全 文 ：·生物技术· 北方园艺 2011(09):130～ 134
第一作者简介:古玉(1981-),女 ,四川成都人, 硕士,实验师 ,现主
要从事药用植物资源开发利用研究工作。
基金项目:四川农业大学教学质量推进计划资助项目。
收稿日期:2011-02-14
石海椒愈伤组织诱导与增殖研究
古 　玉 , 许 　强 , 李 　龙
(四川农业大学生命科学与理学院 ,四川雅安 625014)
　　摘　要:对石海椒幼嫩叶片和茎段进行了愈伤组织的诱导增殖研究 ,以期探寻其诱导和增殖
的最佳条件。结果表明:石海椒的叶片和茎段都能诱导出愈伤组织 ,但最佳外植体为叶片 ,叶片
和茎段在 0.1%升汞中适合消毒时间为6 min和 10 min。叶片最适诱导培养基为 B5 +0.6 mg/ L
6-BA+2.0 mg/L NAA ,增殖培养基为 B5 +0.6 mg/L 6-BA+1.25 mg/L NAA。基本培养基和生
长调节剂对愈伤诱导的影响是 NAA>6-BA>基本培养基。
关键词:石海椒;愈伤组织;诱导条件;增殖条件
中图分类号:S 567.79 　文献标识码:A 　文章编号:1001-0009(2011)09-0130-05
　　石海椒(Reinwardtia trigyna(Roxb.)Planch.)为
亚麻科石海椒属多年生常绿半灌木 ,别名金雀梅 、黄亚
麻、迎春柳。在我国分布于西南 ,喜生于石灰岩形成的
土壤 ,常见于路旁 、山坡 、岩石或沟边[ 1] 。因其叶片四季
常青 、花数多 、花期长 、花色金黄典雅 、香气淡雅 、观赏性
极高 ,目前在热带亚热带园林中广为种植[ 2] ,也作为盆
景栽培[ 3] 。其嫩枝 、茎和叶供药用 ,性寒味甘 ,能清小肠
湿热 、利尿。用于黄疸型肝炎 ,肾炎 ,小便不利 ,鼻衄[ 1] 。
据初步研究 ,其含有强心苷 、酚类 、三萜皂苷等 ,可作为
药用植物进一步研究。石海椒以扦插和分株繁殖为主 ,
大面积和产业化栽培受到限制。亚麻科植物的组织培
养研究开展的很多 ,但都是关于用作纤维作物的苎麻 、
亚麻 、黄麻 、红麻等[ 4] 。石海椒分属于石海椒属 ,极具药
用及观赏价值的物种 ,和作为纤维作物的麻类有很大差
异。目前国内外关于石海椒的报道很少 ,仅在观赏价
值、栽培方法和生物学特性[ 5] 等方面有报道 ,而对其组
织培养研究尚未见报道。该试验旨在利用组培方法筛
选出对石海椒愈伤组织诱导最佳的培养方案 ,为下一步
建立和完善石海椒快速繁育体系 ,利用生物技术实施品
种繁育 、种苗工厂化生产及有效成分获取奠定基础。
1 　材料与方法
1.1　试验材料
石海椒幼嫩叶片和嫩茎 ,于 6月中旬采至四川雅安
老板山(海拔约 500 m)。
1.2　试验方法
1.2.1　外植体消毒条件筛选 　于试验前到野外取回
新鲜的材料 ,将茎自顶芽而下剪取1 ～ 2 cm(至少带 3片
叶)用清水冲洗干净 ,分割成小块后用无菌水冲洗 3遍 ,
75%的酒精消毒 30 s ,0.1%升汞浸泡叶片(3、6 、9 min)、
茎段(8、10、12 min),再用无菌水冲洗 3 ～ 5次。将灭菌
材料切割成约0.2 mm×0.2 mm小叶片块和1 cm左右
茎段 ,接种于MS培养基中。共 6个处理 ,5次重复 ,每重
复接种20个材料。15 d后统计外植体污染率和死亡率。
污染率(%)=被污染个数/接种个数×100;死亡率(%)=
死亡个数/接种个数 ×100。试验中所有培养基均添加
3%蔗糖和 1%琼脂粉 ,调节 pH 5.8。用常规方法配制分
装灭菌后备用。所有培养条件都是温度(25±1)℃,光照
强度30～ 40μmol·m2·s-1 ,光照时间 12 h/d。
1.2.2　培养基及激素浓度筛选　以筛选出的最佳表面
消毒方式进行愈伤组织诱导试验。试验以幼嫩叶片为
外植体 ,选取了 MS 、B5 2种基本培养基 ,附加细胞分裂
素 6-BA(0 、0.2 、0.6 、1.0 mg/ L)、生长素 NAA(0 、0.5、
1.25 、2.0 mg/L),进行随机区组试验。共设32个处理 ,5
次重复 ,每重复接种5瓶 ,每瓶接种4个材料。28 d后统
计长出的愈伤组织数量 ,观察各种愈伤组织质地 、颜色、
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北方园艺 2011(09):130 ～ 134 ·生物技术 ·
生长势。计算愈伤组织诱导率。用 Spss统计分析软件
进行方差分析。其中 ,基本培养基筛选的统计采用配对
样本 t检验(Paired-Samples T Test)进行差异显著性分
析。最优配方培养基筛选采用单因素方差分析的多重
比较法和多元线性回归分析进行。诱导率(%)=长出
愈伤组织个数/接种外植体数×100。
1.2.3 　外植体筛选 　以幼嫩叶片和茎段为外植体 ,表
面消毒处理后接种到筛选出的最佳激素浓度培养基上
进行愈伤组织诱导。共设 2个处理 ,5次重复 ,每重复接
种20个材料。28 d时观察各种愈伤组织质地 、颜色 、生
长势。计算诱导率 ,用 Spss统计分析软件进行方差
分析。
1.2.4　愈伤组织增殖继代培养 　将培养条件筛选试
验中外植体诱导出的长势良好 、诱导率高的愈伤组织 ,
于生长旺盛期分割后接种于愈伤组织的原始培养基中
进行愈伤组织的增殖培养。
2 　结果与分析
2.1 　外植体消毒时间筛选
将2种外植体进行不同的表面消毒时间处理 ,得到
污染率和死亡率。由表 1可知 ,叶片和茎段在 0.1%升
汞中的消毒时间长短对其污染和死亡情况影响很大 , 2
种外植体各处理间的污染率和死亡率均达到极显著差
异。随着消毒时间的延长 ,污染率降低 ,死亡率增高。
每种处理都不能达到外植体既无污染又无死亡的理想
状态。综合考虑污染和死亡情况 ,该试验筛选叶片的较
优消毒时间为 6 min ,茎段为 10 min。
　表 1　不同消毒条件下外植体的污染率和死亡率
外植体 消毒时间/ min
污染率
/ %
死亡率
/ %
99%水平多重比较
污染率 死亡率
叶片 3 88.0 9.0 A C
6 29.0 31.0 B B
9 9.0 80.0 C A
茎段 8 75.0 95.0 A A
10 37.0 34.0 B C
12 12.0 76.0 C B
2.2　基本培养基筛选
将叶片接种在以MS和 B5 并附加一定浓度激素的
培养基中进行愈伤组织诱导培养 ,28 d后将所得数据进
行配对样本 t检验 ,计算 2种基本培养基对诱导率的影
响 ,结果见表 2。MS 和 B5 培养基相比较 ,B5 培养基更
有利于愈伤组织的诱导 ,其各激素水平下的平均诱导率
分别为 32.75%和27.31%, t检验得到 Sig.(2-tailed)=
0.006 ,P<0.01 ,故二者的差异达极显著水平。外植体
在 2种培养基上出愈时间相差较小。基本培养基对外
植体长出愈伤组织时间影响不大。故后继愈伤组织诱
导试验中选择B5 为基本培养基。
　　表 2 基本培养基对愈伤组织诱导的影响
基本培
养基
平均诱
导率/ %
配对样本 T 检验
标准差
均数
标准误 t 自由度
双尾显
著性
平均出愈
时间/d
MS 27.31 17.342 1.939 -2.804 79 0.006 9～ 11
B5 32.75 10～ 12
2.3　培养基 、6-BA和 NAA对愈伤组织诱导的影响
将 28 d时得到的愈伤组织诱导率进行多元线性回
归分析 ,分析培养基种类 、生长素和细胞分裂素对诱导
率影响 ,结果见表 3。标准化后的多元回归方程 Y =
0.09X1 +0.463X2 +0.666X3 -3.848(P <0.01)(R=
0.816 ,调整 R2 =0.660 ,标准误=17.594)(其中 X1 代表
MS或B5 培养基;X2代表 6-BA;X3 代表 NAA)。
表3　不同培养条件诱导愈伤组织结果的方差分析
模型 平方和 自由度 均方 F Sig.
回归 96 434.097 3 32 144.699 103.841 0.000
剩余 48 290.747 156 309.556
总计 144 724.8 159
　　根据方差分析 P<0.01 ,方程存在极显著差异 ,故基
本培养基与6-BA 、NAA间存在真实的直线回归关系 ,3
个因素对诱导率的影响是 NAA>6-BA>培养基 ,在试
验浓度内调整NAA的浓度能最快改变诱导率。
2.4　最优配方培养基筛选
基本培养基 、生长素和细胞分裂素作为 1个组合 ,
对得到的愈伤组织诱导率进行多重比较分析 ,以筛选最
优组合作为愈伤诱导的培养条件 ,结果见表 4。
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·生物技术· 北方园艺 2011(09):130～ 134
　　表 4 不同培养基诱导愈伤组织结果
处理
基本培
养基
6-BA 浓度
/ mg·L-1
NAA 浓度
/mg·L-1 诱导率/ %
诱导率差异
显著性(95%) 愈伤组织生长状态
12 MS 0.6 2 99 a 长势好 ,淡黄绿色 ,瘤状 ,致密
32 B5 1 2 90 ab 长势好 ,乳白色 ,瘤状,致密
31 B5 1 1.25 89 b 长势好 ,淡黄绿色 ,块状 ,致密
11 MS 0.6 1.25 73 c 长势较好 ,淡黄色 ,瘤状 ,致密
28 B5 0.6 2 69 cd 长势较好 ,淡黄色 ,瘤状 ,致密
27 B5 0.6 1.25 65 cd 长势较好 ,淡黄色 ,瘤状 ,致密
15 MS 1 1.25 60 d 长势较好 ,淡黄色 ,瘤状 ,致密
16 MS 1 2 60 d 长势较好 ,黄褐色 ,颗粒状,致密
24 B5 0.2 2 42 e 长势较好 ,黄褐色 ,颗粒状,致密
8 MS 0.2 2 36 e 长势好 ,淡黄绿色 ,瘤状 ,致密
26 B5 0.6 0.5 35 e 长势较好 ,淡黄色 ,颗粒状,致密
23 B5 0.2 1.25 34 e 长势较好 ,黄褐色 ,颗粒状,致密
14 MS 1 0.5 23 f 长势好 ,淡黄绿色 ,瘤状 ,致密
30 B5 1 0.5 23 f 长势较好 ,黄褐色 ,颗粒状,致密
7 MS 0.2 1.25 22 f 长势一般 ,淡黄色 ,瘤状 ,致密
20 B5 0 2 20 fg 长势一般 ,乳白色 ,颗粒状,疏松
22 B5 0.2 0.5 20 fg 长势一般 ,淡黄色 ,颗粒状,疏松
6 MS 0.2 0.5 18 fg 长势一般 ,乳白色 ,颗粒状,疏松
19 B5 0 1.25 15 fg 长势一般 ,淡黄色 ,颗粒状,致密
10 MS 0.6 0.5 14 fg 长势一般 ,淡黄色 ,颗粒状,致密
18 B5 0 0.5 12 g 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
4 MS 0 2 10 g 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
3 MS 0 1.25 9 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
2 MS 0 0.5 7 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
29 B5 1 0 4 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
9 MS 0.6 0 3 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
13 MS 1 0 3 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
21 B5 0.2 0 3 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
25 B5 0.6 0 3 gh 长势差 ,黄褐色 ,颗粒状 ,疏松
1 MS 0 0 0 h 无
5 MS 0.2 0 0 h 无
17 B5 0 0 0 h 无
　　从差异显著性多重比较结果可知 ,处理 12和32的
诱导效果最好 ,诱导率达 90%以上 ,愈伤组织的生长状
态好 ,且二者间没有显著差异。处理31的效果也好 ,诱
导率达 89%,但与处理 12相比 ,差异达显著水平。且高
浓度的 NAA有利于愈伤组织的诱导。故后面试验中筛
选高浓度的 NAA和中高浓度的 6-BA都能较好的诱导
愈伤组织。
2.5　外植体类型筛选
以叶片和茎段为外植体 ,按照较优消毒时间消毒
后 ,接种在筛选出的最优培养基上培养 18 d后 ,观察愈
伤组织生长状态 ,对所得数据进行方差分析 ,所得结果
见表 5 、6。叶片和茎段作为外植体对诱导率影响大 ,其
平均诱导率分别为 89%和 78%,差异达极显著水平
(Sig.=0.008 ,P<0.01),叶片的诱导率极显著高于茎段
诱导率 ,故对石海椒而言 ,选叶片作为外植体更好。
　　表 5 不同外植体诱导愈伤组织结果
外植体
平均诱导
率/ %
平均出愈
时间/ d 愈伤组织状态
叶片 89 9～ 11 长势好 ,淡黄绿色 ,瘤状 ,致密
茎段 78 12～ 13 长势好 ,乳白色 ,瘤状,致密
　　表 6 外植体筛选方差分析
平方和 自由度 平均方 F Sig.
组间 302.5 1 302.5 12.1 0.008
组内 200.0 8 25.0
总变异 502.5
2.6　愈伤组织增殖培养
因以上试验中得出以叶片为外植体诱导愈伤组织
效果好 ,这和培养条件筛选中选用的外植体一致。故将
培养条件筛选中诱导率在 60%以上长势好的愈伤组织
于 28 d时转接到原培养基上进行继带增殖培养。以验
证其诱导愈伤的良好可靠性 ,筛选出了 11、12、15、16、27、
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北方园艺 2011(09):130 ～ 134 ·生物技术 ·
　　表 7 愈伤组织继代增殖培养结果
处理 愈伤组织生长状态
11 生长快,长势好,呈白淡黄绿色 ,块状,紧实型
12 生长慢,长势较好 ,呈黄褐色,颗粒状,紧实型
15 生长较快 ,长势较好 ,呈白淡黄色 ,颗粒状 ,紧实型
16 生长很慢 ,长势一般 ,呈淡黄色 ,块状,紧实型
27 生长迅速 ,长势好 ,呈白淡黄绿色 ,块状 ,紧实型
28 生长慢,长势较好 ,呈黄褐色,颗粒状,紧实型
31 生长较快 ,长势较好 ,呈白淡黄色 ,块状 ,紧实型
32 生长很慢 ,长势一般 ,呈淡黄色 ,颗粒状 ,紧实型
28 、31 、32共 8个组。
　　在愈伤组织继代增殖培养中 ,基本培养基为 MS和
B5 ,6-BA 浓度为 0.6 和 1.0 mg/L , NAA 为 1.25和
2.0 mg/L ,比较愈伤组织生长状态 ,可以发现 ,基本培养
基和 6-BA对其没有影响 ,在 2种培养基细胞分裂素 2
个浓度中愈伤组织的生长都是有快有慢 ,长势有好有一
般的 ,颜色也都有出现黄褐色的 ,质地也都有块状和颗
粒状的。而比较NAA 2个浓度处理中的愈伤组织生长
状态 ,发现在1.25 mg/ L中愈伤组织生长速度 、长势 、颜
色和质地都优于2.0 mg/L的浓度。故继代增殖培养中
应该考虑 NAA的浓度。筛选出的继代增殖基本培养基
为MS或B5 ,细胞分裂素为 0.6 mg/L 或 1.0 mg/ L的
6-BA ,生长素为 1.25 mg/L NAA。
3　讨论
愈伤组织的形成是由表面消毒方式 、外植体 、生长
调节剂 、培养基和培养条件等各要素相互作用的复杂
过程[ 6] 。
3.1　表面消毒条件对愈伤组织诱导的影响
外植体表面消毒的好坏是愈伤组织能否形成的先
决条件 ,表面消毒要求做到既要杀灭表面微生物又要不
损害植物内部细胞 ,消毒剂的种类和消毒时间对其都有
影响。在该试验中采用低浓度的升汞作为表面消毒剂 ,
但因升汞毒性大 、对环境污染严重 ,在发达国家已禁止
使用 ,故在以后试验中应考虑用次氯酸钠等其它毒性较
小的消毒剂代替。随着在升汞中浸泡时间的延长 ,外植
体的污染率降低 ,死亡率升高 ,这符合一般常识。对不
同外植体 ,消毒时间不一样 ,对石海椒的幼嫩叶片和茎
段而言 ,在升汞中 6 min和 10 min的时间较适宜 ,但仍
未达到完全无污染 、无死亡的理想条件 ,这有待以后试
验中继续进行探索。
3.2　不同外植体对愈伤组织诱导的影响
能用于愈伤组织培养的材料来源广泛 ,理论上来说
凡是能从植物组织抑制性下脱分化出来后具有再分化
能力的组织都可以作为外植体。但实际应用中 ,要考虑
组织脱分化和获取的难易程度。该试验中因在 6月中
旬取材 ,开花结实期已过 ,获取幼嫩叶片和茎段最容易。
从试验结果来看 ,叶片和茎段都是理想的外植体材料 ,
其在 B5 +0.6 mg/L 6-BA+2.0 mg/ L NAA培养基中诱
导率分别为 89%和78%,诱导率高 ,相比较而言 ,叶片的
诱导效果显著好于茎段的诱导效果 ,且越靠近叶柄和叶
脉处越容易形成愈伤组织。
3.3　培养基对愈伤组织诱导的影响
培养基的种类和生长调节剂种类及其配比在组织
培养中起重要作用。尤其生长调节剂是调控愈伤组织
形成的关键因素[ 7] 。
在该试验中 ,就常用于愈伤组织诱导的 2种培养基
MS和B5 而言 ,在其它条件完全相同时 ,B5 的平均诱导
率比 MS的平均诱导率高5.43%,差异极显著。故试验
中选择 B5 作为基本培养基。该研究表明 ,不同浓度激
素对愈伤诱导有明显不同。因考虑到 2 ,4-D对愈伤组
织分化成苗有毒害作用 ,故试验中选用 NAA为生长素 ,
6-BA为细胞分裂素。从试验结果看 ,高浓度的 NAA有
利于愈伤诱导 , 2.0 mg/L 的 NAA 诱导效果明显好于
1.25 mg/ L时。而 6-BA 在中浓度时效果都较好 ,
0.6 mg/L 和 1.0 mg/ L 时都能很好诱导出愈伤组织。
考虑到成本及低碳环保因素 ,选择0.6 mg/ L的6-BA更
好。就基本培养基 、NAA 和 6-BA而言 ,三者对愈伤组
织诱导的影响依次为NAA>6-BA>基本培养基。在石
海椒愈伤组织诱导时 ,应着重考虑NAA的浓度。
3.4　培养基对愈伤组织增殖培养
愈伤组织的增殖和多种因素有关 ,光照 、pH 、培养
温度 、培养基的种类和生长调节剂都是影响因子。在该
试验中 ,着重考虑了培养基对其增殖的影响 ,至于培养
条件的影响有待进一步研究。从试验中可以看出 ,诱导
效果好的培养基组合 ,同样适用于愈伤的增殖。但是高
浓度的 NAA会加速愈伤组织的老化 ,1.25 mg/ L NAA
对愈伤组织的增殖效果较好。
4 　结论
石海椒的叶片和茎段都能诱导出愈伤组织 ,但最佳
外植体为叶片 ,叶片和茎段在 0.1%升汞中适合消毒时
间为 6 min和10 min。叶片最适诱导为 B5 +0.6 mg/ L
6-BA+2.0 mg/L NAA。增殖培养基 B5 +0.6 mg/ L
6-BA+1.25 mg/ L NAA 。基本培养基和生长调节剂对
愈伤诱导的影响是NAA>6-BA>基本培养基。
参考文献
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Study on Callus Induction and Proliferatation
of Reinwardtia trigyna(Roxb.)Planch
GU Yu , XU Qiang , LI Long
(College of Biology and Science, Sichuan Agricultural University , Yaan , Sichuan 625014)
Abstract:The leaves and stems of Reinwardtia trigyna(Roxb.)Planch were used as explants to study the callus
induction and proliferation , in order to explore the optimum conditions of in duction and proliferation.The results
indicated that both leaves and stems could induce callus ,but the best explant was leaf.The suitable sterilization time for
leaves and stems with 0.1%mercury bichloride were 6 min and 10 min.The optimal induction medium for leaf were
B5 +0.6 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA , and proliferation medium were B5 +0.6 mg/L 6-BA+1.25 mg/ L NAA.Impact
on callus induction were NAA>6-BA>basic medium.
Keywords:Reinwardtia trigyna(Roxb.)Planch;callus;induction condition;proliferation condition
第一作者简介:李国树(1969-),男 ,彝族, 云南永仁人 ,高级讲师 ,
现从事植物学及植物资源开发与利用研究工作。 E-mail:hsxlgs
@cxtc.edu.cn。
基金项目:楚雄师范学院学术后备人才资助项目(08YJRC22);云
南省植物学重点学科建设资助项目(05YJJSXK03);云南省应用基
础研究计划资助项目(2008CD218);云南省中青年学术技术带头
人后备人才计划资助项目(2006PY01-61)。
收稿日期:2011-01-18
葡萄组织培养快速繁殖体系研究
李国树 , 邱 　璐 , 徐成东 , 范 树国
(楚雄师范学院化学与生命科学系,滇中高原生物资源开发与利用研究所 ,云南楚雄 675000)
　　摘　要:以葡萄茎尖 、茎段 、叶柄 、根尖为外植体 ,对葡萄外植体的选择 、愈伤诱导、茎叶分化
苗、不定根诱导及试管苗的练苗移栽过程进行研究。结果表明:外植体以茎尖为最佳 ,茎尖愈伤
诱导最适培养基:l/2MS+6-BA 1.0 mg/ L+IBA 0.10mg/L ,诱导率达95%;茎叶分化以1/2MS+
6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.10 mg/ L ,分化率达 100%;生根培养以 1/2MS+IBA 1.0 mg/L为佳 ,生
根率达 90.3% 。
关键词:葡萄;组织培养;快速繁殖
中图分类号:S 663.103.6 　文献标识码:B　文章编号:1001-0009(2011)09-0134-03
　　葡萄是葡萄科(Vitacvae)葡萄属(Vitis)多年落叶藤
本植物 ,因其栽培品种多 、适应性强 、果实营养丰富 ,广
泛用于鲜食 、酿酒和加工制作葡萄干、葡萄汁等食品而
成为在全国各地广泛栽培的主要果树之一。
生产上葡萄育苗主要采用扦插繁殖 ,但长期采用扦
插繁殖 ,容易导致品种退化 、尤其在南方多雨地区 ,扦插
苗易受病虫感染影响苗木质量。植物织培养[ 1] 就是将
植物体的组织 、器宫 、细胞应用无菌操作 ,使其在人工条
件下能够继续生长 ,甚至分化发育成一完整的植物的过
程。植物组织培养技术可用于新品种的快速繁殖 ,不受
季节 、地区 、气候 、病虫等因素影响 ,可周年进行生产 ,因
此 ,该试验从葡萄组织培养的外植体选择 、愈伤组织 、茎
叶分化 、不定根诱导优化及试管苗的练苗移栽过程进行
研究 ,系统研究葡萄组织培养快速繁殖体系 ,为葡萄组
培快速繁殖和大规模工厂化育苗体系提供参考。
1　材料与方法
1.1　试验材料
葡萄茎尖 、茎段 、叶柄 、根尖 4种外植体材料取自楚
雄州果园葡萄生产园。
1.2　试验方法
1.2.1　外植体处理　供试材料带回实验室后 ,将材料切
成长 3～ 5 cm的节段 ,用洗涤剂泡洗 5 min后 ,再用无菌
水冲洗 5～ 6次 ,转至超净工作台上用 70%的消毒酒精
消毒 10 s ,迅速倒出酒精 ,用无菌水清洗3 ～ 5次 ,滤干水
分后用 0.1%HgCl2消毒 4 min后再用无菌水清洗 8 ～
10次。用消过毒的剪刀剪段 ,除去两端伤口 ,长约在
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