
养一周 ,打开瓶盖炼苗 2 ～ 3d ,从瓶中取出试管苗 ,
洗去根部的培养基 ,移入灭菌沙壤土中 ,保持足够的
湿度 ,成活率较高 ,无根苗若精细养护 ,也可不经生
根培养 ,而像常规扦插一样生根 。
参 考 文 献
[ 1] 　潭文澄.变叶木的侧芽培养.植物生理学通讯.1984.20(2).36
[ 2] 　李文安, 傅婉华.变叶木的快速繁殖.植物生理学通迅.1991 , 27
(4):293
(上接第 73页)
喜光 ,但光照不利于开花。它非常适应于的荫湿的
林下环境 ,可用于林荫下地被 的绿化和美化 。
4.地稔(Melastoma dodecandrum):10 ～ 20cm高常
绿小灌木 。在广州可周年开花 。它喜光 ,但又特别
适应于林下的荫湿生长环境。其耐压性较好 ,可被
利用为红花点缀的草坪植物。
5.银毛野牡丹(Tibouchina aspera):1 ～ 3m 高的
常绿灌木 ,其叶型奇特 ,银光闪烁 ,株型优美 ,紫色花
特别鲜艳 。其扦插繁殖特别容易 ,成片扦插可形成
低矮的绿化篱笆或地被 ,绿化美化效果极佳。
参 考 文 献
[ 1] 　Murashige T , Skoog F(1962)A revised medium for rapid growth and
bioassays with tobacco tissue culture.Physiol Plant 15:473-497
[ 2] 　中国科学院中国植物志编辑委员会 , 1990 ,中国植物志(第 56
卷),科学出版社:152-161
[ 3] 　马国华 ,林有润 ,简曙光 ,刘念 , 2000,野牡丹和地稔的离体培养
和植株再生 ,植物生理学通讯 ,3:233-234
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