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棒柄花苷A对照品的制备研究



全 文 :收稿日期:2014-04-30
修回日期:2014-05-11
作者简介:黄 艳(1987-),助理研究员,硕士,主要从事中药、天
然药化学成分与质量标准研究。
*广西科技攻关重大专项(桂科重12118005-2-2)资助。
**通讯作者:刘布鸣(1956-),男,研究员,主要从事中药、天然
药化学成分与质量标准研究。E-mail:liubuming@alyun.com.
cn。
网络优先数字出版时间:2014-5-4
网络优先数字出版地址:http://www.cnki.net/kcms/doi/10.13656/j.cnki.gxkx.20140504.017.html
广西科学Guangxi Sciences 2014,21(3):264~266
棒柄花苷A对照品的制备研究*
Preperation of Reference Substance of PPGA fromClei-
dion brevipetiolatum
黄 艳1,2,刘 元1,2,陈小刚1,2,宋志钊1,2,林 霄1,2,刘布鸣1,2**
HUANG Yan1,2,LIU Yuan1,2,CHEN Xiao-gang1,2,SONG Zhi-zhao1,2,LIN Xiao1,2,
LIU Bu-ming1,2
(1.广西中药质量标准研究重点实验室,广西南宁 530022;2.广西中医药研究院,广西南宁 
530022)
(1.Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Standards,Nanning,
Guangxi,530022,China;2.Guangxi Institute of Tradtional Medical and Pharmaceutical Sci-
ences,Nanning,Guangxi,530022,China)
摘要:【目的】建立从棒柄花(Cleidion brevipetiolatumPaxet Hoffm)中制备棒柄花苷 A(PPGA)对照品的方法。
【方法】利用硅胶柱层析、重结晶和反相制备高效液相色谱对棒柄花的乙醇提取物进行分离纯化,以 HPLC对棒
柄花苷A进行纯度检查和含量测定,并通过UV,IR,MS,1 HNMR等对其进行结构确证。【结果】从棒柄花叶中
分离、纯化出棒柄花苷A对照品,质量分数W >98.0%。【结论】所建立的制备方法简单,制备出的棒柄花苷 A
对照品符合中药化学对照品的相关要求,可作为棒柄花药材和含棒柄花成药质量控制,以及中药药效物质基础
用的化学对照品。
关键词:棒柄花 棒柄花苷A 对照品 制备
中图分类号:R284.2  文献标识码:A  文章编号:1005-9164(2014)03-0264-03
Abstract:【Objective】A seperation method was established to prepare reference substance of PP-
GA from leave of Cleidion brevipetiolatumPaxet Hoffm.【Methods】Ethanol-extract of the leave
of Cleidion brevipetiolatum Paxet Hoffm was isolated and purified by RP-HPLC combining
with column chromatography and recrystalization.Its structure was identified by UV,IR,MS,1
HNMR.【Results】PPGA was completely seperated from leave of Cleidion brevipetiolatumPaxet
Hoffm.The purity of the reference substance was not less than 98.0%.【Conclusion】The meth-
od is simple and convenient,by which the prepared compound is accorded with the relative
standards of chemical reference substance in Chinese materia medica.It can be used as a refer-
ence subsatance for the quality control and the research of herbal medicine.
Key words:Cleidion brevipetiolatumPaxet Hoffm,PPGA,reference substance,preperation
  【研究意义】安全和有效是评价药物的关键,如何
保证药物的安全有效是中药现代化必须解决的首要
问题。中药化学对照品是药品标准中用于鉴别、检
测、含量测定等标准物质,是确定中药的真伪优劣的
对照,是控制药品质量必不可少的工具。然而,现有
的中药化学对照品品种和数量远远不能满足众多中
药品种的质量控制需求,品质规格有待提高和完善。
可见高纯度的中药化学对照品的制备研究显得尤为
462 Guangxi Sciences,Vol.21No.3,June 2014
重要。棒柄花系以大戟科棒柄花属植物棒柄花
(Cleidion brevipetiolatum Paxet Hoffm.)叶,别名
大树三台,分布于广东、广西、贵州、云南,有消炎解
表、利湿解毒、通便的功能,常用于治疗感冒、急慢性
肝炎、疟疾、膀胱炎[1~2]。棒柄花苷 A(PPGA)是棒
柄花的主要有效成分,可作为棒柄花药材及其制剂的
主要质量控制指标性成分,因此对其制备进行研究具
有重要意义。【前人研究进展】棒柄花药材收载于广
西壮族自治区壮药质量标准第一卷[3],棒柄花的化学
成分已有很多文献报道[4~9]。目前,对于棒柄花苷A
的研究多是分离、含量测定等方面的研究。【本研究
切入点】目前未见有报道棒柄花苷A对照品的研究,
且棒柄花药材和含棒柄花的复方药物均缺乏有效的
特征成分定量的质量控制手段。【拟解决的关键问
题】通过对棒柄花苷A对照品的制备进行研究,可为
作为棒柄花药材和含棒柄花成药的质量控制研究提
供化学对照品来源。
1 材料与方法
1.1 材料
  日本岛津UV-2550型紫外光谱仪;德国Bruker
TENSOR 27FT IR红外光谱仪;UC3250制备型高
效液相(威玛龙色谱科技仪器有限公司);德国
BRUKER AVANCE 600 核磁共振波谱仪;美国
Thermo fisher LTQ Orbitrap Velos质谱仪;美国
Waters 1525、Waters 2998检测器液相色谱仪。200
~300目柱层析硅胶(青岛海洋化工公司),氘代甲
醇,内标 TMS;甲醇、乙腈为色谱纯;水为重蒸馏水;
其它溶媒为分析纯。棒柄花药材经广西中医药研究
院赖茂祥研究员鉴定为大戟科棒柄花属植物棒柄花
(Cleidion brevipetiolatumPaxet Hoffm.)。
1.2 方法
1.2.1 粗品的提取分离
  取大戟科植物棒柄花的叶子5kg,粉碎成100目
以下,体积分数50%的乙醇提取3次,滤过,合并滤
液,回收乙醇,得乙醇提取物,经硅胶柱层析,用氯仿-
甲醇体积比(100∶0~95∶5)梯度洗脱,收集氯仿-甲
醇体积比(95∶5)洗脱部分,用TCL检测,收集含有
棒柄花苷A的流分,合并,浓缩,得到棒柄花苷 A粗
结晶。
1.2.2 对照品的制备
  将粗结晶用制备型 RP-HPLC进行制备(色谱
柱—C-18柱;流动相(体积比)—乙腈∶水=22∶78;
检测波长-255nm;流速-5mL/min),收集棒柄花
苷A组分,并对所收集的每一份洗脱液利用 HPLC
检测(色谱柱-C-18柱;流动相(体积比)—乙腈∶体
积分数0.2%磷酸溶液=28∶72;检测波长-255
nm;流速-1mL/min)合并保留时间相同而且纯度
在98%以上的棒柄花苷A,减压浓缩,得到纯度大于
98%以上的棒柄花苷A白色粉末。
2 结果与分析
2.1 对照品的结构确证
  制备得到的对照品为白色粉末,溶于甲醇、乙醇、
丙酮,mp 190~192℃。UV(EtOH)λmax:255nm。
IR(KBr)$max:3397cm-1,1607cm-1,1510cm-1,
1235cm-1。MS(EI)m/z:296。1 HNMR(DMSO-
d6,600MHz,TMS)δppm:7.28(2H,J=8.4Hz,H
-2,H-6),6.94(2H,d,J=8.4Hz,H-3,H-5),
6.35(1H,d,J=16.0Hz,H-7),6.14(1H,dq,J
=16.0,6.6Hz,H-8),5.32(1H,d,J=4.8Hz,H
-1′),3.69~3.14(5H,m,H-2′-6′),1.81(3H,
dd,J =6.6,1.2,H-9)。13 C NMR(DMSO-d6,
150MHz,TMS)δppm:131.2(C-1),126.8(C-2,
C-6),116.2(C-3,C-5),156.5(C-4),130.3(C
-7),123.6(C-8),18.3(C-9),100.5(C-1′),73.
3(C-2′),77.1(C-3′),69.8(C-4′),76.7(C-5′),
60.8(C-6′)。以上数据与棒柄花苷A的文献[7]报
道一致,因此确证该化合物为棒柄花苷A。结构见图
1。
图1 棒柄花苷A的结构式
Fig.1 The Structure of PPGA
2.2 对照品的纯度检查
2.2.1 薄层色谱法检查
  取制备得到的对照品棒柄花苷 A适量,用甲醇
制1mg/mL的溶液,在同一硅胶G板上,按不同的
点样量梯度点样,点样量分别为20μg,40μg,60μg,
80μg,100μg。用3个不同系统的展开剂:系统(1)醋
酸乙酯-乙醇(体积比9∶1);系统(2)石油醚 -乙酸乙
酯-甲醇(体积比3∶6∶1);系统(3)氯仿-甲醇(体积
比8∶2);置展开缸分别展开,展距:15cm。定位:喷
以质量分数10%乙醇磷钼酸溶液,晾干,在105℃烘
至斑点显色清晰,置白光下检视;结果在薄层色谱中,
可见单一的荧光斑点(图2),3种展开剂系统,5个不
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同浓度的梯度点样,均为单一斑点,未见杂质斑点。
图2 棒柄花苷A薄层色谱
Fig.2 The thin-layer chromatography of PPGA
(a)系统1,(b)系统2,(c)系统3
(a)System one,(b)System two,(c)System three
2.2.2 高效液相色谱法纯度检查
  精密称取于105℃干燥至恒重的对照品适量,加
流动相制成每1mL含1mg的溶液,色谱条件:Eco-
sil ODS-3C18色谱柱(250mm×4.6mm,10μm),
流动相为乙腈∶体积分数0.2%磷酸溶液(28∶72);
检测波长为255nm;进样量为10μL;流速为1mL/
min,柱温为室温。在该色谱条件下,对照品棒柄花
苷A的 HPLC图见图3,用二级管阵列检测器DAD
进行峰纯度检查为为单一纯物质峰,5点紫外光谱图
完全重合(图4),用面积归一化法计算棒柄花苷A含
量为99.03%。改变流动相和波长,甲醇∶体积分数
0.2%磷酸溶液(48∶52),255nm为检测波长和乙腈
-体积分数0.2%磷酸溶液(28∶72),210nm为检
测波长分别检测,结果对照品为一个主峰,改变流动
相分析未见有异常峰。
图3 棒柄花苷A的 HPLC
Fig.3 The HPLC of PPGA
图4 棒柄花苷A 5点紫外光谱
Fig.4 The five points of PPGA in UV
3 结论
  棒柄花苷 A为棒柄花的特征和有效成分,适合
作为中药化学对照品。本实验提取、分离、纯化得到
的棒柄花苷A,符合中药化学对照品的相关要求,可
作为棒柄花药材和含棒柄花成药质量控制,以及中药
药效物质基础研究用的化学对照品。
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(责任编辑:尹 闯)  
662 Guangxi Sciences,Vol.21No.3,June 2014