全 文 ：（4）实践：在模拟人身上练习、观看光盘及病房见习后，最
终学生还是要在患者身上实践。学生在进行各项操作时，带教
教师必须全程指导，注意学生的无菌操作，对穿刺中不规范、操
作不到位之处及时纠正，必要时带教教师接手操作，做到手把
手地教导。操作结束后教师和学生一起探讨成功或失败的经
验，做到因人施教。通过观察，发现实习生在初次进行内科操作
时主要有 3种状况：①学生心理素质好，动手能力强，好表现，
操作时不怯场，但缺点是理论不够扎实。对这些学生要肯定其
长处，表扬的同时提醒他们提高理论水平。②学生基础理论扎
实，动手能力稍差，初次操作时有害怕心理。对这类学生在表扬
其基础理论扎实的同时，鼓励其克服畏惧心理。③学生基础理
论不扎实，动手能力也差。对这类学生带教教师不能打击和批
评他们，要善于发现其优点，对他们多费心、多示范、多给动手
机会。
（5）考核：培训完毕后利用模拟人对每位学生进行考核，细
化评分标准。包括操作前准备工作、操作具体步骤与方法、无菌
观念、正确留置标本、术后注意事项、操作相关知识等方面的量
化评分。由两位教师同时评分。
（6）评价：考核完毕，针对存在的问题给予评价纠正，肯定
长处，指出不足，鼓励学生提问，师生相互讨论，进一步加深学
生印象，保证其熟练掌握内科基本技能操作。
综上所述，内科基本技能操作是每位医生必须熟练掌握的
技能，既往的教学模式导致许多学生操作不够规范甚至有误。
我们通过示教、观看操作录像及多媒体课件、见习、实践、考核、
评价等多种手段相结合模式，构建内科基本技能操作培训体
系，以使医学生正确、熟练掌握内科基本技能操作，制作的录像
及多媒体课件对于各级医生复习并进一步规范操作程序也非
常有益。
参考文献：
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Vol．34 2016 No．13实验与实习 卫生职业教育
复方白鲜皮抗菌凝胶剂的制备及质量控制
周爱媚，汪 妍 *，方圆圆，陈 菲
（金华职业技术学院，浙江 金华 321007）
摘 要：目的 制备复方白鲜皮抗菌凝胶剂，并用高效液相（HPLC）法测定复方白鲜皮抗菌凝胶剂中白鲜碱的含量。方法 以
白鲜碱为指标成分控制含量，用闪式提取法提取白鲜皮和苦参混合物浓缩液，确定了以 1.0%卡波姆 - 940、1.0%冰片、10%甘
油、5%乙醇、0.2%聚山梨酯 80、0.1%羟苯乙酯、1.35%三乙醇胺为处方组成，通过外观和稳定性观察实验确定复方白鲜皮抗
菌凝胶剂制备工艺。结果 凝胶剂外观性状为淡黄色晶莹透明状胶体，气微清香；pH 值约为 6.7；稳定性试验表明本品各指
标均无明显改变，皮肤刺激性试验表明本品对皮肤无明显刺激，手足癣主要致病真菌的抑菌试验表明该制剂对皮肤表面自
然菌的除菌率为 71.8%。结论 本制备方法简便可行，分析方法可用于控制白鲜皮抗菌凝胶剂中有效成分的含量。
关键词：复方白鲜皮抗菌凝胶剂；制备；质量控制
中图分类号：R944.1+5 文献标识码：B 文章编号：1671-1246（2016）13-0094-03
白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜 Dictamnus dasycarpus
Turcz. 的干燥根皮，是一种常用中药，为历代本草及《中国药典》
收载。白鲜皮属于多年生草本，根皮外表面呈淡灰黄色、内表面
类白色，肉质脆，味微苦，寒。具有清热燥湿、祛风止痒、解毒之
功效，临床上用于治疗湿热疮毒、湿风疹、疥癣疮癞、风湿热痹、
神经性皮炎等慢性顽固性皮肤病[1]等，并对心血管及血液病有
一定疗效，特别是对皮肤类疾病有很好的治疗作用，如对皮肤
瘙痒，湿热疮疡，阴部肿痛等病症都有一定的功效。化学研究表
明，其中的白鲜碱和梣酮是主要有效成分，具有显著活性[2]。目
前西医临床上主要用抗真菌软膏类药物来治疗手足癣，但由于
合成的抗真菌药物不良反应多，易产生耐药性，还有一定的毒
副作用，真菌感染治疗仍然面临许多挑战[2]。鉴于中药副作用
小，来源广，价格低廉，较少出现耐药性，因此从天然药物中寻
找安全性好、抗菌谱广、疗效高的抗真菌抗细菌成分已成为重
要的研究方向[3]。因而本实验筛选出具有清热祛湿、凉血解毒、
杀虫止痒等功效的中药白鲜皮和苦参作为复方药材，以白鲜碱
为指标成分提取其浓缩液，并将复方白鲜皮浓缩液制备为凝胶
剂[4]。本文经过对复方白鲜皮进行高效液相（HPLC）法含量控
制，验证其有效成分的含量，从而促进复方白鲜皮抗菌凝胶剂
的临床应用。
注：本文系 2015年浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划项目（2015R468001）
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1 仪器与试药
1.1 仪器
闪式提取器（河南金鼎科技发展有限公司）、F1004 型电子
天平（上海天平仪器厂）、高速药材粉碎机（浙江金华华盛实业
有限公司）、HH- 6数显恒温水浴锅（常州恒德仪器制造有限公
司）、BC- R501旋转蒸发仪（上海盛玻仪器有限公司产品）、Wa-
ters2487高效液相色谱仪、2487紫外分光检测器、Breeze色谱工
作站、DHP- 9052型电热恒温培养箱（上海和呈仪器制造有限公
司）、LDZX- 75KBS高压灭菌器（上海楚柏实验室设备有限公
司）、净化工作台（苏州安泰空气技术有限公司）、酸碱测试仪、
研钵等。
1.2 试剂
白鲜皮、苦参（购自金华三溪堂国药馆）、甘油、卡波姆 - 940
（青岛美生源生物科技有限公司）、乙醇（深圳市天时化工有限
公司）、聚山梨酯 80（上海山浦化工有限公司）、三乙醇胺（上海
化学试剂有限公司）、稀盐酸（无锡阳山生化有限责任公司）、羟
苯乙酯（上海山浦化工有限公司）、冰片（天津市化学试剂公
司）、色谱级甲醇（北京京科瑞达有限公司）、去离子纯化水等。
金黄色葡萄球菌（Staphy lococcus aureus）、绿脓杆菌（Pseu-
domonas aeruginosa）、石膏样小孢子菌（Microsporum gypseum）、
犬小孢子菌（Microsporum canis）、红色毛癣菌（Trichophyton
rubrum）、须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）、絮状表皮
癣菌（Epidermophyton floccosum）由金华职业技术学院基础医学
实验中心提供。
1.3 对照品
白鲜碱标准品（购自中国药品生物制品鉴定所）。
2 方法与结果
2.1 复方白鲜皮浓缩液制备
将白鲜皮和苦参（3∶1）打碎磨粉后称取 40 g于闪式提取器
中，以 1∶10 的料液比加入 80%的乙醇溶液，提取电压为 60 V，
提取时间为 2 min，过滤，收集滤液，浓缩和真空冷冻干燥，用
80%乙醇溶解并定容至 200 mg.ml-1备用。取复方白鲜皮提取液
200 ml（白鲜皮∶苦参 =3∶1），用旋转蒸发仪旋转蒸发除去溶剂，
遗留残渣加 80%乙醇液 20 ml溶解，过滤，滤液用 80%乙醇定
容至 20 ml，制成每 1 ml含 2 g药材的溶液。
2.2 凝胶剂的制备
2.2.1 凝胶基质处方 基质处方组成：卡波姆 - 940[5，6] 1.0 g，甘
油 10 g，乙醇 5 g，聚山梨酯 80 0.2 g，羟苯乙酯 0.1 g，三乙醇胺
1.35 g，蒸馏水加至 100 ml。
制备方法：将卡波姆 - 940播撒入甘油表面，用研磨法使
其充分浸润完全后，再加 10 ml 蒸馏水研磨细腻，加 50 ml水，
使之充分溶胀。将三乙醇胺、聚山梨酯 80 溶于 5 ml 水后加入
上液研磨，再将羟苯乙酯溶于乙醇逐渐加入搅匀，加蒸馏水至
全量，搅拌均匀即得。
结果观察：呈胶冻状，透明清亮细腻，光泽度好，长时间放
置稳定。
2.2.2 复方白鲜皮凝胶剂制备 （1）处方设计：冰片[7]1.0 g，复方
白鲜皮浓缩液 5 ml，卡波姆 - 940 1.0 g，甘油 10 g，乙醇 5 g，聚
山梨酯 80 0.2 g，羟苯乙酯 0.1 g，三乙醇胺 1.35 g，蒸馏水加至
100 g。
（2）制备工艺的优化。制备方法一：将卡波姆 - 940 1.0 g播
撒入 10 g甘油表面，用研磨法使其充分浸润完全后，加入复方
白鲜皮浓缩液 5 ml和 5 ml溶有冰片和羟苯乙酯的乙醇溶液；
再加 50 ml蒸馏水研磨细腻，使之充分溶胀；将三乙醇胺、聚山
梨酯 80 溶于 10 ml水后加入上液研磨，再加蒸馏水至全量，搅
拌均匀即得。
制备方法二：将卡波姆 - 940 1.0 g播撒入 10 g甘油表面，
用研磨法使其充分浸润完全后，加 10 ml蒸馏水使之充分溶胀；
加入复方白鲜皮浓缩液 5 ml和 5 ml溶有冰片和羟苯乙酯的乙
醇溶液，再加 40 ml蒸馏水研磨细腻；将三乙醇胺、聚山梨酯 80
溶于 10 ml水后加入上液研磨，再加蒸馏水至全量，搅拌均匀
即得。
制备方法三：将卡波姆 - 940 1.0 g播撒入 10 g甘油表面，
用研磨法使其充分浸润完全后，再加 50 ml蒸馏水研磨细腻，使
之充分溶胀；将三乙醇胺、聚山梨酯 80 溶于 10 ml水后加入上
液研磨；加入复方白鲜皮浓缩液 5 ml和 5 ml溶有冰片和羟苯
乙酯的乙醇溶液，再加蒸馏水至全量，搅拌均匀即得。
2.2.3 结果考察（见表 1） 通过对 3个成品进行外观性状观察
和长时间放置稳定性观察两个指标确定制备方法的优劣，经过
综合评价，制备方法二被筛选为实验最佳制备方法。
2.3 凝胶剂含量测定
2.3.1 色谱条件 色谱条件：以 Symmetry C18（4.6 mm×250
mm，5 μm）为色谱柱；以甲醇—水（V/V=70∶30）为流动相；流速：
0.5 ml/min；柱温 25℃；检测波长：237 nm；灵敏度：0.5AUFS；进
样量：20 μl。理论塔板数以白鲜碱计不低于 5 000。
2.3.2 供试品溶液的制备 取凝胶剂样品 5 g，精密称定，置于
50 ml锥形瓶中，加流动相（甲醇∶水 =70∶30）约 15 ml，超声 20
min，放置至室温，转移至 25 ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻
度。摇匀，离心 10 min，取其上清液过 0.45 μm滤膜，取续滤液
作为供试品溶液。
2.3.3 对照品溶液的制备 称取白鲜碱标准品适量，置于 100 ml
容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得 0.664 mg/ml
的白鲜碱对照品溶液。
2.3.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20
μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3.5 标准曲线及线性范围 精密吸取白鲜碱对照品用流动相
依次稀释定容，配制成 1.05、4.2、8.4、16.8、33.2、66.4 μg·ml-1系
列浓度，分别进样，以白鲜碱对照品质量浓度 X对白鲜碱色谱
峰面积 Y做标准曲线，得回归方程分别为：y = 740 444.85x +
2 265 470.91，r2 = 0.999 3（n=6）。即呈良好线性关系。
表 1 各制备方法考察结果
一
二
三
基质
制备方法 外观和气味表现
呈胶冻状、鹅黄色，光泽度较好，比较晶莹透亮，较细腻，
有芳香味，长时间放置稳定
呈胶冻状、鹅黄色，光泽度好，晶莹剔透，细腻，有芳香
味，长时间放置稳定
呈胶冻状、米黄色，光泽度较暗，混沌不透亮，较细腻，有
芳香味，长时间放置稳定性较好，但颜色加深
呈胶冻状，透明清亮细腻，光泽度好，长时间放置稳定
95- -
2.3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液 20 μl，注入高效液相
色谱仪，连续测定 5 次，记录峰面积积分值，并以峰面积计算
RSD值。结果表明，该仪器精密度良好，可靠性强。
2.3.7 稳定性试验 精密吸取复方白鲜皮抗菌凝胶剂供试品溶
液 20 ul，按照上述色谱条件分别于 0、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h
进样，测定峰面积，并以峰面积计算 RSD值。结果表明，供试品
溶液在 24 h基本稳定，RSD值为 2.54%。
2.3.8 重复性实验 精密吸取同一供试品溶液 20 μl，依法测
定，重复测定 5次。结果表明 5批样品的白鲜碱含量平均为 8.8
μg/g，RSD为 1.57%。
2.3.9 回收率试验 精密称取复方白鲜皮抗菌凝胶剂 3批次样
品各 1份，每份分别加入白鲜碱对照品溶液适量，制备成高、
中、低 3个浓度各 3份，计算每个浓度的平均加样回收率，平均
回收率 103.85%，RSD=2.24%（n=3），说明方法回收率良好。
2.3.10 样品含量测定 精密吸取供试品溶液 20 μl，进样测定，
3批样品中白鲜碱的平均含量为 8.75 μg/g，结果见表 2。
2.4 皮肤刺激性试验
2.4.1 方法 选用健康家兔 4只，体重在 4.0～5.0 kg之间，在
给药前 24 h将兔背部脊柱两侧对称脱毛（每侧大约 5 cm×5
cm）。以每只兔子左边为试验组，右边为对照组。每次在背脊右
侧涂空白凝胶剂 0.3 g，背脊左侧涂含药凝胶剂 0.3 g，每日重复
给药 2次，连续给药 1周，观察皮肤变化。
2.4.2 实验结果 观察比较对照组和试验组在给药过程中及给
药 1周内的皮肤情况。结果表明基本无发生皮肤红斑及水肿现
象，说明本制剂对皮肤基本无刺激。
2.5 稳定性试验
2.5.1 离心试验 取凝胶剂样品 10 g，装入离心试管中，以 2
500 r/min转速离心 20 min，结果凝胶剂未出现分层和沉淀现象。
2.5.2 耐热试验 取凝胶剂样品 10 g，置于 60℃恒温水浴放置
6 h，结果凝胶剂未出现分层和沉淀现象。
2.5.3 耐寒试验 取凝胶剂样品 10 g，置于 - 15℃冰箱放置 24
h，结果凝胶剂未出现分层及冻结现象。
2.6 抑菌试验
2.6.1 悬液定量法 吸取样品凝胶剂原液放入 5.0 ml的灭菌试
管中，20℃恒温 5 min。吸取试验菌液（浓度约为 1×104～9×104
cfU/ml）0.1 ml加入到凝胶剂样品中，迅速混匀，并立即计时，作
用至 30 min后，取试验菌与样品混合液 1 ml，加入到含 5.0 ml
经灭菌的 PBS试管中，充分混匀。置 10 min后，吸取混匀后的
样液 1 ml，置于灭菌平皿内，每个样液接种两个灭菌平皿。用凉
至 40℃~45℃的培养基 15 ml做倾注，转动平皿，使其充分均
匀，琼脂凝固后翻转平皿，当试验菌是金黄色葡萄球菌或绿脓
杆菌时，置 37℃恒温箱培养 16～18 h；当试验菌是红色毛癣菌、
须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌或犬小孢子菌时，
置 26℃恒温箱培养 7天，做活菌菌落计数；以 PBS代替试验样
品，同时按以上步骤操作，作为对照样品，实验重复 3次，求其
平均值。
抑菌率 =（对照样品平均菌落数—试验样品平均菌落数）÷
对照样品平均菌落数。
悬液定量法结果表明：复方白鲜皮抗菌凝胶剂对红色毛癣
菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌、
金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑菌率均在 70%以上。
根据国家标准，抑菌率大于 50%的抑菌型制剂属于 B2级
以上级。说明复方白鲜皮抗菌凝胶剂抑菌试验均达到了国家
QBT2850- 2005抑菌型制剂抑菌标准。
2.6.2 使用前后菌落数比较试验 随机选定 40名足癣患者志
愿受试者。采样者用无菌棉拭子在含有 10 ml无菌蒸馏水试管
中浸湿，在左脚指屈面从指尖到指根往返涂擦 2遍采样，作为
使用复方白鲜皮抗菌凝胶剂前对照。用无菌棉拭子蘸取复方白
鲜皮抗菌凝胶剂对左脚指屈面从指尖到指根往返涂擦 2遍进
行擦拭，作用 5 min，用无菌棉拭子按上述方法进行采样，作为
试验组样本。对所有采样标本经充分振荡洗脱，取洗脱液进行
培养和菌落计数，计算自然菌减少对数值。结果表明：使用前志
愿受试者脚上平均菌落数为 195 cfu/cm2，用复方白鲜皮抗菌凝
胶剂后，脚上残存的平均菌落数为 55 cfu/cm2，说明用该凝胶剂
对皮肤表面自然菌的除菌率为 71.8%。
3 小结
（1）采用现代提取工艺 80%乙醇闪式提取白鲜皮的抗菌成
分，与传统的水煎法相比，有提取完全、浓缩方便、药液不易发
霉等优点；与回流提取法相比，有提高提取效率、缩短提取时
间、减少溶剂使用量等优点。
（2）本研究结合临床和民间治疗手足癣的经验，筛选出治
疗手足癣的中药复方制剂。中药白鲜皮多制成洗液或者乳剂进
行使用，而制成凝胶制剂的甚少。凝胶剂制备操作简单，生产成
本低。
（3）目前市场上个人洗护产品很多，但据调查对手部和足
部癣菌有一定治疗作用的护理产品几乎没有。而本制剂能克服
西药产生耐药性及有一定毒副作用的弊端，有较好的治疗作
用，且安全、方便，能满足消费者追求产品绿色化与安全的消费
心理，有产生巨大经济效益的前景。
参考文献：
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（*通讯作者：汪妍）蒉
20121118
8.77
表 2 各批号样品含量测定结果（μg/g）
8.75
平均值 20121025
8.73
20121010
8.74
96- -