全 文 ：黑面神不同极性部位ＨＰＬＣ色谱与抗慢性皮炎－湿疹
疗效的关联性研究
彭伟文，戴卫波，梅全喜，王英晶，王珠强，吴　飞
（广州中医药大学附属中山医院，广东 中山５２８４０１）
摘　要：目的：研究黑面神不同极性部位高效液相色谱与其抗慢性皮炎－湿疹疗效的关联性，为探索黑
面神的有效物质基础提供参考依据。方法：采用高效液相色谱法对黑面神不同极性部位进行分离，采用
梯度洗脱程序，流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为３０℃，进样量为２０μＬ。建立慢性皮炎－湿疹小鼠模型，观
察黑面神不同极性部位对小鼠耳肿胀的改善作用。结果：黑面神乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位
所含成分的种类和数量显著多于氯仿部位和剩余水层部位，且这两个部位抗慢性皮炎－湿疹疗效亦优
于氯仿部位及剩余水层部位，差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５或０．０１）。结论：黑面神抗慢性皮炎－
湿疹作用的效应物质主要来源于其乙酸乙酯和正丁醇萃取部位，其高效液相色谱及相关峰数据可用于
衡量黑面神的抗慢性皮炎－湿疹疗效。
关键词：黑面神；不同极性部位；ＨＰＬＣ；慢性皮炎－湿疹
中图分类号：Ｒ２８４；Ｒ２８５．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）１４－００４１－０５
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６１４０１６
收稿日期：２０１６－０３－０４
基金项目：中山市科技计划项目（２０１５Ｂ１０４８）
作者简介：彭伟文（１９６２－），男，广州中医药大学附属中山医院主任中药师，硕士生导师，研究方向为中药制剂开发。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｐｗｗ２００６８８＠２１ｃｎ．ｃｏｍ
Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＨＰＬＣ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ－ｅｃｚｅｍａ
ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐｏｌａｒ　Ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．
Ｐｅｎｇ　Ｗｅｉｗｅｎ，Ｄａｉ　Ｗｅｉｂｏ，Ｍｅｉ　Ｑｕａｎｘｉ，Ｗａｎｇ　Ｙｉｎｇｊｉｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｚｈｕｑｉａｎｇ，Ｗｕ　Ｆｅｉ
（Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　５２８４０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＨＰＬＣ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ－ｅｃｚｅｍａ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ
ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｂａｓｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ－ｅｃｚｅｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｕｓｉｎｇ　ＨＰＬＣ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｐｒｏｇｒａｍ，ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　３０℃，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ：２０μＬ．Ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｅａｒ　ｓｗｅｌｉｎｇ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ａｎｄ
ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｎ－ｂｕｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｐａｒｔ　ｗｅｒｅ
ｍｏｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ｐａｒｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ａｒｅａ．Ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｐｏｌａｒ　ｐａｒｔｓ　ｈａｄ　ａ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｅｆｆｅｃｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ　ｅｃｚｅｍａ　ａｒｅ　ｍａｉｎｌｙ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｎ－ｂｕ－
ｔｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｐａｒｔ，ａｎｄ　ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｊｕｄｇｅ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ　ｅｃｚｅｍａ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂｒｅｙｎｉａ　Ｆｒｕｔｉｃｏｓａ；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｐｏｌａｒ　Ｐａｒｔｓ；ＨＰＬＣ；Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ－ｅｃｚｅｍａ
　　黑面神为大戟科植物黑面神Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ（Ｌ．）
Ｈｏｏｋ．ｆ的干燥嫩枝叶，在广东、广西、云南等南方省份均有
分布［１］。其以鬼画符为名收载于云南省标和２０１０版《中国
药典》附录中，而在最早的岭南本草《生草药性备要》中以黑
面神为名收载。黑面神具有清热祛湿、活血解毒的功效，文
献记载其对多种皮肤疾病有治疗作用［２］。本课题组前期对
黑面神的药理作用进行了研究，结果显示其对慢性皮炎湿
疹模型小鼠具有较好的治疗作用［３］。虽然黑面神的化学成
分已有多人研究，但对其慢性皮炎－湿疹的药效成分尚未揭
示。本研究对高效液相色谱（ＨＰＬＣ）中的色谱峰信息与药
效作用进行关联性分析，为合理开发黑面神药材资源奠定
基础［４－５］。
—１４—
１　仪器与材料
１．１　仪器
高效液相色谱仪（Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００型）；恒温水浴锅（金坛
市医疗仪器厂）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公
司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，ＫＱ３２００Ｅ）；
移液枪；游标卡尺；８ｍｍ打孔器。
１．２　药品与试剂
黑面神药材采自中山市金钟水库，经鉴定为大戟科植
物黑面神Ｂｒｅｙｎｉａ　ｆｒｕｔｉｃｏｓａ（Ｌ．）Ｈｏｏｋ．ｆ．嫩枝叶；色谱甲
醇、双蒸水、磷酸、凡士林、十八醇、轻质液状石蜡、甘油；９９９
皮炎平（上海惠众生物科技有限公司）；２，４－二硝基氟苯（２，
４－ＤＮＦＢ）。
１．３　实验动物
ＳＰＦ级昆明小鼠１３０只，雌雄各半，体重（１８±２）ｇ，购
自广州中医药大学医学实验动物中心，生产许可证号：
ＳＣＸＫ（粤）２００８－０００２。部分动物实验在广东省中山市中药
药理实验室动物房完成，实验动物使用许可证号：ＳＹＸＫ
（粤）２０１０－０１０９。
２　方法与结果
２．１　水提物ＨＰＬＣ图谱研究
２．１．１　供试品溶液制备　将黑面神嫩枝叶剪碎打成粗
粉，称取２．０ｇ，加２５ｍＬ蒸馏水煎煮１．５ｈ，煎煮２次，过滤，
旋蒸浓缩至浓度为８０ｍｇ／ｍＬ，微孔滤膜过滤，保存备用。
２．１．２　检测波长确定　取黑面神水提物于２００～８００ｎｍ
范围内进行全波长扫描，结果显示，黑面神水提物在２８０ｎｍ
处出峰数量最多，且峰形较好，故选取２８０ｎｍ作为检测波
长。见图１、图２。
２．１．３　 色谱条件 　 色谱柱为 Ｂｏｓｔｏｎ　Ｇｒｅｅｎ　ＯＤＳ　Ｃ１８
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－０．１％磷酸溶液，梯
度洗脱，０～９０ｍｉｎ，甲醇５％～９５％，流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，
柱温为３０℃，进样量为２μＬ。见图３。
图１　黑面神水提物２００～８００ｎｍ（０～９０ｍｉｎ）紫外吸收
图２　黑面神水提物２００～４５０ｎｍ（０～９０ｍｉｎ）紫外吸收
图３　黑面神枝叶水提物２２０～３８０ｎｍ（０～５０ｍｉｎ）ＨＰＬＣ色谱
２．２　各极性部位ＨＰＬＣ色谱比较
２．２．１　供试品制备　将黑面神枝叶剪碎成粗粉，以药材
粗粉、蒸馏水１∶１０的比例回流提取３次，每次１．０ｈ，过滤，
合并滤液，旋蒸浓缩后，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂
萃取，各萃取５次，至溶剂层透明近无色，回收各溶剂，剩余
水层部分旋转蒸发浓缩。各部位提取物均浓缩至无溶剂味
—２４—
的稠膏，再低温烘成干膏，备用。实验时取各部位干膏加蒸
馏水超声溶解，配成１ｇ／ｍＬ的供试品溶液，用微孔滤膜滤
过，备用。
２．２．２　色谱条件　色谱柱为 Ｂｏｓｔｏｎ　Ｇｒｅｅｎ　ＯＤＳ　Ｃ１８
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－０．１％磷酸溶液，
流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为３０℃，进样量为２０μＬ，梯度
洗脱程序见表１。
黑面神枝叶水提物 ＨＰＬＣ色谱峰最多，大多数色谱峰
能在氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及剩余水层提取物 ＨＰＬＣ色谱
中找到对应，且乙酸乙酯和正丁醇提取物色谱峰最多，氯仿
和剩余水层提取物色谱峰数量相对较少。见图４、图５、图
６、图７、图８。
表１　流动相梯度洗脱程序
时间（ｍｉｎ） 甲醇（％） ０．１％磷酸水溶液（％）
０　 ５　 ９５
１０　 １５　 ８５
４０　 ３５　 ６５
６０　 ５５　 ４５
６５　 ５　 ９５
图４　黑面神水提物ＨＰＬＣ色谱
图５　黑面神氯仿提取物ＨＰＬＣ色谱
图６　黑面神乙酸乙酯提取物ＨＰＬＣ色谱
—３４—
图７　黑面神正丁醇提取物ＨＰＬＣ色谱
图８　黑面神剩余水层部位ＨＰＬＣ色谱
２．３　抗慢性皮炎－湿疹药效研究
２．３．１　供试品制备　将黑面神氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及
剩余水层提取物浸膏，分别按比例加入凡士林、十八醇、轻
质液状石蜡及甘油制成黑面神软膏。
２．３．２　分组与给药　小鼠适应性饲养５天后，按体重随机
分成１３组，每组１０只，分别为模型对照组（不做药物处理），基
质对照组（４０ｇ空白基质／ｋｇ），各极性部位软膏高、低剂量组
（４０ｇ生药／ｋｇ、２０ｇ生药／ｋｇ），皮炎平阳性药组（０．０１５ｇ／ｋｇ）。
各组小鼠右耳正反两面均匀涂抹相应药物０．２ｇ／ｋｇ，每天上下
午各１次，连续给药１２天后，检测相关指标。
２．３．３　慢性皮炎－湿疹小鼠模型制备　于小鼠右耳正
反两面涂布０．２％ＤＮＦＢ－丙酮溶液３０μＬ，左耳正反两面涂布
同等容积的丙酮溶液作为对照，每隔３天涂布１次，共３次。
２．３．４　指标测定　采用游标卡尺测量各组小鼠诱发前以
及第８、１１、１４天时右耳中部厚度，以诱发前为基础值计算
各组小鼠激发前后右耳厚度差值。末次采用ＤＮＦＢ－丙酮
溶液激发后１ｈ，用打孔器打下两片８ｍｍ直径的圆形耳片，
分别称重，根据公式计算肿胀度及肿胀抑制率。
肿胀值（ｍｇ）＝右耳重量－左耳重量；
肿胀抑制率（％）＝
模型组平均肿胀值－给药组平均肿胀值
模型组平均肿胀值 ×１００％
２．３．５　统计学方法　采用ＳＰＳＳ　１９．０软件对所得数据进
行处理，采用均数加减标准差（珔ｘ±ｓ）表示，组间比较采用
单因素方差分析，方差齐性者采用ＬＳＤ检验，方差不齐者
采用Ｄｕｎｎｅｔ－ｔ或ｔ’检验。Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意
义。
结果显示，模型组与基质空白对照组小鼠皮肤状态比
较差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０１），表明由ＤＮＦＢ诱发的
慢性皮炎湿疹小鼠模型造模成功。与模型组比较，皮炎平
阳性组、黑面神水提物高剂量、乙酸乙酯部位高、低剂量
组、正丁醇部位高、低剂量组小鼠耳厚度显著降低，差异具
有统计学意义（Ｐ＜０．０５或０．０１），而黑面神氯仿部位和黑
面神剩余水层部位组小鼠耳厚度无明显变化，表明黑面神
水提物、黑面神乙酸乙酯部位和正丁醇部位制成的软膏均
可明显抑制ＤＮＦＢ诱发的小鼠耳朵慢性炎性肿胀，氯仿部
位和剩余水层部位制成的软膏对ＤＮＦＢ诱发的小鼠耳朵
慢性炎性肿胀无明显抑制作用。在肿胀抑制率方面，皮炎
平组为８９．４１％；黑面神水提物高剂量组为７５．２９％，低剂
量组为４５．８８％；乙酸乙酯部位高剂量组为６０．００％，低剂
量组为４０．００％；黑面神正丁醇高剂量组为６５．８８％，低剂
量为５５．２９％，均显著高于黑面神氯仿部位高低剂量组和
黑面神剩余水层组，与耳厚度研究结果类似。结果见表２
和表３。
—４４—
表２　黑面神各极性部位对慢性皮炎－湿疹模型小鼠耳厚度差的影响 （珚ｘ±ｓ，ｍｍ）
组别 给药前 第８天 第１１天 第１４天
基质对照组 ０．１６２±０．０１１　 ０．０３２±０．０２４　 ０．０３８±０．０１４　 ０．０３６±０．０１９
模型对照组 ０．１６８±０．０１２　 ０．１３９±０．０２＃＃ ０．２１６±０．０３５＃＃ ０．２１５±０．０２８＃＃
皮炎平组 ０．１６８±０．０２０　 ０．０４９±０．０１４＊＊ ０．１３３±０．０５＊＊ ０．１４０±０．０２８＊＊
ＨＭＳ水提高剂量 ０．１６３±０．０１８　 ０．０７７±０．００８＊＊ ０．１４１±０．０３２＊＊ ０．１６２±０．０３５＊＊
ＨＭＳ水提低剂量 ０．１６３±０．０２２　 ０．１３４±０．０１９　 ０．２０６±０．０２２　 ０．２０３±０．０１６
ＨＭＳ氯仿高剂量组 ０．１５９±０．０１８　 ０．１３４±０．０１８　 ０．２０８±０．０３１　 ０．２０２±０．０４２
ＨＭＳ氯仿低剂量组 ０．１６５±０．０２４　 ０．１３８±０．０２５　 ０．２１２±０．０２８　 ０．２０８±０．０３８
ＨＭＳ乙酸乙酯高剂量组 ０．１６７±０．０１７　 ０．０７６±０．０１５＊＊ ０．１３９±０．０２６＊＊ ０．１６２±０．０１４＊＊
ＨＭＳ乙酸乙酯低剂量组 ０．１７２±０．０１３　 ０．０８２±０．０１４＊ ０．１５３±０．０２１＊ ０．１７２±０．０２２＊
ＨＭＳ正丁醇高剂量组 ０．１７５±０．０１２　 ０．０７２±０．０１３＊＊ ０．１３６±０．０２６＊＊ ０．１５９±０．０３＊＊
ＨＭＳ正丁醇低剂量组 ０．１６５±０．０２１　 ０．０７７±０．０１５＊＊ ０．１４３±０．０１９＊＊ ０．１６５±０．０３３＊＊
ＨＭＳ水层高剂量组 ０．１６７±０．０１５　 ０．１２１±０．０１７　 ０．１９３±０．０２８　 ０．１９０±０．０３１
ＨＭＳ水层低剂量组 ０．１６４±０．０１２　 ０．１３０±０．０２２　 ０．２１０±０．０２２　 ０．１９１±０．０１６
注：与基质对照组比较，＃＃Ｐ＜０．０１；与模型对照组比较，＊Ｐ＜０．０５或＊＊Ｐ＜０．０１。
表３　黑面神各极性部位对慢性皮炎－湿疹模型
小鼠耳质量差的影响 （珚ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量（ｇ生药／ｋｇ）肿胀度（ｍｇ） 肿胀抑制率（％）
基质对照组 ４０　 ０．０００９±０．４ －
模型对照组 － ８．５±０．８＃＃ －
皮炎平组 ０．０１５　 ０．９±０．４＊＊ ８９．４１
ＨＭＳ水提高剂量 ４０　 ２．１±０．７＊＊ ７５．２９
ＨＭＳ水提低剂量 ２０　 ４．６±０．３＊ ４５．８８
ＨＭＳ氯仿高剂量组 ４０　 ８．１±０．６　 ４．７０
ＨＭＳ氯仿低剂量组 ２０　 ８．３±０．３　 ２．３５
ＨＭＳ乙酸乙酯高剂量组 ４０　 ３．４±０．５＊＊ ６０．００
ＨＭＳ乙酸乙酯低剂量组 ２０　 ５．１±０．２＊ ４０．００
ＨＭＳ正丁醇高剂量组 ４０　 ２．９±０．７＊＊ ６５．８８
ＨＭＳ正丁醇低剂量组 ２０　 ３．８±０．４＊＊ ５５．２９
ＨＭＳ剩余水层高剂量组 ４０　 ７．５±０．６　 １１．７６
ＨＭＳ剩余水层低剂量组 ２０　 ８．０±０．８　 ５．８８
注：与基质对照组比较，＃＃Ｐ＜０．０１ ；与模型对照组比较，＊＊Ｐ＜
０．０１。
３　讨论
黑面神是广东地产药材，其在皮炎、湿疹等皮肤疾病的
治疗中效果显著。本课题组前期研究均表明黑面神具有抗
炎、镇痛、止痒、抗过敏等药理作用。本研究结果显示，黑面
神水提物 ＨＰＬＣ色谱峰最多，大多数色谱峰能在氯仿、乙酸
乙酯、正丁醇及剩余水层提取物 ＨＰＬＣ色谱中找到对应，而
以乙酸乙酯和正丁醇提取物色谱峰最多，氯仿和剩余水层
部位色谱峰数量较少。动物实验表明，黑面神正丁醇和乙
酸乙酯提取物制备的软膏对小鼠耳肿胀抑制率最高，与
ＨＰＬＣ色谱峰数量呈正相关，故黑面神 ＨＰＬＣ色谱及其相
关峰数据可用于衡量黑面神的抗慢性皮炎－湿疹的疗效，
为进一步开发利用黑面神资源提供参考依据。
参考文献：
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２０１１：６１７－６１９．
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北京：中医古籍出版社，２０１１：６１５－６１６．
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炎－湿疹有效部位的筛选［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１４，３４
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谱指纹图谱研究［Ｊ］．医药导报，２００８，２７（５）：４９４－４９６．
（编辑：尹晨茹）
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