全 文 ：第 31 卷 第 12 期
2 0 1 3年 1 2 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 31 No． 12
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HPLC法同时测定白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量
朱利霞1，2，汪旭1，张汉扬2，杨春云1
(1．恩施州中心医院，湖北 恩施 445000;2．香港城市大学生物化学系，香港 九龙塘)
摘 要:目的:建立 ＲP － HPLC 同时测定白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮和梣酮含量的方法。方法:采用 ＲP －
HPLC，70%乙醇超声提取，色谱条件:色谱柱 Alltima C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，保护柱 All － GuardTM C18
(4． 6 mm × 7． 5 mm，5 μm) ，流动相乙腈 － 0． 1%磷酸梯度洗脱，流速 1． 0 mL /min，进样量 10 μL，柱温 25 ℃，检测
波长 238 nm。结果:该 3 种成分分离良好，线性范围依次为 0． 4 ～ 16． 0，10 ～ 400 和 1． 6 ～ 64． 0 mg /L，加样回收率
分别为 99． 95%，98． 91%，100． 02%，ＲSD分别为:1． 81%，1． 83%，2． 62%。结论:本方法简单、快捷，重现性好，准
确率高，可用于白鲜皮药材的质量控制。
关键词:白鲜皮;白鲜碱;黄柏酮;梣酮;HPLC
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717(2013)12 － 2706 － 03
Simultaneous Determination of Dictamnine，Obacunone and Fraxinellone
in Dictamni Cortex by ＲP －HPLC
ZHU Lixia1，2，WANG Xu1，ZHANG Hanyang2，YANG Chunyun1
(1． Enshi Central Hospital，Enshi 445000，Hubei，China;
2． City University of Hong Kong，Hong Kong，China)
Abstract:Objective:To develop a ＲP － HPLC method for simultaneous determination of dictamnine，obacunone and
fraxinellone in Dictamni Cortex． Method:The three compounds were extracted with 70% ethanol by sonication and ＲP －
HPLC conditions were as follows:Alltima C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)column，acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid
as a mobile phase by gradient elution，flow rate 1． 0 mL /min，injection volume 10 μL，column temperature 25 ℃，detec-
tion wavelength 238 nm． Ｒesult:The determined three compounds were well separated with a linear range of 0． 4 ～ 16． 0，
10 ～ 400 and 1． 6 ～ 64． 0 mg /L，respectively． The recoveries of them were 99． 95%，98． 91% and 100． 02%，and ＲSD
were 1． 81%，1． 83%，2． 62%，respectively． Conclusion:This method is simple，rapid，accurate and sensitive，particular-
ly suitable for the quality control of Dictamni Cortex．
Key words:Dictamni Cortex;dictamnine;obacunone;fraxinellone;HPLC
收稿日期:2013 － 07 － 21
基金项目:香港中药材标准第四期(Hong Kong Chinese Materia Med-
ica Standards，Phase IV)
作者简介:朱利霞(1983 －) ，女，湖北仙桃人，硕士，研究方向:中药
药效物质基础及质量标准化研究。
通讯作者:杨春云(1973 －) ，男，湖北恩施人，副主任医师，研究方
向:民族医药的研究与开发。
白鲜皮为芸香科植物白鲜(Dictamnus dasycarpus
Turcz．)的干燥根皮。具有清热燥湿，祛风解毒的功效，用
于湿热疮毒，黄水淋漓，湿疹，风疹，疥癣疮癞，风湿热痹，黄
疸尿赤等症，还可用于治疗皮肤化脓性溃疡，结核性脓胸和
晚期肺癌［1 － 2］。现代药理学研究表明白鲜皮具有抗炎、抗
菌、抗肿瘤、抗生育、抗衰老、提高免疫力、杀虫、解热及对心
血管系统等作用［2］。生物碱类白鲜碱、内酯类黄柏酮和梣
酮为白鲜皮的主要药效成分，具有多种生物活性［3］。为了
更有效地控制其质量，本文建立了反相高效液相色谱法同
时测定白鲜皮中这两类成分的 3 个主要代表活性成分—白
鲜碱、黄柏酮和梣酮含量的方法。
1 仪器与试药
Waters 2695 /2996 高效液相色谱仪，二极管阵列检测
器(DAD) ，四元低压梯度泵，自动进样器，真空脱气机，柱
温箱;SG2200HDT型超声波清洗机;岛津 AUW220D型十万
分之一电子天平。
色谱级甲醇、乙腈(美国 Fisher 公司) ;其他试剂均为
分析纯;水为重蒸馏水。梣酮对照品(中国药品生物制品
检定所) ;白鲜碱对照品(上海同田生物技术股份有限公
司) ;黄柏酮对照品(成都曼思特生物科技有限公司)。
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作者收集了不同产地白鲜皮药材 13 批，经北京中医药
大学王文全教授鉴定，为芸香科植物白鲜 Dictamnus dasy-
carpus Turcz．的干燥根皮。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Alltima C18(4． 6 mm × 250 mm，5
μm);保护柱:All － GuardTM C18(4． 6 mm × 7． 5 mm，5
μm);流动相:乙腈 － 0． 1%磷酸(40 ∶ 60 ～ 43 ∶ 57，0 ～ 15
min;43 ∶ 57 ～ 50 ∶ 50，15 ～ 20 min;50 ∶ 50 ～ 54 ∶ 46，20 ～ 35
min)，流速 1． 0 mL /min，进样量 10 μL;柱温 25 ℃;检测波
长 238 nm。在上述条件下，白鲜碱、黄柏酮和梣酮的保留
时间分别为 15． 6 min，27． 7 min，31． 0 min，无杂质干扰，三
者分离度良好，图 1。
A:混合对照品 B:白鲜皮样品 1．白鲜碱 2．黄柏酮 3．梣酮
图 1 对照品及样品 HPLC色谱分离图
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取白鲜碱对照品 2． 0 mg
置 10 mL量瓶中，加 70%乙醇至刻度，摇匀，即得白鲜碱储
备液(200 mg /L);精密称取黄柏酮对照品 4． 0 mg 置 5 mL
量瓶中，加 70%乙醇至刻度，摇匀，即得黄柏酮储备液(800
mg /L);精密称取梣酮对照品 2． 0 mg 置 10 mL 量瓶中，加
70%乙醇至刻度，摇匀，即得梣酮储备液(200 mg /L)。分
别精密量取上述三者储备液 0． 4 mL，2． 5 mL，1． 6 mL 置 5
mL量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照
品储备液，其中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的质量浓度分别为
16 mg /L，400 mg /L，64 mg /L。精密量取上述混合对照品储
备液 50 μL 置 1 mL 量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇
匀，即得混合对照品溶液，其中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的质
量浓度分别为 0． 8 mg /L，20 mg /L，3． 2 mg /L。
2． 3 供试品溶液的制备 准确称取白鲜皮粗粉(过四号
筛)0． 20 g置 50 mL离心管中，超声提取两次，每次加 70%
乙醇 10 mL，提取 15 min，离心 10 min，收集上清液，合并至
25 mL量瓶中，残渣加 70%乙醇 5 mL清洗，离心，合并洗液
至上述量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2． 4 检测限的确定［4］ 以提取完全的白鲜皮药渣作为空
白药材，精密称取空白药渣 7 份，每份 0． 20 g，每份分别加
入白鲜碱、黄柏酮、梣酮对照品 2． 94，100，17． 48 μg，按供试
品溶液的制备方法制备溶液，按上述色谱条件检测，计算分
别得各对照品质量浓度的 SD 值，该 SD 的 3． 14 倍即为白
鲜碱、黄柏酮、梣酮的检测限，结果其在溶液中的检测限分
别为 0． 015，0． 632，0． 102 mg /L，在样品中的检测限分别为
1． 94，78． 98，12． 73 mg /kg(表 1)。检测限的考察方法为:以
计算得到的检测限量的对照品加入空白药渣中，按供试品
溶液的制备方法制备溶液，按上述色谱条件检测，刚好可以
检测到各对照品峰，表明本法的准确性高，图 2。
2． 5 定量限的确定［4］ 各对照品检测限的 5 倍即为其定
量限，即得白鲜碱、黄柏酮、梣酮在溶液中的定量限分别为
0． 075，3． 16，0． 510 mg /L;在样品中的定量限分别为 9． 70，
394． 90，63． 65 mg /kg。定量限的考察方法为:精密称取空
白药渣 5 份，每份 0． 20 g，每份分别加入白鲜碱、黄柏酮、梣
酮对照品 1． 94，78． 98，12． 73 μg，按供试品溶液的制备方法
制备溶液，按上述色谱条件检测，测得平均质量浓度分别为
0． 073，2． 942，0． 543 mg /L，结果其 ＲSD 分别为 2． 364%，
0． 855%，2． 144%，回收率分别为 93． 45%，93． 11%，
106． 69%，表明本法的准确性高。
表 1 确定检测限的结果数据表
样品编号
白鲜碱
(mg /L)
黄柏酮
(mg /L)
梣酮
(mg /L)
1 0． 103 3． 638 0． 714
2 0． 107 3． 553 0． 696
3 0． 112 3． 256 0． 721
4 0． 110 3． 399 0． 695
5 0． 117 3． 865 0． 776
6 0． 105 3． 487 0． 681
7 0． 107 3． 364 0． 742
Mean(mg /L) 0． 109 3． 509 0． 718
SD(mg /L) 0． 0049 0． 2012 0． 0324
MDL(mg /L)(在样品溶液中) 0． 015 0． 632 0． 102
MDL(mg /kg)(在样品中) 1． 94 78． 98 12． 73
1．白鲜碱 2．黄柏酮 3．梣酮
图 2 检测限的 HPLC色谱展示图
2． 6 线性关系考察 取白鲜碱、黄柏酮和梣酮的混合对照
品储备液，用 70%乙醇依次稀释配制成系列浓度，最终白
鲜碱的质量浓度分别为 0． 4，0． 8，1． 6，2． 4，4． 0，6． 4，8． 8，
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11． 2，16． 0 mg /L，黄柏酮的质量浓度分别为 10，20，40，60，
100，160，220，280，400 mg /L，梣酮的质量浓度分别为 1． 6，
3． 2，6． 4，9． 6，16． 0，25． 6，35． 2，44． 8，64． 0 mg /L。按上述
色谱条件测定，以对照品峰面积值 Y对其质量浓度 X绘制
标准曲线，得回归方程分别为:白鲜碱 Y = 162250X +
27058，Ｒ2 = 0． 9994(n = 9) ;黄柏酮 Y = 2818． 5X + 11381，
Ｒ2 = 0． 9992(n = 9) ;梣酮 Y = 20993X + 7401． 9，Ｒ2 =
0． 9995(n = 9)。
2． 7 精密度试验 取白鲜碱、黄柏酮、梣酮的质量浓度分
别为 1． 6，40，6． 4 mg /L的混合对照品溶液，重复进样 6 次，
按上述标准曲线，测得平均质量浓度分别为 1． 58，39． 87，
6． 39 mg /L，结果其 ＲSD分别为 0． 83%，1． 05%，0． 76%，表
明仪器、方法精密度良好。
2． 8 稳定性试验 取供试品溶液，分别于 0，2，4，8，12，24
h进样，测定，结果其白鲜碱、黄柏酮、梣酮峰面积的 ＲSD分
别为 0． 79%，0． 61%，0． 92%，表明供试品溶液在 24 h内保
持稳定。
2． 9 重复性试验 取同一批药材粉末，按供试品溶液的制
备方法制备 6 份供试品溶液，按上述色谱条件进样，结果白
鲜碱、黄柏酮、梣酮含量的 ＲSD 分别为 1． 13%，1． 86%，
1． 55%，表明方法重复性良好。
2． 10 回收率试验 精密称取已知含量的药材粉末 6 份，
每份 0． 20 g，每份分别加入白鲜碱、黄柏酮、梣酮对照品
0． 042，0． 808，0． 205 mg，按供试品溶液的制备方法制备加
样回收率试验供试品溶液，上述色谱条件检测，计算加样回
收率，白鲜碱、黄柏酮、梣酮的平均回收率分别为:99． 95%，
98． 91%，100． 02%，ＲSD 分别为:1． 81%，1． 83%，2． 62%，
表明本法的回收率良好。
2． 11 样品测定 按上述供试品溶液的制备方法及上述色
谱条件对不同产地的 13 批白鲜皮药材中白鲜碱、黄柏酮、
梣酮的含量进行了测定，表 2。
表 2 不同产地药材中白鲜碱、黄柏酮、梣酮的
含量测定结果(n = 2)
药材产地 白鲜碱 黄柏酮 梣酮
河北隆化 0． 0450 0． 2256 0． 2445
河北围场 0． 0459 0． 4611 0． 2515
内蒙古宁城 0． 0281 0． 1673 0． 2406
陕西太白 0． 0315 0． 5192 0． 2345
辽宁开源 0． 0207 0． 3264 0． 1356
河北丰宁 0． 0398 0． 5234 0． 1802
黑龙江伊春 0． 0252 0． 3676 0． 1305
黑龙江阿城 0． 0301 0． 3961 0． 2203
吉林长春 0． 0225 0． 3512 0． 0946
内蒙古(朴记) 0． 0154 0． 4425 0． 0932
安徽(致信) 0． 0228 0． 4528 0． 1024
内蒙古(黄泽记) 0． 0303 0． 2895 0． 2207
河北(余仁生) 0． 0218 0． 5438 0． 1835
3 讨 论
3． 1 检测波长的选择 作者分别对白鲜碱、黄柏酮、梣酮
对照品的 70%乙醇溶液进行了紫外扫描，得到其最大吸收
波长分别为 237． 8，213． 2，216． 3 nm。考虑到样品中白鲜碱
的含量相对于黄柏酮和梣酮的含量较低，为保证白鲜碱测
定的灵敏度，最终确定检测波长为 238 nm。
3． 2 供试品提取条件的选择 作者采用单因素试验方法，
首先考察了超声提取法和回流提取法，用甲醇提取 30 min，
结果表明超声提取效果较好;然后考察了提取溶剂:甲醇、
95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、丙酮，超声提取 30 min，结
果表明 70%乙醇提取效果最好;考察了提取时间 15，30，60
min，用 70%乙醇超声提取，结果表明第一次提取 15 min就
够了;最后考察了提取次数，结果表明超声提取两次，可以
将药材中的白鲜碱、黄柏酮和梣酮几乎提取完全。
3． 3 流动相的选择 作者考察了流动相甲醇 －水(60 ∶
40)和乙腈 －水(47 ∶ 53) ，结果显示:采用甲醇系统洗脱白
鲜碱、黄柏酮和梣酮的保留时间较近;而采用乙腈系统洗脱
3 种指标成分的保留时间相差较远，重现性好，但出现了拖
尾现象，采用 0． 1%磷酸代替水，解决了拖尾现象。采用乙
腈 － 0． 1%磷酸(40 ∶ 60 ～ 43 ∶ 57，0 ～ 15 min;43 ∶ 57 ～ 50 ∶
50，15 ～ 20 min;50 ∶ 50 ～ 54 ∶ 46，20 ～ 35 min) ，梯度洗脱，分
离度均大于 1． 5，拖尾因子在 1． 01 ～ 1． 08，可以准确地对白
鲜碱、黄柏酮和梣酮同时进行含量测定，且采用此条件所得
色谱图较好的反映了药材信息，可同时作为指纹图谱鉴定
该药材。
《中华人民共和国药典》2010 年版 1 部仅收载白鲜皮
中内酯类化合物黄柏酮和梣酮的含量测定方法，而白鲜碱
为其主要的一种生物碱类成分，具有抗真菌(可抑制白色
念球菌生长)、强心、松弛血管、抗血小板聚集等作用［5 － 7］，
本文建立了同时测定这两类成分的 3 个主要代表活性成
分———白鲜碱、黄柏酮和梣酮含量的方法。采用乙腈 － 0．
1%磷酸梯度洗脱，能同时对白鲜皮进行 HPLC指纹图谱定
性和定量分析，可以更简便、高效地控制白鲜皮药材的质
量。
参考文献
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