全 文 ：林业调查规划　2007.Dec.32 (6):149 ～ 151
Forest　Inventory　and　Planning
CN 53-1172/S　ISSN1671-3168
6-BA、 NAA植物激素对富民枳组织培养的影响＊
杨 曼1 , 张 敏 2
(1.文山州林业局林业调查规划设计队 , 云南　文山　663000;2.文山农业学校 , 云南　文山　663000)
摘要:对富民枳 Ponciruspolyandra茎段分别采用 MS+不同浓度的 6-BA和 NAA植物激素进行分化培养 , 结果
表明 , MS培养基 6-BA浓度为 1.0mg· L-1 , NAA浓度为 2.56mg· L-1时富民枳茎段生长 、 分化 、 愈伤情况
最佳。
关键词:富民枳;6-BA;NAA;组织培养
中图分类号:S66-33:Q949.752.7　　文献标识码:A　　文章编号:1671-3168 (2007)06-0149-03
Influenceof6-BAandNAAuponTissueCultureofPonciruspolyandra
YANGMan1 , ZHANGMin2
(1.TeamofForestInventoryandPlanning, ForestryBureauofWenshanPrefecture, Wenshan663000 Yunnan;
2.WenshanAgriculturalTechniqueSchool, Wenshan663000 Yunnan, China)
Abstract:MS+diferentdensitiesof6-BAandNAAplanthormonerespectivelywereadoptedtoculture
stempartsofPonciruspolyandra.Theresultindicatedthat1.0mg·L-1densityof6-BAand2.56 mg.
· L-1densityofNAAwereoptimumtostemparts growth, diferentiationandcoalescenceofPoncirus
polyandra.
Keywords:Ponciruspolyandra;6-BA;NAA;tissueculture
　　富民枳 (PonciruspolyandraS.Q.Dingetal),
芸香科枳属 , 是 1984年丁素琴等在云南省富民县
发现的一个新种 [ 1] 。
柑桔优良品种繁多 , 其果实风味怡人 , 营养价
值高。近几年来云南省从四川 、湖南等引进了大量
的柑桔优良品种苗木 , 其中大多未经嫁接的苗木常
常因携带病虫 、 水土不服以及繁殖周期较长等原因
对以后的柑桔品质 、 产量等造成不良影响 。而组织
培养可以在短期内快速繁殖大量的脱毒苗木。
本试验以富民枳的茎段为试材 , 研究不同浓度
的 6-BA和 NAA植物激素对外植体的芽和愈伤组
织的分化 、 形成的影响 , 以期为富民枳的快速繁殖
和种质资源的保存提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
制备外植体的材料为秋初采集生长健壮的一年
生春梢上带有顶芽的茎尖和带有侧芽的茎段。
1.2　方法
1.2.1　培养基配方 [ 2]
A组是在 MS和 0.1mg· L-1NAA中加入不同
浓度的 6-BA进行处理 , 各处理如下:
A1MS+0.5mg· L-1 6-BA+0.1mg· L-1NAA
A2MS+1.0mg· L-1 6-BA+0.1mg· L-1NAA
A3MS+1.5mg· L-1 6-BA+0.1mg· L-1NAA
A4MS+2.0mg· L-1 6-BA+0.1mg· L-1NAA
A5MS+2.5mg· L-1 6-BA+0.1mg· L-1NAA
B组是在 MS和 2.0mg· L-1NAA中加入不同浓度的
NAA进行处理 , 各处理如下:
B1 MS+2.0mg· L-1 6-BA+0.01mg· L-1NAA
B2 MS+2.0mg· L-1 6-BA+0.04mg· L-1NAA
B3 MS+2.0mg· L-1 6-BA+0.16mg· L-1NAA
B4 MS+2.0mg· L-1 6-BA+0.64mg· L-1NAA
B5 MS+2.0mg· L-1 6-BA+2.56mg· L-1NAA
1.2.2　培养条件 [ 3]
温度条件为:白天恒温 26°C, 晚上为恒温 16°C。
＊ 收稿日期:2007-05-22
作者简介:杨 曼 (1979-　), 女 , 云南砚山人 , 助理工程师 , 从事林业调查规划设计工作。
林 业 调 查 规 划
光照条件为:白天 14h, 光照 3 000Lux, 采用
22h制。
1.2.3　培养方法
在春季发梢时剪取富民枳新梢 , 用自来水冲
洗 , 去叶整理 , 用浓洗衣粉水仔细刷洗 , 切成 2 ～
3cm长的茎段 。用无菌水冲洗 3次 , 置于 75%酒
精中浸泡处理 30s, 移入 0.5%HgCL溶液中振荡消
毒 8min[ 4] , 取出后用无菌水冲洗 3次 , 用无菌滤
纸吸干材料表面的水分。然后 , 接种于 A1、 A2、
A3、 A4、 A5和 B1、 B2、 B3、 B3、 B4、 B5中 , 重
复 4次 , 每次重复为 5个茎段。每隔 3d观察一次
各小组的分化情况。当分别从 A、 B组中获得较佳
的 6-BA和 NAA的浓度时 , 将其组合成另一配方
进行外植体转接 , 每隔 3d观察一次其分化情况。
1.2.4　主要观测记载项目
萌芽开始日;发芽率;芽成枝率 (成枝芽所
占发芽总数中的百分率);愈伤日 (愈伤组织开始
出现日);愈伤率;死亡率 。
2　结果与分析
2.1　6-BA对外植体的影响
2.1.1　6-BA对萌芽的影响
表 1　6-BA对富民枳茎段生长的影响
处理 发芽日月—日 平均发芽率% 成枝率% 死亡率%
A1 04-23 60 55 15
A2 04-23 70 80 0
A3 04-23 80 48.8 10
A4 04-23 75 59.1 10
A5 04-23 80 42.3 5
从表 1可看出 , 富民枳茎段在 A组 5个配方中
的发芽开始日都是 4月 23日外 , 其余各值均不同。
　　表 2　6-BA对富民枳茎段发芽率的影响 %
处理 A1 A2 A3 A4 A5
重复 1 80 80 100 100 100
重复 2 80 60 40 600 60
重复 3 60 100 100 80 100
重复 4 20 40 80 60 60
各处理平均数 60 70 80 75 80
0.05%显著水平 a a a a a
0.01%显著水平 A A A A A
从发芽率分析 (新复极差法测验 [ 4] )得 , 各
浓度对发芽率无明显差异 , 见表 1和表 2。
2.1.2　6-BA对芽成枝的影响
从表 1和表 3中看到富民枳茎段在各浓度组中
的成枝情况:A1的重复中只有 2个重复有成枝的情况。
　　表 3　6-BA对外植体成材枝率的作用 %
处理 A1 A2 A3 A4 A5
重复 1 57.1 66.7 41.2 83.3 83.3
重复 2 77.8 80 75 42.8 0
重复 3 0 83.3 25 80 33.3
重复 4 0 100 80 25 50
x 33.7 82.5 55.3 57.8 41.7
SS 4 763.7 562.8 2 115.08 2 212.8 3 442.3
Se2 887.8 446.3 462.6 333.8
Sx
1
-x
2 21.07 14.90 15.20 18.30
t 2.31 61.825 1.625 2.229
这表明 A1的 6-BA浓度 (0.5mg· L-1)和
A5的 6-BA浓度 (2.5mg· L-1)对外植体成枝
(茎段生长)的促进作用不明显 , 其中 2个重复出
现成枝现象可归咎于其它偶然随机因素影响;A2
中 4个重复均有成枝情况 , 而且各重复均有高于
66%的成枝率 , 最高成枝率达 100%, A2中的成
枝率平均值明显大于其它 4个浓度组;A3、 A4中
虽然每个重复均有成枝现象 , 但整齐性差:有较高
的成枝率 (80%, 83.3%), 又有极低的成枝率
(25%)。出现这种高低不均衡现象的原因可能是
有茎段上的芽在采前就已完成分化成熟 , 从而有此
表现 。因此 , 就其低成枝率来看不太适宜作培养基
的配方。
进行 t测验时当 a=0.10时用 A2与其它组进
行比较 , 发现│t│均大于 t0.1 =1.440 (表 3)。
得出 A2的成枝率明显高于其它组的成枝率 , 表明
1.0mg· L-1的 6-BA对茎叶生长的促进作用是明
显的 。
2.1.3　6-BA对富民枳茎段死亡的影响
在表 1和表 4中 , 试验只有 A2浓度中各重复
均无死亡情况 , 而在 A1、 A3、 A4、 A5均有 2个
重复出现不同程度的死亡情况。试验表明 A2的浓
度较优于其它 4个浓度 。
表 4　6-BA各浓度的死亡情况 %
A1 A2 A3 A4 A5
0 0 0 0 0
0 0 20 20 20
20 0 0 0 0
40 0 20 20 0
2.2　NAA浓度对外植体的影响
2.2.1　NAA浓度对外植体发芽开始日的影响
从表 5来看 , B2、 B5的发芽初始日均晚于其
它 3个浓度的发芽初始日 , 这表明在 NAA为
0.04mg· L-1 ～ 0.64mg· L-1浓度时对富民枳茎段
的芽的分化有一定的促进作用。
·150· 第 32卷
杨 曼等:6-BA、 NAA植物激素对富民枳组织培养的影响
表 5　NAA对富民枳茎段生长的影响
处理 发芽日月—日
发芽率
%
成枝率
%
愈伤日
月—日
愈伤率
%
死亡率
%
B1 03-30 50 20 04-26 5 40
B2 03-27 50 20 04-23 10 25
B3 03-27 65 20 05-5 35 10
B4 03-27 46.7 20 05-5 53.3 6
B5 03-30 53.3 33.3 04-23 86.7 20
2.2.2　 NAA浓度对外植体发芽率的影响
在对各浓度的发芽率的比较中 , 发现 B3的发
芽率最高为 65%, B5的发芽率次之为 53.3%,
B1、 B2均为 50%, B4发芽率最低为 46.7% (表
5)。说明 B3的浓度 (0.16mg· L-1)对芽的发生
具有一定的促进作用 , B5的浓度次之 。
2.2.3　 NAA浓度对外植体成效率的影响
从表 5可以看到 Bl、 B2、 B3、 B4的成效率均
为 20%, 在现象观察中以上 4个浓度都有顶端
“自剪” 现象和新枝细小较弱的情况 , 这说明 NAA
在 0.01 ～ 0.64mg· L-1时 , 对富民枳茎段的生长不
理想。当 NAA为 2.56mg· L-1时 , 在试验中茎段
成枝率比其它各浓度高出 13.3个百分点 , 而且新
生枝生长比较正常 , 细弱校极少。表明 NAA为
2.56lng·L-1对富民积外植体的茎段生长的促进作
用强于 0.01 ～ 0.64mg· L-1浓度 。
2.2.4　 NAA对外植体产生愈伤组织的影响
从表 5来看 , 各浓度组出现愈伤组织时间以
B2与 B5为最早 (4月 23日), Bl出现愈伤组织为
4月 26日 , 其它两个浓度出现愈伤组织为 5月 5
日 。从愈伤率来看 , B5的愈伤率高达 86.7%, 为
5个浓度之最 , 而且明显高于第二高愈伤率
(53.3%)。从愈伤组织个体大小来看 , Bl的愈伤
组织的平均直径为 0.55cm;B2的愈伤组织的平均
直径为 0.65cm;B3、 B4愈伤组织的平均直径分别
为 0.45cm、 0.40cm;B5的愈伤组织的平均直径为
0.95cm(原接种时茎段直径为 0.2 ～ 0.3cm), 而
且愈伤组织表面上圆球状的胚状体多而且明显 。这
表明当浓度为 2.56mg· L-1时 NAA对富民积茎段
伤口细胞恢复分裂能力 、 形成愈伤组织的诱导作用
更强 , 更适于作为配合一定量细胞分裂素共同诱导
芽及胚状体的分化产生的配方 。
2.3　1.0mg·L-16-BA与 2.56mg· L-1NAA对外
植体的影响
　　经过 16d的培养与观察 , 转接入 MS+1.0mg
· L-1 6-BA+2.56mg· L-1NAA培养基中的外植
体有以下现象与结果:外植体的死亡率仅为 5%;
芽分莫数多 , 平均每芽的分枝数为 2.6枝 , 最多为
7枝小枝 , 最少为 1枝 , 枝条健壮 、 叶片完整嫩
绿 , 小枝上有较多的新芽而且饱满;愈伤组织虽然
在数量上没有变化 , 但大部分外植体植入培养基的
末端伤口有钝化 、 木质部消失 、 皮层细胞增多变厚
的现象 , 表明伤口细胞正处于伸长生长和分裂阶
段。因此 , MS+1.0mg· L-1 6 -BA+2.56mg·
L-1NAA的培养基较适于富民枳茎段的生长。
3　讨论与小结
(1)虽然试验时间有些短 (9月 11日 ～ 5月 5
日), 但是从成效率 、死亡率来分析 , 1.0mg·L-1
6-BA的成枝速度 、 茎段的生长速度快于其它浓
度 , 而且无死亡情况。试验证明 1.0mg· L-1 6 -
BA的生长条件优于其它 4个浓度 。
(2)经过近 8个月的试验 , 从各项指标的数
值来分析 , 2.56mg·L-1在 5个浓度中应为培养基
中 NAA浓度的首选 。
(3)转接后外植体的生长情况表明富民枳茎
段作外植体进行组织培养时 , MS与 6-BA及 NAA
的配比应为 MS+1.0mg·L-1 6-BA+2.56mg·L-1
NAA, 其外植体的生长 、分化 、愈伤能力表现较好。
(4)本试验较为恰当地研究了 5组浓度 , 并
从中选出最适浓度 , 但仍有不足之处。在各激素浓
度选择上变化过大 , 而且范围过窄 , 不能排除在选
择的浓度范围内或之外存在更适宜的激素浓度 , 试
验时间较短 , 因而有仓猝下结论之嫌;试验没有做
到生根成苗 , 导致这种原因有两个:一是时间短;
二是培养基中的激素种类少或者缺少其它物质
(如:活性炭)。笔者认为在组培富民枳茎段试验
时 , 激素浓度变化要多而细 , 范围要广 , 时间要
长 , 培养基中的附加物质要充分 。
参考文献:
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·151·第 6期