全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（０５）：１３０～１３２
第一作者简介：古玉（１９８１－），女，四川成都人，硕士，实验师，现主
要从事药用植物资源的开发利用研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｙｕ６３２＠
ｑｑ．ｃｏｍ。
基金项目：四川农业大学教学质量推进计划资助项目。
收稿日期：２０１１－１２－１４
石海椒组织培养研究
古 玉，李 龙，许 强
（四川农业大学 生命理学院，四川 雅安６２５０１４）
摘 要：以石海椒愈伤组织为试材，研究不同培养基和激素配比对不定芽分化和不定根诱导的
影响，以建立石海椒快繁体系。结果表明：石海椒愈伤组织不定芽分化最佳配方为ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ
６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，不定根诱导最佳培养条件为１／２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＶＢ１。
关键词：石海椒；不定芽分化；不定根诱导
中图分类号：Ｓ ５６７．７９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）０５－０１３０－０３
石海椒［Ｒｅｉｎｗａｒｄｔｉａ ｔｒｉｇｙｎａ（Ｒｏｘｂ．）Ｐｌａｎｃｈ．］为亚
麻科石海椒属多年生常绿半灌木，别名金雀梅、黄亚麻、
迎春柳，在《全国中草药汇编》中亦名过山青，产于中国
四川、云南、贵州、湖北等地。喜生于石灰岩形成的土
壤，常见于路旁、山坡、岩石或沟边。因其叶片四季常
青，花数多、花期长，花色金黄典雅，香气淡雅、观赏性极
高，目前在热带亚热带园林中广为种植，也作为盆景栽
培。始载《四川中药志》，其嫩枝、茎和叶供药用，性寒味
甘，能清小肠湿热、利尿。用于黄疸型肝炎、肾炎、小便
不利、鼻衄［１］。据初步研究，其含有强心苷、酚类、三萜皂
苷等，可作为药用植物进一步研究。石海椒以扦插和分
株繁殖，大面积和产业化栽培受到限制。目前国内外关
于石海椒的报道很少，仅在观赏价值、栽培方法和生物
学特性［２］等方面有报道，而对其组织培养仅古玉等［３］进
行了愈伤组织诱导和增殖研究。该试验旨在前期试验
基础上，研究建立和完善石海椒快速繁育体系的条件，
为利用生物技术实施品种繁育、种苗工厂化生产及有效
成分获取奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
石海椒幼嫩叶片，于６月中旬采至四川雅安老板山
（海拔约５００ｍ）。
１．２ 试验方法
１．２．１ 愈伤组织诱导及增殖 按照试验前期筛选出的
最优愈伤组织培养及增殖条件［３］对幼嫩叶片进行培养，
获得生长良好的愈伤组织。
１．２．２ 不定芽的分化 将生长良好的愈伤组织以 ＭＳ
为基本培养基，附加不同浓度细胞分裂素６－ＢＡ（１．０、
１．５、２．０ｍｇ／Ｌ）和生长素ＮＡＡ（０．３、０．６、０．９ｍｇ／Ｌ），采
用随机区组试验设计。共９个处理，５次重复，每重复２０
个材料。每天观察芽开始分化的时间，２０ｄ时统计分化
成芽的数量，观察芽增殖情况。计算芽分化率。用Ｓｐｓｓ
软件进行方差分析。采用单因素方差分析（Ｏｎｅ－Ｗａｙ
ＡＮＯＶＡ）的ＬＳＤ多重比较法（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）分
析筛选最优配方培养基。芽分化率（％）＝成芽个数／接
种愈伤组织数×１００。
１．２．３ 生根培养 当无菌苗生长到２ｃｍ左右时，将其
转入生根培养基中诱导生根。以１／２ＭＳ为基本培养基，
添加不同浓度生长素ＮＡＡ（１．０、１．５、２．０ｍｇ／Ｌ）或ＩＡＡ
（２．０、３．０、４．０ｍｇ／Ｌ），附加ＶＢ１０．５ｍｇ／Ｌ，于２５℃进行
生根培养。共６个处理，３次重复，每重复１０个材料。
５ｄ后开始观察根分化的时间，１５ｄ时统计生根的数量
及生长情况。计算生根率。用Ｓｐｓｓ软件进行方差分析。
采用单因素方差分析的ＬＳＤ多重比较法进行差异显著
性分析，以筛选最优配方培养基。生根率（％）＝生根无
菌苗数／接种无菌苗数×１００。
１．２．４ 练苗与移栽 当大部分根长达４ｃｍ以上时，将
培养瓶置于温棚中练苗１周，取出生根苗，洗净根部附
着的培养基，移入花卉土中。保持温度２５℃左右、空气
湿度８５％以上和光照强度为７０～１１０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１。
２ 结果与分析
２．１ 不定芽的分化
接种后的４ｄ内，愈伤组织变绿，增大；第８天左右
有小突起，持续到第１４天左右出现小芽孢，第１６天左右
长出微透明的绿色幼芽，幼芽生长缓慢，８ｄ左右生长到
约２ｃｍ（图１）。由表１可知，在６－ＢＡ １．５ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ
０．３ｍｇ／Ｌ，即６－ＢＡ∶ＮＡＡ＝５∶１时芽的分化率最高，达
９２％，极显著高于其它处理组。ＮＡＡ为０．３ｍｇ／Ｌ低浓
度时，６－ＢＡ在１．５ｍｇ／Ｌ达到最高分化率，浓度过高、低
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北方园艺２０１２（０５）：１３０～１３２ ·生物技术·
浓度时都会降低分化率。ＮＡＡ为０．６和０．９ｍｇ／Ｌ中
高浓度时，随着６－ＢＡ浓度增加，分化率升高。根据
６－ＢＡ∶ＮＡＡ的比值，随着比值减小，不定芽分化率呈现
先升高后降低的趋势；故细胞分裂素与生长素的比例过
大或过小都会影响芽的分化。总体来看，６－ＢＡ的浓度对
芽分化的影响较ＮＡＡ大。
表１ 各处理组间芽分化率差异显著性分析
处理
组合
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ∶ＮＡＡ
平均芽分
化率／％
方差齐性
检验
差异显著性
９５％ ９９％
１ １．０ ０．３ １０∶３ ７８．００ Ｓｉｇ．＝０．０６４ ｂ Ｂ
２ １．５ ０．３ ５∶１ ９２．００ Ｓｉｇ．＞０．０５， ａ Ａ
３ ２．０ ０．３ ２０∶３ ７８．００ 差异不显著 ｂ Ｂ
４ １．０ ０．６ ５∶３ ２９．００ ｅ Ｅ
５ １．５ ０．６ ５∶２ ６４．００ ｃ Ｃ
６ ２．０ ０．６ １０∶３ ７９．００ ａｂ Ｂ
７ １．０ ０．９ １０∶９ ９．００ ｆ Ｆ
８ １．５ ０．９ ５∶３ ３０．００ ｅ Ｅ
９ ２．０ ０．９ ２０∶９ ５６．００ ｃｄ Ｄ
２．２ 生根诱导
在接种后６ｄ诱导出透明嫩白色的根，９ｄ时根长
入培养基，此时根长约１．５ｃｍ，根数较多（图２），１５ｄ左
右根长能达到４ｃｍ。石海椒在ＮＡＡ中生根较快，不定
芽生长健壮，在ＩＡＡ中生根相对较慢，且植株生长瘦弱。
由表２可知，ＮＡＡ对石海椒生根诱导效果极显著优于
ＩＡＡ。由表３可知，ＮＡＡ 为１．５ｍｇ／Ｌ时生根率为
９５％，极显著高于其它各处理。ＮＡＡ浓度过高和过低
都不利于生根。ＩＡＡ在２．０～４．０ｍｇ／Ｌ浓度间，浓度与
生根率呈正相关，在４．０ｍｇ／Ｌ时达到６３．３３％。
表２ 激素类型对生根的影响
激素 平均生根率／％ 方差齐性检验 差异显著性
ＮＡＡ ７３．８９ Ｓｉｇ．＝０．５８７＞０．０５， Ｓｉｇ．＝０．００６＜０．０１，
ＩＡＡ ４１．１１ 差异不显著 差异极显著
表３ 各处理组间生根率差异显著性分析
处理 激素
浓度
／ｍｇ·Ｌ－１
平均生根率
／％
方差齐性检验
差异显著性
９５％ ９９％
１ ＮＡＡ １．０ ４５．００ Ｓｉｇ．＝０．６７４， ｄ Ｄ
２ ＮＡＡ １．５ ９５．００ Ｓｉｇ．＞０．０５， ａ Ａ
３ ＮＡＡ ２．０ ８１．６７ 差异不显著 ｂ Ｂ
４ ＩＡＡ ２．０ １６．６７ ｅ Ｅ
５ ＩＡＡ ３．０ ４３．３３ ｄ Ｄ
６ ＩＡＡ ４．０ ６３．３３ ｃ Ｃ
２．３ 无菌苗的驯化与移栽
试管苗移栽到基质中，经历绿色、稍微变黄、再变绿
的过程，到１２ｄ左右长出新叶（图３、４），生根的石海椒组
培苗经过练苗移栽后，１周内不浇水，成活率可达８１％。
移栽２周后可进行正常的水、肥、药等人工管理。
３ 讨论与结论
石海椒为西南地区分布广泛的药用植物，观赏性极
高，全国多有栽培。但对其的研究和开发利用程度不
足，组织快繁的研究为其药理、毒理、栽培的深入研究提
供条件。初次分割愈伤组织时，在无菌滤纸上进行，发
现滤纸吸收大量愈伤组织水分，导致材料接种到培养基
中后极易枯萎。后改用在无菌报纸上分割材料，吸收水
分大大降低，材料未出现枯萎现象，且报纸价格低廉易
得、硬度较大，更好分割材料。不定芽的诱导过程中，有
些未用来做不定根诱导的材料长期生长在不定芽诱导
培养基中，较长一段时间后也长出了根，可能是因为在
芽诱导培养基中细胞分裂素大量被消耗，而生长素消耗
较慢，以至一段时间后生长素的浓度适合诱导出根。也
可能是石海椒幼芽产生的次生代谢产物能诱导生根。
该试验采用幼叶为外植体诱导出愈伤组织，然后分
化出芽、根的方法，此法好处是培养量大，能长期获得材
料，可大大降低生产成本，故工厂化生产时，可考虑用此
法［４］。试管苗要顺利完成从试管内到外界的适应过程，
移栽前的练苗非常重要［５］。练苗能提高试管苗对外界
环境的抵抗力，使其从一个完全封闭的无菌环境中进入
完全开放的环境中间过渡，适宜的练苗过程，能增强植
株的抵抗力，对移栽后的成活至关重要。该试验在移栽
前将封口膜打开２～３ｄ后才将其移栽到灭菌的花卉土
中，以让其慢慢适应外界环境条件。移栽的前２周尽量
保持较高的空气湿度。
根据试验结果石海椒愈伤组织的不定芽诱导最佳
培养条件为ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，无
菌苗不定根诱导的最佳培养条件为１／２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＶＢ１，所有的培养基均附加１．０％的琼
脂，３％的蔗糖，ｐＨ ６．２。培养室温度为（２５±２）℃，光照
强度为７０～１１０μｍｏｌ·ｍ
－２·ｓ－１，光照时间８ｈ／ｄ。
参考文献
［１］ 全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编（下册）［Ｍ］．北京：人民卫
生出版社，１９９６：２３０．
［２］ 彭世逞．野生花卉石海椒的生物学特性观察和栽培［Ｊ］．西昌学院学
报（自然科学版），２００８，２２（２）：１－３．
［３］ 古玉，许强，李龙．石海椒愈伤组织诱导与增殖研究［Ｊ］．北方园艺，
２０１１（９）：１３０－１３４．
［４］ 陈耀峰．植物组织与细胞培养［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００７：５８－６４．
［５］ 张敏，张曙光，孙红绪．重瓣矮牵牛的组织培养和快速繁殖［Ｊ］．植物
生理学通讯，２００３，３９（２）：１４４．
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·生物技术· 北方园艺２０１２（０５）：１３２～１３４
第一作者简介：余丽莹（１９７４－），女，硕士，副研究员，现主要从事药
用植物资源学研究和药用植物保育工作。
基金项目：广西药用植物园青年基金资助项目（桂药基２００８１０）；
广西自然科学基金资助项目（桂科自０４４７０４０）。
收稿日期：２０１１－１２－０５
铁皮石斛幼苗壮苗培养的研究
余 丽 莹１，周 雅 琴１，韦 莹１，余 海 霞１，谭 小 明１，２
（１．广西药用植物园，广西 南宁５３００２３；２．中国医学科学院－北京协和医学院 药用植物研究所药用植物菌根研究室，北京１０００９４）
摘 要：以铁皮石斛无菌幼苗为外植体，研究不同基本培养基、生长激素、天然添加物、蔗糖
浓度和活性炭浓度对幼苗壮苗的影响。结果表明：苗龄４个月的铁皮石斛幼苗最佳的壮苗培养
基为：１／２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０％椰汁＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋２ｇ／Ｌ活性炭＋８ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ ５．８。
关键词：铁皮石斛幼苗；壮苗培养基；椰汁；ＮＡＡ
中图分类号：Ｓ ６８２．３１ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）０５－０１３２－０３
铁皮石斛（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ Ｋｉｍｕｒａ ｅｔ Ｍｉｇｏ）
属兰科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）石斛属（Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ）多年生附生草
本。常生长在海拔达１ ６００ｍ的山坡半阴湿的岩石上，
在我国主要分布云南东南部（石屏、文山、麻粟坡、西畴）、
广西西北部（天峨）和浙江东部（天台、仙居）等地［１］；是
《中国药典》２０１０版收录的铁皮石斛药材的原植物，是石
斛药材中最珍贵的品种，具有滋阴清热、益胃生津的功
效，用于热病津伤、口干烦渴、胃阴不足、食少干呕、病后
虚热不退、阴虚火旺、骨蒸劳热、目暗不明、筋骨痿软［２］。
近年来化学和药理研究表明铁皮石斛中含有丰富的多
糖类成分［３］，这种多糖成分具有增强人体免疫力、防癌
抗癌、恢复嗓音等功效［４－５］。加工后的铁皮石斛俗称为
“铁皮枫斗”［２］，市场价格昂贵，是一种医用价值和经济价
值都很高的名贵中药［６－７］。近年来由于过度采挖、原始
森林生态环境破坏等原因，铁皮石斛野生资源逐年减
少，而其对生境要求苛刻、自身繁殖率低等生理因素，导
致了铁皮石斛濒临灭绝［８］，现已被列入《中国植物红皮
书》［９］。为了保护这一濒危的名贵中药，国内的学者开
展了铁皮石斛的组培快繁、种子萌发及菌根方面的研
究［１０－１３］，取得了一定的进展。但在铁皮石斛幼苗壮苗培
养方面研究得还不够细致，目前铁皮石斛试管苗弱、移
栽成活率低、壮苗周期长还是铁皮石斛大规模生产的障
碍。为此，该试验探讨了基本培养基、生长激素、天然添
加物和蔗糖及活性炭等对铁皮石斛幼苗壮苗的影响。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
铁皮石斛（Ｄ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）蒴果，采自云南西双版纳
（图１左）。将铁皮石斛蒴果用７０％的乙醇消毒１ｍｉｎ，
２．５％次氯酸钠消毒１０ｍｉｎ，无菌水冲洗３次。然后，用
无菌的手术刀切开果皮取出种子，播种在Ｎ６培养基上。
然后在２５℃光暗交替培养４个月，即可获得该研究所需
的无菌幼苗（图１右），幼苗有１～２条根，真叶２～３片。
１．２ 试验方法
１．２．１ 基本培养基对幼苗生长的影响 研究１／２ＭＳ
（大量元素减半）、ＭＳ、Ｂ５、ＫＣ、ＷＴ等５种不同基本培养
基对幼苗生长的影响。分别添加ＮＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ、３０％
椰汁和３０ｇ／Ｌ蔗糖
。
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｒｅｉｎｗａｒｄｔｉａ ｔｒｉｇｙｎａ（Ｒｏｘｂ．）Ｐｌａｎｃｈ．
ＧＵ Ｙｕ，ＬＩ Ｌｏｎｇ，ＸＵ Ｑｉａｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６２５０１４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｔｈ Ｒ．ｔｒｉｇｙｎａａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｈａｔ ｅｆｅｃｔ ｂｙ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ａｕｘｉｎ ｒａｔｉｏ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ，ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ Ｒｅｉｎｗａｒｄｔｉａｔｒｉｇｙｎａ（Ｒｏｘｂ．）Ｐｌａｎｃｈ．ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ．
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒ．ｔｒｉｇｙｎａａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．３
ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ，ａｎｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｗａｓ １／２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＶＢ１．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｒｅｉｎｗａｒｄｔｉａ ｔｒｉｇｙｎａ（Ｒｏｘｂ．）Ｐｌａｎｃｈ．；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ
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