全 文 ：— 31 —现代中药研究与实践2014年第28卷第1期Chin Med J Res Prac,2014 Feb.Vol.28 No.1
收稿日期：2013-09-11
基金项目：浙江省大学生科技创新项目（项目编号201009）
作者简介：许玲玲（1980- ），女，硕士，讲师；研究方向：中药新药开
发及研究；E-mail:xlinglingxl@sina.com。
*通讯作者：杨晓东（1963- ），男，理学学士，教授；研究方向：天
然产物化学研究；Tel：0579-82265089，E-mail:jhyxd@163.
白鲜皮提取物抑制皮肤癣菌活性研究
许玲玲，杨晓东 *，李群力，高素华，马秋萍
（金华职业技术学院医学院，浙江 金华 321017）
摘　要：目的 探究白鲜皮抑制皮肤癣菌活性最强的有效部位，为开发白鲜皮奠定基础。方法　采用
抑菌环法比较白鲜皮不同提取物的抑菌活性强弱，并用HPLC法比较了提取物中白鲜碱的含量。结果　白
鲜皮醇提取物的抑菌活性强于水提取物；与 60% 乙醇提取物、30% 乙醇提取物相比，95% 醇提取物抑菌活
性最强，其所含白鲜碱的含量最高。结论　白鲜皮 95% 醇提取物有明显地抑制癣菌作用，其抑菌活性可能
与其所含的主要成分白鲜碱等成分有关。
关键词：白鲜皮；抑菌；白鲜碱；含量
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2014)01-0031-04
Research on Antifungal Activity of the Extraction
from Dictamnus dasycarpus
XU Ling-ling, YANG Xiao-dong, LI Qun-li , GAO Su-hua, MA Qiu-ping
（Medical College, Jinhua Profession and Technology College, Jinhua 321007,China ）
Abstract: Objective To provide the basis for exploring Dictamnus dasycarpus, the antifungal activity of
the different extracts were researched. Methods The antifungal activity of the different extracts was compared
through bacteriostatic circle test. The content of dictamine was determined by HPLC. Results The antifungal
activity of the alcohol extract was stronger than the water extraction. Compared with 60%、30% alcohol
ethanol extraction , the antibacterial activity of the 95% alcohol extraction was the strongest , and the content
of dictamnine was the highest. Conclution The 95% alcohol extraction has signifi cant anti-fungal effect. The
antifungal activity was possibly related to dictamine which was the main constituent in Dictamnus dasycarpus.
Key words: Dictamnus dasycarpus; Antifungal Activity; dictamine; content
白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜Dictamnus
dasycarpus Turcz. 的干燥根皮，味苦、寒，清热解毒，
除湿止痒，有内达关节外行皮肤之功效。常用于足
癣、疥癣、荨麻疹、湿疹、扁平疣、风热疮毒、神经
性皮炎等慢性顽固性皮肤病的治疗 [1]。白鲜碱为白鲜
皮的特征性成分 [2]。足癣是一种常见皮肤病 [3]，白鲜
皮治疗足癣有很好的疗效，是中医临床治疗皮肤病的
常用中药 [4]。据研究，红色毛癣菌是引起手足癣、甲
癣最多见的一种癣菌，其次为石膏样毛癣菌、须癣毛
癣菌及絮状表皮癣菌 [5]。
为了探究白鲜皮治疗足癣的药效物质基础，通过
比较白鲜皮不同提取物对各种癣菌的抑菌活性强弱
和白鲜碱的含量高低，旨在寻求白鲜皮治疗足癣最有
效的活性部位和成分，为将白鲜皮研制成治疗足癣的
中成药奠定基础。
1　仪器与试药
1.1　仪器
Waters高效液相色谱仪，BC-R501旋转蒸发器(上
海贝凯生物化工设备有限公司 )，恒温培养箱（上海
和呈仪器制造有限公司），组织研磨器（宁波新芝生
物科技股份有限公司），血细胞计数板（上海求精生
化试剂仪器有限公司），1004 型电子天平 ( 上海天平
仪器厂 ) 等。
1.2　试剂和药材
白鲜皮药材购自金华市兰溪国药馆，经我院吴远
文老师鉴定为芸香科植物白鲜Dictamnus dasycarpus
Turcz. 的干燥根皮，白鲜碱标准品购于中国药品
生物制品检定所 ( 供含量测定用，批号：111654-
200301)，色谱级甲醇 ( 北京京科瑞达有限公司 )，丙
DOI:10.13728/j.1673-6427.2014.01.013
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酮和乙醇（深圳市天时化工有限公司）为分析纯，水
为去离子纯化水。
1.3　受试菌种
红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）标准株 1株；
絮状表皮癣菌（Epidermophyton floccosum）标准株 1
株；须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）标准
株 1株；石膏样小孢子菌（Microsporum gypseum）标
准株 1 株；犬小孢子菌（Microsporum canis）标准株
1株，以上所有菌株均由中国医学科学院皮肤病研究
所提供。
2　方法与结果
2.1　白鲜皮提取物的制备
称取 4份白鲜皮中粉 ( 过 4 号筛 )100.0g，分别加
入水、30%、60%、95% 乙醇 500mL 提取，加热回
流提取 2次，每次 0.5h，过滤，滤液合并，减压浓缩
成浸膏状，制成 1g 流浸膏相当于含生药 2g，得到白
鲜皮水提取物、30%醇提取物、60%醇提取物、95%
醇提取物。
2.2　白鲜皮提取物中白鲜碱的含量比较
2.2.1　供试品溶液的制备　　各称取白鲜皮不同提
取物约 1.5g，精密称定，置于小烧杯中，分别加流动
相溶解，定容至 100mL 的量瓶中，即得。
2.2.2　对照品储备液的制备　　精密称取白鲜碱标
准品适量，加甲醇制成每 1 mL 含白鲜碱 0.664mg 溶
液，即得。
2.2.3　检测波长的选择　　对白鲜碱对照品储备液
进行紫外扫描，经检测，白鲜碱的最大吸收波长为
237 nm，因此确定 237nm 为测定波长。
2.2.4　色谱条件　　Symmetry 色谱柱 C18 (4.6mm×250
mm, 5μm)，流动相为甲醇-水(70:30), 流速为0.5mL·min-1,
检测波长为237nm；柱温25℃；进样量20μL。
2.2.5　线性关系考察　　精密吸取白鲜碱对照品储
备液，用流动相依次稀释定容，配制成 8.4、13.28、
16.6、33.2、66.4、132.8μg·mL-1 系列浓度，分别进样，
以白鲜碱对照品质量浓度 X对白鲜碱色谱峰面积 Y
做标准曲线，得回归方程分别为 : Y = 735 801.77 X
+ 2 232 404.39，r2 = 0.999 4 (n=6)。白鲜碱对照品
HPLC 图谱见图 1。

图 1 白鲜碱对照品HPLC图谱
Fig. 1 HPLC chromatogram of dictamine reference substance
图 2 白鲜皮 60%醇提物样品HPLC图谱
Fig. 2 HPLC chromatogram of the 60% ethanol extract from Dictamnus
dasycarpus
2.2.6　精密度试验　　取白鲜皮 60% 醇提物供试品
溶液 , 连续进样 6次，测定结果表明，白鲜碱峰面积
的RSD 为 1.8%，说明该仪器精密度良好。
2.2.7　稳定性试验　　取白鲜皮 60% 醇提物供试品
溶液，分别于 0, 2, 4,6, 8, 10, 12 h 进行测定，测定结
果表明，白鲜碱峰面积的RSD 为 2.03%，说明样品
溶液在 12 h 内稳定。
2.2.8　重复性试验　　取同一批白鲜皮药材粉末 5
份，每份 2g，精密称定，按照白鲜皮 60%醇提取物
供试品溶液的制备方法制备，平行测定 , 计算白鲜碱
含量。结果表明，RSD 为 3.98%，说明该方法重复性
良好。
2.2.9　加样回收率试验　　称取已知白鲜碱含量的
白鲜皮药材粉末 5份 , 每份约 2g，精密称定，每份分
别加入白鲜碱对照品溶液适量，按照白鲜皮 95% 醇
提取物供试品溶液的制备方法制备，含量测定方法测
定。结果表明 , 白鲜碱的平均回收率为 104.8%，RSD
为 4.95%，说明该方法准确度高。
2.2.10　样品含量测定　　取白鲜皮各提取物供试品
溶液，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，进样，测定白鲜
碱峰面积，根据回归方程求出白鲜碱的含量，计算采
用不同溶剂从白鲜皮中提取出白鲜碱的提取率。试验
重复三次，计算白鲜碱的平均提取率，结果见表 3。
表 1 白鲜皮提取物中白鲜碱的含量测定结果
Tab.1 Determination results of dictamine content in the different extracts
白鲜皮
水提取物 30% 乙醇提取物 60% 乙醇提取物 95% 乙醇提取物
白鲜碱含量
（mg/g） 0 0.178 0.204 0.346
2.3　采用抑菌环法测定白鲜皮提取物抑菌活性
2.3.1　供试品溶液的制备　　各称取白鲜皮不同提
取物 1.5g，分别置于 4个小烧杯中，加丙酮和蒸馏水
（1:1）混合溶剂，溶解，分别倒入 100mL 的量瓶中，
定容至刻度。即得白鲜皮水提取物供试品溶液、30%
醇提取物供试液、60% 醇提取物供试液、95% 醇提
取物供试液。
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2.3.2　 菌悬液的制备　　将红色毛癣菌、须癣毛
癣菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌和犬小孢子
菌 5株菌种分别接种于培养基，置于 26℃恒温箱培
养 2 周。挑取已转种活化的菌块，置于组织研磨器
中，加入无菌生理盐水，研磨均匀，在震荡器上震荡
1min，将菌悬液浓度调节到 1～ 6×106cfu/mL。
2.3.3　抑菌片的制备　　取无菌干燥滤纸片，每片滴
加供试液 20μL，将滤纸片放在无菌平面皿里，干燥
后备用。
2.3.4　对照样片的制备　　取无菌干燥滤纸片，每片
滴加丙酮和水混合溶剂 20μL，干燥后备用。
2.3.5　抑菌试验　　用无菌棉拭子蘸取菌悬液，在培
养基平板表面涂沫均匀，涂沫 3次。盖好平面皿，置
室温干燥 5min。用无菌镊子将 1 片对照样片和 4 片
抑菌片放在每个平板表面上，对照样片贴在平板中
心。盖好平面皿，置于 26℃恒温箱培养一周，然后
观察结果。测定抑菌环的直径，试验重复三次，计算
抑菌环平均直径。实验结果如下：
石膏样小孢子菌
絮状表皮癣菌
红色毛癣菌
　　　
须癣毛癣菌 　　　　　　　　　　 犬小孢子菌
0代表对照样品
1代表水提取物
2代表 30%醇提取物
3代表 60%醇提取物
4代表 95%醇提取物
图 3 白鲜皮不同提取物对各种皮肤癣菌的抑菌效果
Fig. 3 The antifungal effect of the different extracts from Dictamnus
dasycarpus
表 2 白鲜皮不同提取物对各种皮肤癣菌的抑菌环实验结果
Tab. 2 The results of bacteriostatic circle test of the different extracts
样品 抑菌环直径（mm）
红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌 犬小孢子菌
水提取物 - - - - -
30% 醇提取物 - - - - -
60% 醇提取物 6.0 13.0 - 7.0 -
95% 醇提取物 17.0 22.0 21.0 21.0 20.0
注：“-”表示无抑菌作用，对照样品无抑菌作用
2.4　白鲜皮 95% 乙醇提取物最低抑菌浓度的测定
（MIC 的测定）
2.4.1　供试液的制备　　称取白鲜皮 95% 乙醇提取
物 1.5g，置于小烧杯中，加丙酮溶解，定容至 10mL
的量瓶中 , 用无菌蒸馏水溶解 , 采用试管二倍稀释法
进行梯度稀释，得到浓度分别为 75、37.5、18.75、
9.375、4.6875、2.344、1.672mg/mL 一系列供试液。
2.4.2　制备含药培养基　　制备常规沙氏琼脂培养
基，加入到试管内，每支试管 4mL，将供试液按浓
度由低到高依次加入培养基，加入体积均为 1mL，
混匀制成斜面。即制得 15、7.5、3.75、1.875、0.937 5、
0.468 8、0.334 4mg/mL 系列药物浓度药液培养基混合
物，同时做好标记。
2.4.3　对照培养基　　以不含药物的常规沙氏琼脂
培养基作为阴性对照（空白对照）；以不含药物的常
规沙氏琼脂培养基接种2μL菌悬液作为阳性对照(生
长对照 )。
2.4.4　抑菌试验　　将培养基在 121℃、0.15MPa 条
件下灭菌 15min 后，置斜面，待冷却，即制备好系列
药物浓度培养基和对照培养基。将已制备的红色毛癣
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菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌和
犬小孢子菌的菌悬液用微量移液器取 2μL分别接种
于含药培养基和阳性对照培养基斜面。将培养基置于
26℃恒温箱一周。
2.4.5　MIC 值的判定　　在自然光线下通过肉眼观
察。结果表明，阴性对照管培养基非常清晰，阳性
对照管菌落生长良好，将每管生长情况与对照管相比
较，以肉眼观察不到菌落生长的最高药物稀释浓度为
白鲜皮 95% 乙醇提取物对该菌种的MIC 值。MIC 按
每毫升含白鲜皮提取物毫克数计，结果见下表 3。
表 3 白鲜皮 95%醇提取物体外最小抑菌浓度 (MIC) 实验结果
Tab. 3 The minimum inhibitory concentration (MIC) results of the 95%
alcohol extract from Dictamnus dasycarpus
提取物 最小抑菌浓度MIC （mg/mL）
红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌 犬小孢子菌
95%醇提取物 7.5 3.75 3.75 3.75 3.75
3　讨论
3.1　由于白鲜皮醇提物在水中的溶解度较小，考虑
到乙醇本身有抑菌作用，所以就用 50% 丙酮水溶液
溶解提取物。可能稀释的浓度过小，结果白鲜皮水提
取物和低浓度的醇提取物就没有表现出抑菌活性。后
又通过抑菌试验，当白鲜皮水提取物和低浓度的醇提
取物浓度增大时，也表现出抑制癣菌的作用，说明白
鲜皮水提取物和醇提取物都有抑菌作用，只是抑菌活
性强弱不同。通过抑菌试验，说明白鲜皮的抑制癣菌
的活性是醇提取物比水提取物的抑菌活性强，且提取
溶剂醇的浓度越高，提取物抑菌活性越强。
3.2　通过测定白鲜皮 95%醇提取物最小抑菌浓度，
结果说明，白鲜皮醇提取物有明显的抑制皮肤癣菌的
作用。
3.3　通过测定白鲜皮不同提取物中白鲜碱的含量，
表明白鲜碱的含量随着提取溶剂醇的浓度增高而增
高，抑菌活性也是随着提取溶剂醇的浓度增高而增
强，推测白鲜皮的抑菌活性可能与其所含的主要成分
白鲜碱等生物碱有关。
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