全 文 ：第 41卷第 5期
2007年 9月
生　物　质　化　学　工　程
BiomassChemicalEngineering
Vol.41 No.5
Sep.2007
飞龙掌血提取物抑菌作用初步研究
　　收稿日期:2006-11-17
　　作者简介:丁 文(1967-),女 ,湖南张家界人 ,实验师 ,主要从事植物化学与分析化学实验教学与研究工作。
丁 文 , 文赤夫 , 陈建华 , 黄开兴 , 董爱文
(吉首大学 城乡资源与规划学院 , 湖南 张家界 427000)
摘　要:选择蒸馏水 、无水乙醇 、乙酸乙酯 、石油醚 4种提取剂 ,采用冷浸 、加热回流两种方法萃取飞龙掌血 , 比较提取物
对枯草杆菌 、痢疾杆菌 、啤酒酵母菌的抑菌效果。结果表明 ,冷浸 72h和加热回流 5h的飞龙掌血提取物对该 3种菌的
抑菌作用无显著差异 , 无水乙醇 、乙酸乙酯提取物较水提物有显著差异;生药质量浓度为 0.25g/mL的乙醇提取物对 3
种菌都有极显著的抑菌效果 , 适宜抑菌生药质量浓度为 0.5g/mL;pH值对该提取物的抑菌效果影响较大 , 3个菌种适宜
抑菌的 pH值不同。
关键词:飞龙掌血;提取物;抑菌作用
中图分类号:TQ91;R284.2　　　　　　　文献标识码:A　　　　　　　文章编号:1673-5854(2007)05-0033-03
PrimaryStudyonAntibacterialActivityofExtractsfrom
Toddaliaasiatica(Linn.)Lam
DINGWen, WENChi-fu, CHENJian-hua, HUANGKai-xing, DONGAi-wen
(ColegeofResourcesandProgramingSciencesofJishouUniversity, Zhangjiajie427000, China)
Abstract:ExtractsfromToddaliaasiatica(Linn.)Lamwereobtainedundertheroomtemperatureandhotrefluxingwithwater,
absolutealcohol, ethylacetateandpetroleumether.AntibacterialefectsofextractsfromT.asiaticaonBacilussubtilis, Shigela
dysenteriaeandSaccharomycescerevisiaewerecompared.Theresultsshowed:Therewasnoremarkablydiferentantibacterial
activityofextractsundertheroomtemperaturefor72handhotrefluxingfor5 htothreebacteria(p>0.05).Therewasremarkably
diferentantibacterialactivityofextractsofabsolutealcoholandethylacetateincomparisonwithwaterextract(p<0.05).There
wasthebestremarkableantibacterialeffectofalcoholextractswith0.25g/mLcrudedrug(p<0.01), andthebestantibacterial
concentrationofcrudedrugwas0.5 g/mL, ThepHvaluehadstronginfluenceonantibacterialeffectofextractsfromT.asiatica,
andthesuitablepHvaluesforinhibitionofthethreebacteriaweredifferent.
Keywords:Toddaliaasiatica(Linn.)Lam;extracts;antibacterialactivity
　　飞龙掌血 (Toddaliaasiatica(Linn.)Lam),
别名勒沟 、见血飞 、散血丹 ,为芸香科(Rutaceae)
飞龙掌血属(Toddaliajus)[ 1-2] ,分布于我国秦
岭南坡及其以南各省区 。祖国医学认为其具有
舒筋通络 、活血散瘀 、消肿止痛的作用 , 常用于
治疗风湿痹痛 、胃痛 、痛经 、跌打损伤 [ 3] 。现代
医学研究表明 , 其具有镇痛抗炎 [ 4] 、抗心肌缺
血 [ 5-6] 、治疗家畜胃肠炎 [ 7] 等作用 ,但对其抑菌
作用的研究尚未见研究报道 。目前 ,中药有效
成分的提取方法有经典的溶剂提取法 , 本文作
者以蒸馏水 、无水乙醇 、乙酸乙酯 、石油醚等作
提取溶剂 ,采用冷浸或加热回流等方式 [ 8] ,对飞
龙掌血的提取工艺及提取物的抑菌作用进行了
相关研究 ,旨在为该植物的进一步开发利用提
供科学依据 。
1　材料 、仪器与试剂
1.1　材料
飞龙掌血:2005年 3月采于湖南省永定区后
坪镇 ,经本院廖博儒副教授鉴定 。洗净 、凉干 、粉
碎 ,过 24目筛 ,冷藏备用。实验菌种:供试菌种枯
草杆菌 (Bacilussubtilis)、痢疾杆菌 (Shigela
dysenteriae)、啤酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae),
(枯草杆菌为常见环境卫生细菌 ,属革兰氏阳性
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细菌;痢疾杆菌属革兰氏阳性细菌 ,为常见肠道病
原菌;啤酒酵母菌为常见真菌 ,这 3种菌种与人
类 、环境都有密切的联系。)购自湖南省疾病预防
控制中心 ,湖南省林产化工工程重点实验室冷冻
保藏[ 9] 。培养基:牛肉膏蛋白胨培养基 、马铃薯
培养基 。
1.2　仪器
RE540-AW旋转蒸发仪 (日本 , Yamato)、
DP-32真空干燥箱(日本 , Yamato)、IL-62培养箱
(日本 , Yamato)、HM-60V酸度计 (上海)、EB-
340HW电子天平(日本 ,岛津)、PCV-130BN超净
操作台(日本 , Hitachi)。
1.3　试剂
无水乙醇 、乙酸乙酯 、石油醚 (沸程 60 ～
90℃)均为国产分析纯。
2　方 法
2.1　飞龙掌血提取物的制备
2.1.1　冷浸法　称取飞龙掌血 100g4份 ,分别
加入蒸馏水 、无水乙醇 、乙酸乙酯 、石油醚各
600mL置于避光处(20 ～ 25℃)浸提 72h,过滤 ,
将所得提取 液用旋转蒸发仪 浓缩 (55℃,
80r/min)得到的提取物浸膏即为生药 。
2.1.2　热水回流法　同 2.1.1节操作 ,冷浸提取
72h改为热水回流提取 5h。
2.2　飞龙掌血抑菌实验
2.2.1　滤纸片扩散法测定飞龙掌血提取物的抑
菌作用　参照文献 [ 10]操作 ,以相对应的溶剂为
对照 ,平行 3份 , 37℃, 12h后测抑菌圈直径 。
2.2.2　生药浓度对抑菌作用的影响　将 2.1.1节
得到的飞龙掌血无水乙醇浸膏用无水乙醇溶解 ,定
容至 25mL。得到 100g飞龙掌血的无水乙醇提取物
的母液 ,记为 4.00g/mL。吸取一定量母液配制成质
量浓度分别为 0.00、 0.25、 0.50、 1.00、 2.00和
4.00g/mL的飞龙掌血无水乙醇提取液 ,同 2.2.1节
操作 ,测量抑菌圈直径大小 ,比较抑菌效果。
2.2.3　介质的 pH值对飞龙掌血提取物抑菌效
果的影响　根据 2.2.2节的结果选用提取物生药
质量浓度为 0.5g/mL的飞龙掌血无水乙醇提取
物进行实验 ,调节 pH值为 6、 7、 8、 9,同 2.2.1节
操作 ,测定抑菌效果。
3　结果与讨论
3.1　不同提取剂和提取方法提取物的抑菌效果
以相对应的溶剂为对照 ,以抑菌圈直径大小
表示抑菌效果(重复 4次 ,取平均值)。不同提取
剂 、不同提取方法的飞龙掌血提取物(生药质量
浓度为 1.00g/mL)的抑菌效果见表 1。
表 1　不同提取剂 、不同提取方法的飞龙掌血提取物的抑菌效果 1)
Table1　Antibacterialefectofextractswithdiferentextractionagentsandmethods
菌种
strains
提取方法
methods
不同提取剂抑菌圈直径 diameterofinhibitionzonewithdiferentextraction/mm
水
water
石油醚
petroleumether
无水乙醇
alcohol
乙酸乙酯
ethylacetate
枯草杆菌
B.subitilis
对照 control 11.13±0.04 11.25±0.19 12.49±0.25 12.70±0.27
冷浸 soaking 13.93±0.49＊ 14.20±0.50＊ 15.15±0.36＊a 15.97±0.19＊＊a
加热回流 hotrefluxing 13.87±0.19＊ 14.97±0.34＊ 16.60±1.27＊a 17.20±1.19＊a
痢疾杆菌
S.dysenteriae
冷浸 soaking 13.70±0.55＊ 14.83±0.68＊ 20.30±2.15＊＊b 20.40±0.66＊＊b
加热回流 hotrefluxing 14.63±0.62＊ 16.37±0.60＊ 19.93±1.19＊a 20.10±0.49＊＊b
啤酒酵母菌
S.cerevisiae
冷浸 soaking 11.70±0.23＊ 17.77±1.32＊ 25.83±0.67＊＊b 18.23±1.13＊＊a
加热回流 hotrefluxing 12.17±0.07＊ 17.00±0.46＊ 26.57±1.83＊＊b 19.27±0.20＊＊b
1)＊表示与提取剂比较有显著性差异(p<0.05), ＊＊表示有极显著差异(p<0.01);a表示与水提物比较有显著差异(p<0.05), b表示
有极显著差异(p<0.01)。 ＊meanssignificantdiferencefromotherextractionagents, ＊＊meansextremesignificantdiference(p<0.01);
ameanssignificantdifferencefromwaterextract(p<0.05), bmeanstheextremesignificantdiference(p<0.01).
　　冷浸 72h与热水回流 5h之间没有显著性差
异 ,提示若以抑菌效果为考察指标 ,可选择冷浸或
加热回流的提取方式 ,但采用加热回流法节省时
间 。石油醚 、水的提取物的抑菌效果显著;无水乙
醇 、乙酸乙酯 ,提取物抑菌效果显著或极显著 ,且
与水提物比较有显著差异 ,无水乙醇与乙酸乙酯
提取物之间没有显著区别 ,考虑到乙醇成本低及
回收容易 ,本研究选择无水乙醇作为提取剂 ,方法
选用加热回流提取 5h。
3.2　无水乙醇提取物最佳生药质量浓度的抑菌
效果
无水乙醇提取物生药质量浓度(g/mL)的抑
第 5期 丁 文 ,等:飞龙掌血提取物抑菌作用初步研究 35　
菌效果(重复 4次 ,取平均值)见表 2。
表 2　不同生药质量浓度的飞龙掌血无水乙醇提取物的抑菌效果
Table2　AntibacterialefectofalcoholextractsfromT.asiaticawithdiferentconcentrationofcrudedrug
菌种
strains
不同生药质量浓度抑菌圈直径 diameterofinhibitionzonewithdiferentcocn.ofcrudedrug/mm
对照 control 0.25g/mL 0.5g/mL 1g/mL 2g/mL 4g/mL
枯草杆菌 B.subitilis 11.43±0.10 13.70±0.23 15.25±0.06 15.83±0.10 15.88±0.21 16.83±0.27
痢疾杆菌 S.dysenteriae 11.98±0.20 14.70±0.31 18.15±0.21 19.63±0.64 20.23±0.59 21.43±0.09
啤酒酵母菌 S.cerevisiae 12.73±0.14 17.20±0.16 23.55±0.86 25.08±0.94 24.53±0.37 24.33±0.68
　　随飞龙掌血的无水乙醇提取物生药质量浓度
的增加 ,其对 3种菌的抑菌效果增强 ,当质量浓度
为 0.25g/mL时与无水乙醇对照组相比对痢疾杆
菌 、啤酒酵母菌 、枯草杆菌的抑菌效果差异极显
著 ,当质量浓度为 0.5g/mL时的抑菌效果趋于平
衡(与 0.25g/mL时比较 ,差异显著),再增加浓
度 ,其抑菌效果增加不显著 ,因此 , 0.5g/mL为较
好的生药质量浓度。
3.3　pH值对抑菌效果的影响
pH值对无水乙醇提取物抑菌效果有影响 ,且
对不同菌种的影响效果不同(重复 4次 ,取平均
值),见表 3。
表 3　不同 pH值的飞龙掌血无水乙醇提取物的抑菌效果 1)
Table3　EffectofdiferentpHvaluesonantibacterialactivityofalcoholextractsfromT.asiatica
菌种
strains
不同pH值下的抑菌圈直径 diameterofinhibitionzoneunderdiferentpHvalues/mm
pH值 6pHvalue6 pH值 7pHvalue7 pH值 8pHvalue8 pH值 9pHvalue9
枯草杆菌 B.subitilis 15.80±0.35a 15.27±0.09a 15.17±0.35a 16.90±0.25b
痢疾杆菌 S.dysenteriae 17.73±0.24b 12.77±0.23a 13.93±0.32a 16.03±0.44b
啤酒酵母菌 S.cerevisiae 26.40±0.44b 16.27±0.09a 16.37±0.09a 15.23±0.09a
1)同一行上标相同表示相互间比较无显著差异(p>0.05),上标不同表示相互间比较有显著差异(p<0.05)。 thesamesuperscriptmeans
nosignificantdiference(p>0.05), thediferentsuperscriptmeanssignificantdifference(p<0.05).
　　对痢疾杆菌:飞龙掌血无水乙醇提取物在 pH
值为 6时的抑菌效果比 7和 8要好 ,差异显著 ,
pH值为 9比 7和 8的效果要好 ,差异显著 ,但 pH
值为 6与 9之间差异不显著 ,提示在微酸微碱性
条件下对痢疾杆菌抑菌效果较好 ,在中性条件下
的抑菌效果较弱;对枯草杆菌:pH值为 9时与 pH
值 6、 7、 8比较有显著差异 ,其它没有显著性 ,提
示在微碱性条件对枯草杆菌的抑菌作用比中性 、
微酸性条件下强;对啤酒酵母菌:随着 pH值的增
大而抑菌效果有减小趋势 ,其中 pH值为 6的效
果较好 ,与 pH值为 7、 8、 9比较差异极显著 , pH
值在 7、 8、 9之间没有显著性区别 。
4　结 论
4.1　以飞龙掌血提取物的抑菌效果为考察指标 ,
加热回流的方法节约时间 ,加热 5 h的效果与冷
浸 72h的效果相当 ,且用无水乙醇作提取溶剂成
本低易回收 ,且提取物抑菌效果显著 。
4.2　通过对不同质量浓度下的飞龙掌血乙醇提
取物进行抑菌实验发现 , 在生药质量浓度
0.5g/mL下抑菌作用较强 ,再增大浓度其抑菌效
果增加不显著 ,因此 ,选用 0.5g/mL较好 。pH值
的变化对抑菌效果有较大的影响 。
4.3　飞龙掌血中存在不同极性的抑菌物质 ,但以
中强极性物质(无水乙醇 、乙酸乙酯提取物)为
主 ,这对飞龙掌血的药理研究有一定参考价值 ,也
可考虑作为天然植物抑菌剂源来开发 。
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