全 文 ：本地早蜜桔成年态茎段无菌再生诱导试验初报
罗君琴 李 丽 聂振朋 孙建华 柯甫志 徐建国
（浙江省柑桔研究所，台州市黄岩大桥路 11号 318020）
摘 要：本文以本地早蜜桔成年态茎段为外植体，采用正交设计试验，研究不同消毒处理、培养基植物生长调
节剂添加种类及浓度等因子对柑桔成年态茎段试管内无菌再生诱导的影响。试验结果表明，10%次氯酸钠
15min+70%乙醇 30s+0.1%升汞 7min 适用本地早蜜桔成年态茎段外植体无菌消毒处理，MS+BA0.5+IAA0.
05+GA0.5培养基配方适用于本地早蜜桔成年态茎段外植体试管内离体诱导。
关键词：本地早；成年态茎段；无菌诱导
50s；0.1%升汞对应的 1、2、3 水平分别为 3 min、
5min、7min；10%次氯酸钠对应的 1、2、3水平分别
为 5min、10min、15min。每个组合处理接种 30个
茎段，重复 2次。外植体茎段每次消毒处理完毕，
无菌水冲洗 3~4次。接种后 10d记录不同处理培
养瓶内接种外植体无菌成活情况。
1.2.2 植物生长调节剂对本地早蜜桔成年态茎段
外植体诱导分化的影响试验。利用正交设计试验，
初步确定不同植物生长调节剂种类及浓度对本地
早蜜桔成年态茎段外植体诱导分化的影响。试验
设 3个影响因子，分别为 6- BA、IAA和 GA。每个
因子 3 个水平，6- BA 对应的 3 个水平分别为
0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L；IAA 对应的 3 个水平
分别为 0mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l；GA对应的 3个水
平分别为 0mg/L、0.5mg/L、1.0 mg/L。每个组合处理
接种 20个茎段，重复 2次。接种培养 2周后，观察
记录本地早蜜桔成年态茎段外植体再生芽诱导分
化情况，记录分析激素对成年态茎段外植体再生
诱导的影响。
2 结果与分析
2.1 不同消毒处理对本地早蜜桔成年态茎段外
植体无菌培养的影响试验
各处理消毒处理 10d后，记录分析不同处理
培养瓶内接种外植体无菌成活率，结果如表 1、表
2所示。从表 1的极差分析结果中不难看出，试验
中 3种消毒剂对本地早蜜桔成年态茎段外植体无
菌培养成活的影响主次依次为：10%次氯酸钠＞
70%乙醇＞0.1%升汞。通过表 2进一步深入分析，
可知次氯酸钠对本地早蜜桔成年态茎段外植体无
菌培养成活的影响达 0.05显著水平。综合表 1、表
2正交试验结果直观分析与方差分析，本地早蜜
桔成年态茎段无菌培养外植体消毒处理组合可选
在柑桔茎尖微芽嫁接及微茎尖组培脱毒过程
中，通常采用大田柑桔嫩枝茎尖作为微茎尖嫁接
接穗及茎尖组织培养外植体，但这两种脱毒方法，
常会因田间茎尖取材受季节限制问题，影响脱毒
周期。本试验尝试利用柑桔成年态茎段再生诱导
芽提供茎尖材料，克服田间茎尖取材受季节限制
问题。试验选用本地早蜜桔成年态茎段为研究对
象，利用正交设计法试验，研究不同消毒处理、培
养基植物生长调节剂添加种类及浓度等因子对柑
桔成年态茎段试管内无菌再生芽诱导分化的影
响，以期在较短的时间内，能快速明确各试验因子
对柑桔成年态茎段再生诱导的影响大小，为进一
步优化柑桔脱毒技术规程提供一定的技术依据。
1 材料与方法
1.1 材料
试验所用的成年态茎段外植体，取自浙江省
柑桔研究所本部试验园中 7~8年生本地早蜜桔健
壮母株当年抽生的半木质化枝梢。
1.2 试验设计
选晴好天气，采集本地早蜜桔半木质化、长短
较一致的新生枝梢，剪成 1~1.5cm长的带芽枝段，
洗洁液清洗，清水冲洗 30分钟左右，实验室备用。
基本培养基：MS培养基，蔗糖 25g/L，pH值
5.6~5.8。
培养条件：25℃±2℃温度，光照 12h/d，光强
2000~2500lux。
1.2.1 不同消毒处理对本地早蜜桔成年态茎段外
植体无菌培养的影响试验。利用正交试验设计，筛
选适合柑桔茎段的消毒剂种类和相应的消毒处理
时间。试验设 3个影响因子，分别为 70%乙醇、
0.1%升汞和 10%次氯酸钠溶液。每个因子 3个水
平，70%乙醇对应的 1、2、3 水平分别为 10s、30s、
2011年第 1期 现代园艺 试验研究
③
DOI:10.14051/j.cnki.xdyy.2011.01.009
观察比较各处理培养基对外植体茎段再生诱导的
影响，结果如表 3、表 4所示。分析表 3可以得知，
6- BA、IAA、GA三种植物生长调节剂对本地早蜜
桔成年态茎段外植体诱导分化的影响主次依次
为：6- BA＞IAA＞GA。从表 4对试验结果数据方
差分析中，可知 6- BA、IAA、GA三个试验影响因
子对本地早蜜桔成年态茎段外植体诱导影响未达
显著水平。结合直观分析，可以获知本次试验组合
中，组合 MS+6- BA0.5+ IAA0.05+GA0.5最有利于
本地早蜜桔成年态茎段外植体诱导分化再生芽。
用 10%次氯酸钠 15min+70%乙醇 30s+0.1%升汞
7min，其中次氯酸钠是首选的消毒处理剂。
2.2 植物生长调节剂对本地早蜜桔成年态茎段
外植体诱导分化的影响试验
本地早蜜桔成年态茎段外植体接种 2周后，
3 小结
本地早蜜桔是优良的地方特色柑桔品种，其
成年态茎段无菌再生诱导技术未见相关报导，直
接可以借鉴的技术参数相对较少。与此同时，影响
柑桔成年态茎段无菌再生诱导的技术因子相对较
多。利用正交试验，筛选茎段外植体消毒处理及无
菌再生诱导培养基，可快速建立本地早蜜桔成年
态茎段无菌再生诱导基本技术流程，不失为一种
简单、有效的多因子筛选技术手段。
本试验通过正交试验结果分析，初步明确
70%乙醇、0.1%升汞和 10%次氯酸钠三种消毒剂
对本地早蜜桔成年态茎段无菌培养成活的影响大
小依次为：10%次氯酸钠＞70%乙醇＞0.1%升汞，
明确 6- BA、IAA、GA三种植物生长调节剂对本地
早蜜桔成年态茎段诱导分化的影响大小依次为：
6- BA＞IAA＞GA。筛选获得本地早蜜桔成年态茎
段无菌培养外植体消毒处理适用组合 1个：10%
次氯酸钠 15min+70%乙醇 30s+0.1%升汞 7min，
成年态茎段无菌再生诱导适用培养基配方 1个：
MS+6- BA0.5+IAA0.05+GA0.5。为尝试利用柑桔成
年态茎段无菌诱导芽提供茎尖微芽嫁接接穗及微
茎尖脱毒培养外植体材料，克服田间茎尖取材受
季节限制问题提供了一定的技术基础。
（收稿：2010- 09- 26）
基金项目：台州市科技项目(091KY02- 23- 27)
作者简介：罗君琴(1972- )，女，浙江台州人，助理研究员，
主要从事园艺植物组培工作。
试验研究 现代园艺 2011年第 1期
表 1不同消毒处理对本地早蜜桔成年态茎段无菌培养影响正交试验
处理 70%乙醇 s 0.1%升汞 min 10%次氯酸钠 min 成活率%
1 10 3 5 0
2 10 5 10 50
3 10 7 15 78
4 30 3 10 62
5 30 5 15 95
6 30 7 5 50
7 50 3 15 72
8 50 5 5 38
9 50 7 10 62
T1 128 134 88 507
T2 207 183 174
T3 172 190 245
X1 42.667 44.667 29.333
X2 69.000 61.000 58.000
X3 57.333 63.333 81.667
R极差 26.333 18.667 52.333
表 2不同消毒处理对本地早蜜桔成年态茎段无菌培养试验方差分析
变异来源 自由度 平方和 均方 F F0.05 F0.01
70%乙醇 2 1044.667 522.333 13.39 19.00 99.00
0.1%升汞 2 620.667 310.333 7.96 19.00 99.00
10%次氯酸钠 2 4120.667 2060.333 52.83 * 19.00 99.00
试验误差 2 78.000 39.0000
总计 8 5864.000
注：*表示在 0.05水平上差异显著
表 3生长调节剂对本地早蜜桔成年态茎段无菌培养影响正交试验
处理 6- BA(mg/l) IAA(mg/l) GA(mg/l) 出芽率%
1 0.1 0 0 48
2 0.1 0.05 0.5 65
3 0.1 0.1 1 33
4 0.5 0 0.5 63
5 0.5 0.05 1 80
6 0.5 0.1 0 75
7 1 0 1 63
8 1 0.05 0 70
9 1 0.1 0.5 73
T1 146 174 193 570
T2 218 215 201
T3 206 181 176
X1 48.667 58.000 64.333
X2 72.667 71.667 67.000
X3 68.667 60.333 58.667
R极差 24.000 13.667 8.333
表 4 生长调节剂对本地早蜜桔成年态茎段无菌培养试验方差分析
变异来源 自由度 平方和 均方 F F0.05 F0.01
6- BA(mg/l) 2 992.000 496.000 3.44 19.00 99.00
IAA(mg/l) 2 320.667 160.333 1.11 19.00 99.00
GA(mg/l) 2 108.667 54.333 0.38 19.00 99.00
试验误差 2 288.667 144.333
总计 8 1710.000
④