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白鲜营养器官黄柏酮和梣酮的组化定位及含量的动态变化



全 文 :西北林学院学报 2017,32(1):239~243
Journal of Northwest Forestry University
  doi:10.3969/j.issn.1001-7461.2017.01.38
白鲜营养器官黄柏酮和梣酮的组化定位及含量的动态变化
 收稿日期:2016-05-04 修回日期:2016-06-14
 基金项目:国家自然科学基金项目(31200152);中国科学院“西部之光”人才培养项目(2011DF06);陕西省“青年科技新星”计划项目
(2015KJXX-90);陕西省科学院科技计划项目(2014K-23)。
 作者简介:周亚福,男,博士,副研究员,研究方向:药用植物结构与成分关系研究。E-mail:zyf820207@126.com
周亚福1,2,毛少利1,2,石新卫1,2,王宇超1,2,卢 元1,2
(1.陕西省西安植物园,陕西省植物研究所,陕西 西安710061;2.陕西省植物资源保护与利用工程技术研究中心,陕西 西安710061)
摘 要:采用组织化学和高效液相色谱法(HPLC法)对秦岭产药用植物白鲜(Dictamnus dasy-
carpus)营养器官白鲜皮(根皮)、木质部、茎和叶中萜类物质的组织定位及黄柏酮和梣酮含量的动
态变化规律进行了研究。组织化学测试结果表明:在根中,萜类物质主要分布在多年生根的周皮、
次生韧皮部、韧皮部的油细胞、维管形成层以及木质部的薄壁组织中;在茎中,萜类物质主要分布在
茎的表皮、紧贴表皮的分泌囊、皮层、韧皮部和木质部的薄壁细胞、髓部以及紧贴茎表皮的分泌囊
中;在叶中,萜类物质主要分布在叶的表皮、头状腺毛、栅栏组织、海绵组织及维管束位置的薄壁组
织中。HPLC测试结果表明:白鲜植物体除药用部位白鲜皮外,在木质部、茎和叶中均含有萜类物
质黄柏酮和梣酮;试验测试样本白鲜皮中黄柏酮和梣酮的含量均符合药典标准(2015);在除营养生
长期外几个生长阶段的木质部以及盛花期、成熟前期和成熟期I的茎和叶中,其黄柏酮含量亦均符
合药典标准,其中盛花期白鲜茎和叶中黄柏酮的含量为药典最低含量标准的2~4倍多。秦岭终南
山产白鲜皮品质优良,白鲜的根木质部、茎和叶用来提取黄柏酮,具有较好的应用价值,建议实践中
针对不同需求综合利用白鲜非药材部位。
关键词:白鲜皮;黄柏酮;梣酮;组织化学;植物化学
中图分类号:S727.34   文献标志码:A   文章编号:1001-7461(2017)01-0239-05
Histochemistry of Obacunone and Fraxinelone in Vegetative Organs of
Dictamnus dasycarpus and the Content Changes in Different Growth Stages
ZHOU Ya-fu1,2,MAO Shao-li 1,2,SHI Xin-wei 1,2,WANG Yu-chao1,2,LU Yuan1,2
(1.Xian Botanical Garden of Shaanxi Province,Institute of Botany of Shaanxi Province,Xian,Shaanxi 710061,China;
2.Shaanxi Engineering Research Centre for Conservation and Utilization of Botanical Resources,Xian,Shaanxi 710061,China)
Abstract:Accumulation of obacunone and fraxinelone in vegetative organs of Dictamnus dasycarpus from
Qinling Mountains and the content changes in different growth stages were studied by using histochemistry
and HPLC methods.The results showed that the terpenes were located in the periderm,parenchyma cels
and oil cels of secondary phloem,vascular cambium and parenchyma cels in perennial root xylem of D.
dasycarpus.In stem,the terpenes were detected in the epidermis,secretory cavities,cortex,parenchyma
cels of xylem and phloem,parenchyma cels in the pith.And in leaf,the terpenes were located in the epi-
dermis,capitate glandular hairs,palisade tissue,spongy tissue,secretory cavities and parenchyma cels of
the vein.The HLPC analysis showed that the obacunone and fraxinelone were both detected in bark(to
make crude drug of Dictamni Cortex),xylem,stem and leaf,and contents of obacunone and fraxinelone in
different growth stages in bark were in accordance with the standards of Chinese Pharmacopoeia(2015).
And the contents of obacunone at al the stages except vegetative stage in root xylem,and the stages of ful
flowering stage,stage before mature stage and mature stage in stem and leaf were also in accordance with
the standards of Chinese Pharmacopoeia,and the content of obacunone in stem and leaf during ful flower-
ing stage showed 2-4times higher than that of the least content standard in Chinese Pharmacopoeia.The
results showed that Dictamni Cortex from Qinling Mountains was characterized by good quality,and the
stem and leaf showed potential development and utilization value to extract obacunone.It could be conclu-
ded that the vegetative organs except bark of D.dasycarpus should be explored according to different
needs.
Key words:Dictamni Cortex;obacunone;fraxinelone;histochemistry;phytochemestry
  白鲜(Dictamnus dasycarpus)为芸香科(Ruta-
ceae)白鲜属(Dictamnus)植物[1]。《中国药典》2015
版收载中药白鲜皮为白鲜的干燥根皮,为我国重要
的大宗中药材,又称北鲜皮、白羊鲜、羊蹄草、八股牛
等,具有清热燥湿、祛风解毒的功效,其主要指标成
分为黄柏酮和梣酮[2]。现代药理学研究表明,黄柏
酮具有抗癌、抗肿瘤药的细胞毒活性[3-4]。梣酮具有
良好的保肝降酶和抑制肝纤维化等活性,为一种新
型肝病治疗药物,并具有抑菌、杀虫等活性[5],此外
还具有体外抗癌活性[6-7]。目前有关白鲜植物体主
要成分黄柏酮和梣酮的研究主要集中在化学成分的
提取分离、成分测定、药理作用等方面[3-8],而白鲜非
药用部位根、木质部及地上营养器官中,黄柏酮和梣
酮的含量及不同生长阶段含量的动态变化规律尚不
清楚。目前药材市场流通的白鲜皮主要来源于内蒙
古和东北地区,且以野生品为主,鲜有栽培品,而市场
需求量大,野生资源逐年急剧减少。此外中药以白鲜
根皮入药,其余部位如木心、茎和叶均予以丢弃,造成
资源极大浪费。为此,本研究以秦岭终南山产药用植
物白鲜为对象,系统研究白鲜皮、根木质部、茎和叶中
黄柏酮和梣酮的分布及含量的动态积累规律,以期为
白鲜皮药材的适时采收、扩大药源和地上部分的综合
开发利用等提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
研究用组织化学测试材料(根、茎和叶)采自营
养生长期陕西省西安植物园移栽的白鲜植株;高效
液相色谱测试材料(白鲜皮、根木质部、茎和叶)采自
秦岭终南山(33°59′31″N,108°58′13.6″E)野生植株,
分别于营养生长期(4月下旬)、盛花期(5月中旬)、
成熟前期(6月下旬)、成熟期Ⅰ(果实刚成熟,8月中
旬)和成熟期Ⅱ(10月中旬)5个生长阶段进行采集
(采集的白鲜皮和根木质部均为多年生)。所有采集
的植物化学材料于室温阴干,经粉碎机粉碎,过60
目筛后备用。
1.2 方法
1.2.1 萜类物质的组织化学测试 采集新鲜的白
鲜根、茎和叶样品,分别徒手切片,后将切片放置于
载玻片,经5%香草醛-浓硫酸试液显色反应[9],Lei-
ca(DC 300F)或Nikon(DS-Fi1)显微镜观察并拍照。
香草醛试液配方:精密称取0.05g香草醛溶于10
mL浓硫酸∶乙醇(4∶1)混合溶液中[9]。
1.2.2 黄柏酮和梣酮的含量测试 
1.2.2.1 色谱条件 仪器:高效液相色谱仪(Wa-
ters 2487);流动相:甲醇-水(60∶40);色谱柱:Sun
fireTMC18柱(150mm×4.6mm,5μm);检测波长:
236nm;流速:1.0mL·min-1;室温[10-11]。
1.2.2.2 对照品溶液的制备及线性关系 用电子
天平精密称取3.9mg黄柏酮和3.0mg和梣酮标
准品,放置于离心管中,用移液器精密吸取3mL甲
醇,震荡摇匀溶解,得到质量浓度分别为1.3mg·
mL-1和1.0mg·mL-1的黄柏酮和梣酮混合标品
母液。将混合标品母液用色谱甲醇逐步稀释,得到
浓度为 1.04、0.52、0.26、0.13、0.078、0.026、
0.013、0.000 65、0.000 065mg·mL-1的黄柏酮和
浓度为 0.8、0.4、0.2、0.1、0.06、0.02、0.01、
0.000 5、0.000 05mg·mL-1的梣酮的混合标品溶
液。精密吸取10μL混合标品溶液,在上述(1.2.2.
1)色谱条件下进行测试,依据混合标品的浓度(mg
·mL-1)和峰面积关系,得标准曲线的线形方程。
黄柏酮标准曲线的线性方程为:Y=4×1 000 000 X
+9 027(R2=0.992,n=9);梣酮标准曲线的线性方
程为:Y=3×10 000 000 X-29 433(R2=0.997,n=
9);表明黄柏酮和梣酮标准品浓度与进样量分别在
0.000 065~1.04mg·mL-1和0.000 05~0.8mg
·mL-1范围内有线形关系良好(图1)。
1.2.2.3 供试品溶液的制备和测定 白鲜营养器
官根、茎、叶中黄柏酮和梣酮的提取制备同文献
[11]。精密吸取已制备的不同生长阶段的白鲜各营
养器官样品溶液10μL,注入高效液相色谱仪。在
上述色谱条件(1.2.2.1)下进行检测,依据黄柏酮和
梣酮检测的峰面积,按照上述线性方程分别计算各
样品中黄柏酮和梣酮的浓度,最后计算各样品中黄
柏酮和梣酮的含量。
042 西北林学院学报 32卷 
图1 黄柏酮(a)和梣酮(b)标准曲线
Fig.1 Standard curves of obacunone(a)and fraxinelone(b)
2 结果与分析
2.1 萜类物质的组织化学定位
黄柏酮和梣酮属于萜类化合物,应用香草醛-浓
硫酸试液反应对白鲜营养器官中萜类物质的分布和
积累进行观察拍照。在多年生白鲜根的徒手切片
上,由外到内,根的周皮、次生韧皮部薄壁细胞、维管
形成层以及木质部的薄壁细胞均被染为紫红色(图
2,A、B);此外根次生韧皮部的油细胞亦被染成红色
或紫红色(图2,C)。在茎中,茎的表皮、皮层以及韧
皮部薄壁细胞呈紫红色,此外紧贴茎表皮的分泌囊
以及茎髓部周围的薄壁细胞亦呈现浅的紫红色(图
2,D、E)。在叶脉位置,白鲜叶上下表皮细胞、韧皮
部和木质部薄壁细胞以及叶上下表皮和维管束之间
的薄壁组织细胞呈紫红色(图2,F);在紧贴叶上下
表皮细胞位置的分泌囊和位于表皮上的头状腺毛亦
呈紫红色反应(图2,F);在叶肉位置,叶的上下表皮
细胞呈浅的紫红色,而栅栏组织和海绵组织细胞呈
深色的紫红色(图2,G)。
2.2 不同生长阶段白鲜营养器官中黄柏酮和梣酮
含量的积累动态
  采用高效液相色谱法对白鲜营养生长期、盛花
期、成熟前期、成熟期Ⅰ和成熟期Ⅱ5个阶段白鲜
皮、根木质部、茎和叶中梣酮和黄柏酮含量的动态变
化进行测定。
2.2.1 白鲜皮中黄柏酮和梣酮含量的动态变化 
从营养生长期到成熟期,白鲜皮中黄柏酮的含量变
化呈倒V字形(图3)。在营养生长期,白鲜皮中黄
柏酮的含量最低,为0.36%;此后黄柏酮含量逐渐
上升,在盛花期含量为0.67%;在成熟前期,其含量
达到最高值0.87%,约为营养生长期的2倍多;在
成熟期Ⅰ和成熟期Ⅱ,黄柏酮含量略降低,分别为
0.77%和0.61%。
不同生长阶段白鲜皮中梣酮含量的变化则呈波
浪形(图3)。在营养生长期和盛花期,梣酮的含量
分别为0.21%和0.15%;在成熟前期,梣酮达到最
高值,为0.30%;在成熟期Ⅰ和成熟期Ⅱ,梣酮含量
相对成熟前期较少,分别为0.13%和0.19%。
2.2.2 根木质部中黄柏酮和梣酮含量的动态变化
 在白鲜木质部/木心中,黄柏酮的含量在营养生长
期最低,为 0.13%;此后升高,盛 花 期 含 量 为
0.20%;在成熟前期黄柏酮含量略低,为0.17%;在
成熟期Ⅰ黄柏酮含量迅速升高,并达到最高值
(0.26%);在成熟期Ⅱ,木质部黄柏酮的含量和成熟
期Ⅰ类似,为0.25%。(图4)
相对根木质部中黄柏酮的含量及变化,不同生
长阶段白鲜根木质部中梣酮的含量较低,而且含量
变化较小(图4)。营养生长期、盛花期、成熟前期、
成熟期Ⅰ和成熟期Ⅱ梣酮的含量依次为0.03%、
0.02%、0.03%、0.02%和0.03%。
2.2.3 茎中黄柏酮和梣酮含量的动态变化 在茎
中白鲜营养生长期至盛花期,黄柏酮含量迅速增加
(图5)。在营养生长期,黄柏酮含量为0.29%;在盛
花期,黄柏酮含量达最高值,为0.39%;在成熟前期
黄柏酮的含量急剧下降。成熟前期和成熟期Ⅰ黄柏
酮的含量相同,为0.18%,在成熟期Ⅱ,黄柏酮含量
降至最低,为0.04%。
白鲜营养生长期、盛花期、成熟前期、成熟期Ⅰ
和成熟期Ⅱ梣酮的含量均很小,分别为0.02%、
0.01%、0.01%、0.01%和0.01%。
2.2.4 叶中黄柏酮和梣酮含量的动态变化 在叶
中,不同生长阶段黄柏酮含量的变化趋势类似于茎
中黄柏酮含量变化(图6)。黄柏酮的含量于盛花期
达到最高,此后急剧下降,在成熟期Ⅱ达到最低。5
个阶段黄柏酮含量分别为0.50%、0.69%、0.41%、
0.14%和0.04%。
142第1期 周亚福 等:白鲜营养器官黄柏酮和梣酮的组化定位及含量的动态变化
注:A~C白鲜根的横切 A.示白鲜根周皮、次生韧皮部、维管形成层、木质部薄壁组织呈红色或紫红色;B.示白鲜根次生韧皮部、维管形成层以
及木质部薄壁细胞呈紫红色;C.示次生韧皮部油细胞呈红色或紫红色;D~E.茎的横切,示茎表皮、分泌囊、皮层、韧皮部及髓周围的薄壁组织
呈紫红色;F.叶的横切,示叶上下表皮、分泌囊、头状腺毛以及海绵组织、栅栏组织以及叶脉维管束上下方的薄壁组织呈紫红色;G.示叶上下
表皮、栅栏组织和海绵组织呈紫红色。PE.周皮C.皮层SP.次生韧皮部 VS.维管形成层 X.木质部 P.韧皮部 OC.油细胞SC.分泌囊 PI.髓
PT.栅栏组织ST.海绵组织PC.薄壁组织。
图2 白鲜营养器官萜类化合物的组化定位
Fig.2 Histochemistry of terpenes in vegetable organs of D.dasycarpus
图3 不同生长阶段白鲜皮中黄柏酮和梣酮的含量变化
Fig.3 Changes of fraxinelon and obakunone in different
developmental stages of bark
图4 不同生长阶段白鲜根木质部中黄柏酮和
梣酮的含量变化
Fig.4 Changes of fraxinelon and obakunone in different
developmental stages of root xylem
242 西北林学院学报 32卷 
图5 不同生长阶段白鲜茎中黄柏酮和梣酮的含量变化
Fig.5 Changes of fraxinelon and obakunone in different
developmental stages of stem
图6 不同生长阶段白鲜叶中黄柏酮和梣酮的含量变化
Fig.6 Changes of fraxinelon and obakunone in different
developmental stages of leaf
研究发现,不同生长阶段白鲜叶中梣酮的含量
均极低,分别为0.01%、0.01%、0.01%、0.01%和
0.004%。
4 结论与讨论
萜类物质广泛存在于高等植物中,在植物的发
生发育和人类生活中起着重要的作用[12-14]。有关萜
类物质在植物体的分布和积累,已有大量的研究报
道[15-16]。在西洋参根中,人参皂苷分布在周皮的栓
内层、韧皮部和木质部的薄壁组织以及韧皮部的分
泌道中[15]。在北柴胡根中,柴胡皂苷主要分布在次
生韧皮部和维管形成层中;在北柴胡非药用部位,柴
胡皂苷主要分布在茎表皮、皮下的厚角组织、皮层和
髓部的分泌道以及叶表皮和叶肉中[16]。黄柏酮和
梣酮为中药白鲜皮的主要药效成分和指标成分[2],
均属于萜类化合物。萜类物质遇香草醛-浓硫酸试
液可产生红色或紫红色[9],可快速检测萜类物质在
植物体的分布,依据此原理对白鲜营养器官中萜类
物质进行组化定位。结果显示,白鲜除药用部位白
鲜皮(根皮)外,其根木质部、茎和叶的薄壁组织细
胞、茎和叶的表皮、分泌囊和头状腺毛中均含有萜类
物质。为了进一步证实白鲜非药用部位根木质部、
茎和叶中是否存在黄柏酮和梣酮,本研究采用高效
液相色谱法对不同生长阶段白鲜根木质部、茎和叶
中黄柏酮和梣酮的含量进行测定。结果表明,除药
典收录的中药白鲜皮中含有黄柏酮和梣酮外,不同
生长阶段白鲜的根木质部、茎和叶中均含有黄柏酮
和梣酮,与本研究组织化学结果基本吻合,为白鲜非
药材部位的进一步综合利用提供了依据。
依据中国药典规定,中药白鲜皮中黄柏酮和梣
酮的含量分别不低于0.15%和0.05%[2]。本研究
结果显示,白鲜营养生长期、盛花期、成熟前期、成熟
期Ⅰ和成熟期Ⅱ的白鲜皮中梣酮和黄柏酮的含量均
远高于药典最低含量标准及多数主产区白鲜皮中黄
柏酮和梣酮的含量[7,17],表明秦岭终南山产白鲜皮
药材质量优良,具有较好的开发利用前景。此外,在
白鲜生长的5个生长阶段,白鲜皮中黄柏酮和梣酮
的含量在成熟前期均达到最高,从药材质量标准的
角度,秦岭产白鲜皮的最佳采收期应为成熟前期。
在实践中,中药白鲜皮为白鲜的干燥根皮,而将
木心/根木质部以及地上茎和叶部分全部舍弃,造成
资源极大浪费。本研究对5个生长阶段白鲜根木质
部、茎和叶中黄柏酮和梣酮的含量进行提取测定,结
果显示:白鲜非药材部位根木质部、茎和叶中梣酮的
含量均低于药典最低含量标准[2];但白鲜除营养生
长期外,其盛花期、成熟前期、成熟期Ⅰ和成熟期Ⅱ
根木质部中黄柏酮含量均高于药典最低含量标准
(0.15%)[2];此外,在白鲜茎和叶生长的盛花期、成
熟前期和成熟期Ⅰ,黄柏酮的含量亦均符合药典标
准,其中盛花期白鲜茎和叶中黄柏酮的含量为药典
最低含量标准的2~4倍多。表明白鲜非药用部位
根木质部、茎和叶用来提取黄柏酮,具有非常好的应
用价值,建议实践中应针对不同需求综合开发利用
白鲜非药材部位。
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872 西北林学院学报 32卷