全 文 ：收稿日期:2006-03-29
蝉翼藤的药效学研究
李 丽 1 , 李勇文 1 , 李植飞 1 , 徐 庆 1 ,陈昭英 2
(1.桂林医学院 , 广西桂林 541001;2.广西医科大学第六附属医院药剂科 541000)
内容提要:目的:研究蝉翼藤水提物(CYT)的抗炎作用及部分机制。方法:采用巴豆油诱导的小鼠耳肿胀 、角叉菜胶
诱导的小鼠足爪肿胀 、角叉菜胶致大鼠胸膜炎和棉球诱导的大鼠肉芽肿模型观察蝉翼藤的抗炎作用;对角叉菜胶致大鼠
胸膜炎大鼠胸腔渗出液中总蛋白 、NO及 PGE2含量的测定和对小鼠炎性组织中 PGE2含量的测定 , 初步探索其作用机制。
结果:蝉翼藤水提物对巴豆油诱导的小鼠耳肿胀 、角叉菜胶诱导的小鼠足爪肿胀 、棉球诱导的大鼠肉芽肿 、角叉菜胶致大
鼠胸膜炎具有抑制作用 ,其可抑制角叉菜胶所致小鼠炎症组织中的产生(p<0.05或 p<0.01), 对角叉菜胶致大鼠胸膜炎
大鼠胸腔液中 、及 PGE2有抑制作用。结论:蝉翼藤有较强的抗炎作用 , 抗炎机制与抑制 PGE2 、NO生成 , 以及抑制总蛋白
渗出有关。
关键词:蝉翼藤;提取物;炎症;作用机制;前列腺素 E2;一氧化氮
中图分类号:284.1 文献标识码:B 文章编号:1002-1108(2006)06-0046-03
蝉翼藤(SecuridacainappendiculataHassk.)为远志科蝉
翼藤属攀援灌木 , 我国产于广东 、海南 、广西和云南 [ 1] 。其
根茎味辛 、甘 、苦 , 性微寒。 有活血化淤 、消肿止痛 、清热利
尿的功效 , 其茎叶常用于治疗过敏性皮疹 [ 2] 。本试验研究
和考察蝉翼藤提取物的抗炎药理作用并初步探讨其作用
机制 , 为进一步开发利用蝉翼藤 , 为临床应用提供理论及
实验依据。
1 实验材料
1.1 药品 蝉翼藤(由玉林制药厂提供)。蝉翼藤浸膏
(CYT)(制备:CYT粗粉 25kg, 水煮三次 , 过滤 , 合并滤液 ,
浓缩到 1000ml,备用);地塞米松片(广东华南制药厂 , 批号
030901)。
1.2 试剂 一氧化氮试剂盒(南京建成生物工程研究, 批号
020310);总蛋白(TP)测定试剂盒(双缩脲法)(成都迈克生
物试剂公司 , 020818);角叉菜胶(福建食品有限公司 , 批号
20030910);伊文思蓝(中国医药上海化学试剂公司 , 批号:
F20030714);巴豆油(由本药理教研室自行提取配制)。
1.3 仪器 DU-640紫外可见光光度计(美国 Beckman
公司);电热恒温水浴箱(北京长安科学仪器厂);电子分析
天平(BPl90SStartorius公司);微量移液器(ThermoLab-
systemsFinnPipete)。
1.4 动物 昆明种小鼠:20 ±2g;Wistar大鼠:250±30g,
由广西医科大学实验动物中心提供。
2 方法与结果
2.1 对小鼠耳廓肿胀的影响 [ 3]
取正常健康小鼠 50只 , 雄性 , 按体重随机分为 CYT
高 、中 、低剂量组 、阳性对照组和空白对照组 , 共 5组 , 每组
10只。 ig给药 ,连续 5d,其中空白对照组给予生理盐水 , 阳
性对照组给予 10mg/kg地塞米松 , CYT高 、中 、低剂量组分
别依次给予 3.0g/kg、 1.5g/kg、0.75g/kg剂量的 CYT提取
液 , 给药容量均为 0.2ml/10g体重。末次给药后 1h, 在每
鼠右耳涂 2%巴豆油 0.05ml致炎 , 4h后 ,处死动物 , 剪下两
耳 , 用直径 8mm的打孔器在两耳相同部位打下圆形耳片 ,
称重 , 计算肿胀度(左右耳片重量差值)和抑制率。抑制率
=[ 1-用药组肿胀度均值 /空白对照组肿胀度均值 ] ×
100%
结果表明 , 与空白对照组比较 , 阳性对照组 、CYT高 、
中 、低三个剂量组动物的耳廓肿胀度存在显著性差异(p<
0.01);CYT对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作
用。见表 1。
表 1 CYT对小鼠巴豆油所致耳廓肿胀的影响(x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg)
耳廓肿胀度
(mg)
抑制率
(%)
空白对照组 — 17.56 ±4.54 —
阳性对照组 0.01 8.32±3.45＊＊ 52.62
CYT 3.0 6.24±2.85＊＊ 64.46
1.5 8.38±3.15＊＊ 52.27
0.75 11.12 ±3.42＊＊ 36.67
注:与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05(下同)
2.2 对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响 [ 4]
取正常健康小鼠 50只 , 动物分组及给药(同 2.1), 连
续 5d。末次给药后 1h, 在每鼠右侧足趾皮下注射 1%角叉
菜胶 0.05ml, 4h后沿踝关节剪下左右两足 ,称重 , 计算肿胀
度(左右足重量差值)和抑制率。
抑制率 =[ 1-用药组肿胀度均值 /空白对照组肿胀度
·46·
第 28卷 第 6期
2006年 11月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No.6 Vol.28
MAY 2006
DOI :10.16588/j.cnki.issn1002-1108.2006.06.030
均值 ] ×100%
结果(表 2)表明 ,与空白对照组比较 , 阳性对照组的左
右足跖重量差值有极其显著性的差异(p<0.01), 高 、中 、
低剂量 CYT组的左右足跖重量差值也有极显著的差异(p
<0.01),由此可知 CYT对角菜胶所致小鼠足跖肿胀有较
强的抑制作用。
表 2 CYT对角叉莱胶致小鼠足跖肿胀的影响(x±s, n=10)
组别 剂量 g/kg 足跖肿胀度(mg) 抑制率(%)
空白对照组 — 145.8±25.78 —
阳性对照组 0.01 48.1±9.83＊＊ 67.0
CYT 3.0 50.8±10.20＊＊ 65.15
1.5 61.12±15.26＊＊ 58.08
0.75 82.0±11.36＊＊ 43.76
2.3 对人鼠棉球肉芽肿的影响 [ 5 , 6]
取正常健康雄性大鼠 50只 ,动物分组(同 2.1)。在乙
醚吸入浅麻醉无菌条件下 , 作鼠蹊部切口 , 将已称重灭菌
的棉球(20mg/个)植于切口皮下。术后外涂青霉素溶液防
止抗感染。各组大鼠于手术当天给药(同上), 连续 7d, 于
第 8天处死 , 取棉球肉芽组织 , 在 90℃恒温器中烘 1h, 称
重 , 计算肉芽重量并计算抑制率。肉芽重量 =带肉芽组织
的棉球重量一棉球原始重量:抑制率 =[ 1-用药组平均肿
胀度 /空白对照组平均肿胀度 ] ×100%
实验结果显示 , 阳性对照组 、CYT高剂量和中剂量组
的肉芽组织重量明显轻于空白对照组(p<0.01), 且 CYT
大剂量组作用与地塞米松组相当 , CYT低剂量组与空白对
照组肉芽组织重量差异显著 , 有显著的统计学意义(p<
0.05)。说明 CYT对实验性肉芽组织的增生有较强抑制作
用。见表 3。
表 3 CYT对大鼠棉球肉芽肿的影响(x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 肉芽组织重(mg) 抑制率(%)
空白对照组 — 22.89±2.64 —
阳性对照组 0.01 8.56±1.67＊＊ 62.6
CYT 3.0 10.30±3.10＊＊ 55.0
1.5 12.50±2.48＊＊ 45.4
0.75 18.78±4.47＊ 17.9
2.4 对大鼠胸腔白细胞游走的影响 [ 7]
取正常健康大鼠 50只 , 动物分组及给药(同 2.1), 连
续 5d。末次给药后 1h, 于大鼠右侧胸腔(尽量靠胸腔右后
角以免伤肺)注入灭菌 1%角叉菜胶生理盐水溶液 0.2ml/
100g, 5h后脱颈椎处死大鼠 , 在横膈周边部剖开胸腔(避免
血液渗入胸腔),用微量加样器取 50μl胸腔渗出液 , 用 1%
冰醋酸水溶液作为稀释液 , 稀释至 2ml,按白细胞计数法在
倒置显微镜下进行观察计数白细胞。结果显示 , 阳性对照
组 、CYT高剂量组和 CYT中剂量组的白细胞数量明显低于
空白对照组 , 且差异极其显著(p<0.01), CYT低剂量组也
显著低于空白对照组(p<0, 05),可见 CYT能显著减少角
叉菜胶所致急性炎症大鼠胸腔白细胞的数量 , 具有较好的
抑制白细胞趋化和游走的作用。见表 4。
表 4 CYT对大鼠胸腔白细胞游走的影响(x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 白细胞(109 /L) 抑制率(%)
空白对照组 — 40.93±5.03 —
阳性对照组 0.015 11.72±2.17＊＊ 71.4
CYT 3.0 21.21±3.48＊＊ 48.2
1.5 30.90±4.42＊＊ 24.5
0.75 34.85±7.53＊ 14.9
2.5 对角叉菜胶致胸膜炎大鼠胸腔渗出液中蛋白含量 、
PGE2及 N0的影响 [ 8]
将 2.4取得的胸腔渗出液离心后 , 取 0.5ml上清液对
蛋白进行定量测定(按总蛋白药盒说明书方法);另取
0.15ml上清液 ,加 0.5moI/LKOH-甲醇溶液 lml, 50℃下异
构化 20分钟 ,用甲(醇)稀释至 4ml, 于紫外分光光度计(λ
=278nm)测定 0D值 , 代表 PGE2 ,的生成量:另取 200μ1上
清液对 N0进行定量测定(按一氧化氮试剂盒说明书方
法)。结果表明 , CYT能明显降低角叉菜胶致胸膜炎大鼠
胸腔渗出液中蛋白质含量 , 减少大鼠胸膜炎渗出液中 N0
的产生和 PGE2的生成。见表 5。
·47· 第 6期 李 丽 ,李勇文 , 等.蝉翼藤的药效学研究
表 5 对角叉菜胶致胸膜炎大鼠胸腔渗出液中蛋白含量 、N0及 PGE2的影响(x+s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 蛋白质含量(g/L) NO(umol/L) PGE2(OD值)
空白对照组 — 21.03±4.61 23.23±5.74 0.794±0.236
阳性对照组 0.01 9.82±2.68＊＊ 9.92±3.18＊＊ 0.291±0.103＊＊
CYT 3.0 13.71±3.53＊＊ 13.21±2.63＊＊ 0.172±0.079＊＊
1.5 16.90±2.49＊ 15.90±2.19＊＊ 0.356±0.106＊＊
0.75 18.45±4.19 18.95±4.70 0.482±0.167＊＊
2.6 对小鼠炎性组织中 PGE
2
含量的影响 [ 9 , 10]
取正常健康雄性小鼠 50 只 , 动物分组及给药(同
2.1),连续给药 5d, 第 6d给药 0.5h后 ,与于右后足跖皮下
注射 1%角叉菜胶 0.1ml致炎 , 4h后处死小鼠 , 在踝关节上
0.5cm处剪下炎性肿胀足 , 称重 , 生理盐水 5ml浸泡 1h, 取
出 , 离心浸泡液 , 吸取上清液 0.1ml, 加 0.5mol/LKOH-甲
醇溶液 2ml,在 50℃下异构化 20分钟 ,用甲醇稀释至 20ml,
置紫外 -可见分光光度计(λ=278nm)测定 OD值 , 以每 g
炎性组织相当的 OD值表示 PGE2的含量。地塞米松组和
CYT高 、中剂量组与空白对照组比较 , PGE2含量(OD值)
均降低 , 差异显著(p<0.01),且 CYT高剂量组的作用与地
塞米松组的作用相当:CYT低剂量组的 PGE2含量也低于
空白对照组 , 差别只有统计学意义(p<0.05)。见表 6。
表 6 CYT对小鼠炎性组织中
PGE:含量的影响(x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) PGE2 含量 OD值(＊102)
空白对照组 — 4.43±0.68
阳性对照组 0.01 1.31±0.29＊＊
CYT 3.0 1.42±0.36＊＊
1.5 2.28±0.52＊＊
0.75 3.65±0.85＊
3 讨论
以上结果表明 , 对多种致炎剂引起的组织水肿和炎症
渗出增加 , 急性毛细血管通透性增高以及慢性炎症均有明
显的抑制作用 , 对炎症后期的肉芽组织增生也有显著的抑
制作用;花生四烯酸的代谢物 PGE是炎症反应的重要介
质 , 蝉翼藤降低炎症组织及胸膜炎大鼠胸腔渗出液中 PGE2
的含量 , 表明其可能抑制 PGE2的产生 、释放或代谢。在急
慢性炎症中 , 体内白细胞向炎症部位游走 , 在炎症的发展
过程中起重要作用 , 蝉翼藤可以减少角叉菜胶所致胸腔渗
出液中白细胞数量 , 表明其能明显抑制白细胞游走;PG对
白细胞有较高的趋化性 , 蝉翼藤抑制 PG合成或释放 , 在抑
制白细胞游走方面可能起一定的作用。研究表明 , CYT能
明显降低角叉菜胶致胸膜炎大鼠胸腔渗出液中蛋白质含
量 , 减少大鼠胸膜炎渗出液中的产生。综上所述 , 蝉翼藤
抗炎机理与其降低毛细血管通透性 ,抑制 PGE2及 NO的合
成或释放 , 直接对抗炎症介质的作用及减少蛋白质渗出 、
抑制白细胞的游走等有关。
参考文献
[ 1] 中国科学院昆明植物所 ,编 .云南植物志 [ M] .北京:科学
出版社 , 1983:261.
[ 2] 谢宗万 ,等 .全国中草药名鉴(上册)[ M] .北京:人民卫生
出版社 , 1996:229.
[ 3] 徐叔云 ,卞如濂 ,陈修 ,主编 .药理实验方法学 [ M] .北京:
人民卫生出版社 , 1992:719.
[ 4] 曾南 , 沈映君 , 刘旭光 ,等 .荆芥挥发油抗炎作用研究 [ J] .
中药药理与临床 , 1998, 9(2):99-100.
[ 5] 李仪奎 .中药药理实验方法学 [ M].上海:上海科学技术出
版社 , 1991.299-310.
[ 6] 连其深 ,张志祖 ,胡晓 ,等 .花椒毒酚抗炎作用的实验研究
[ J] .中草药 , 1998, 29(2):102-103.
[ 7] 李东晓 ,陈东辉 ,罗霞 ,等 .鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎模型
[ J] .中药药理与临床 , 2000, 16(5):46-47.
[ 8] 陈奇 ,主编 .中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出
版社 , 11993:362-366.
[ 9] 谢文 ,马克昌 ,谢艳司 , 等, 不同品种血竭外用时的镇痛抗炎
作用 [ J] .中医正骨 , 1999, 1l(2):5-6.
[ 10] 陈奇 ,主编 .中药药理研究方法学 [ M].北京:人民卫生出
版社 , 1993:370-371.
·48· 贵阳中医学院学报 第 28卷