全 文 ：2012年 第29卷 第4期浙 江 柑 橘
本地早蜜橘胚性愈伤组织的离体诱导
罗君琴 柯甫志 徐建国 王 平 聂振朋 孙建华
（浙江省柑橘研究所 台州黄岩 318020）
收稿日期:2012-06-27；修回日期：2012-07-25
柑橘胚性愈伤组织诱导技术在柑橘种
质资源离体保存、理化诱变、原生质体融合、
外源基因转化等柑橘种质保存及新种质创
制过程中有着重要的基础研究地位。目前
随着柑橘分子生物育种技术的快速发展，胚
性愈伤组织作为柑橘理化诱变、原生质体融
合、外源基因转化的理想起始材料，其在柑
橘种质创新研究中的基础应用作用更为明
显。柑橘胚性愈伤组织目前主要可通过败
育的成熟胚珠、未成熟胚珠、实生幼苗胚轴
茎段、子叶以及花药培养等途径来诱导获
得。本实验以本地早蜜橘为试材，以其各自
试管播种的实生幼苗上胚轴近顶端、子叶、
含子叶节间的下胚轴及幼根为外植体进行
胚性愈伤组织诱导试验技术研究，以期为柑
橘胚性愈伤组织的更好诱导、保存及应用提
供一定的技术依据。
1 材料与方法
1.1 材料
本地早蜜橘试验材料来自浙江省柑橘
研究所山地试验站。
1.2方法
在无菌条件下，取本地早蜜橘鲜果种
子，消毒灭菌后，剥除内外种皮，接种MT基本
培养基，25±1℃培养2周，于超净工作台上
切取各类型外植体，分别接种于愈伤诱导试
验培养基。接种后各处理培养瓶，均在25±
1℃条件下暗培养。
1.2.1 培养基激素浓度对柑橘外植体胚性愈
伤诱导的影响
以MT为基本培养基，培养基中添加激素
选用6-BA、NAA，BA/NAA激素配比不变，分处
理调整6-BA、NAA的使用绝对量。BA设0.5、
1.0、2.0mg/L三个浓度，对应的NAA分别设为
0.25、0.5及1.0mg/L浓度，分别接种同苗龄
本地早实生幼苗子叶及(含子叶节间)下胚
轴外植体。接种45d后，观察统计外植体愈
伤组织诱导状况。
1.2.2不同接种外植体的愈伤诱导状况比
较
分别以本地早蜜橘14d实生幼苗近顶端
上胚轴、子叶、含子叶节间的下胚轴及幼根
为外植体，接种于MT+BA1.0+NAA0.5进行愈
伤组织诱导比较试验。接种后每隔7d观察
记录，外植体是否有愈伤产生。接种后45d
观察统计外植体愈伤组织诱导状况。
2 结果与分析
2.1 培养基激素浓度对柑橘外植体胚性愈伤
诱导的影响
本地早实生幼苗子叶、下胚轴外植体接
种 于 MT + BA0.5mg/L + NAA0.25mg/L、MT +
BA1.0mg/L +NAA0.5mg/L及MT+BA2.0mg/L+
NAA1.0mg/L诱导培养基暗培养45d后，各处
理愈伤诱导结果如图1、图2所示。从图1、
图 2数据可以看出，培养于 BA0.5mg/L+
NAA0.25mg/L激素浓度培养基中的外植体，
无论是子叶还是下胚轴，其外植体愈伤诱导
均 明 显 低 于 BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L及
BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L。比较图1与图2，同
时可以发现下胚轴外植体比子叶更易在
··10
2012年 第29卷 第4期 浙 江 柑 橘
BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L培养基
中诱导产生愈伤组织及胚性愈伤，其外植体
愈伤诱导比例高达100%，胚性愈伤诱导比例
达 96%以上。子叶外植体在 BA0.5mg/L+
NAA0.25mg/L、BA1.0mg/L + NAA0.5mg/L及
BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L三个培养基中，在
BA/NAA比值不变的前提下，随着BA和NAA激
素浓度的增加，愈伤及胚性愈伤的诱导比例
呈递升趋势，子叶外植体愈伤诱导培养基中
激素浓度可在BA2.0+NAA1.0mg/L基础上适
当提高。
2.2 不同接种外植体的愈伤诱导状况比较
以本地早14d苗龄试管苗近顶端上胚
轴、子叶、下胚轴(含子叶节间)及幼根为外
植体，接种于愈伤诱导培养基，各处理外植
体产生愈伤情况如表1所示。从表1可以得
知：在 MT+BA1.0+NAA0.5诱导培养基中，下
胚轴外植体愈伤及胚性愈伤诱导比例在四
种试验外植体中最高，分别达 100%及
96.5%。四种外植体愈伤诱导难易顺序为下
胚轴＞子叶＞幼根＞近顶端上胚轴，胚性愈
伤诱导难易顺序为下胚轴＞幼根＞子叶＞
近顶端上胚轴。在本地早蜜橘四个类型的
外植体愈伤诱导试验中，下胚轴(含子叶节
间)最适胚性愈伤诱导，它不但愈伤诱导时
间短，7d就有愈伤产生；而且胚性愈伤诱导
比例高。
3 小结
3.1 培养基中BA和NAA激素添加浓度对柑
橘外植体愈伤诱导影响较大，当BA/NAA比值
保持2不变，激素添加浓度较低，为BA0.5mg/
L+NAA0.25mg/L时，子叶和下胚轴外植体的
愈伤诱导比例均明显低于 BA1.0mg/L+
NAA0.5mg/L及BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L中对
应外植体。BA1.0～2.0mg/L +NAA0.5～
1.0mg/L培养基适合本地早蜜橘14d苗龄下
胚轴外植体诱导胚性愈伤；对子叶外植体可
适当在此基础上进一步提高培养基中BA及
NAA添加浓度。
3.2 在 MT+BA1.0+NAA0.5诱导培养基中，
图1培养基激素浓度对子叶愈伤诱导影响 图2培养基激素浓度对下胚轴愈伤诱导影响
表1本地早不同接种外植体愈伤组织诱导比较
外植体类型
近顶端上胚轴
子叶
下胚轴(含子叶节间)
幼根
外植体接
种数/个
22
67
57
31
最早出现
愈伤时间/d
42
28
7
21
愈伤诱导外植体数
及比例/个/%
6/27.3
35/53.7
57/100
12/38.7
产生胚性愈伤外植
体数及比例/个/%
2/9.1
10/14.9
55/96.5
9/29.0
··11
2012年 第29卷 第4期浙 江 柑 橘
影响柑橘引种的主要生态因子
聂振朋 柯甫志 王 平 罗君琴 徐建国
（浙江省柑橘研究所 台州黄岩 318020）
收稿日期:2012-07-24
本地早蜜橘14d苗龄实生苗各组织器官外植
体愈伤诱导难易顺序为下胚轴(含子叶节
间)＞子叶＞幼根＞近顶端上胚轴，胚性愈
伤诱导难易顺序为下胚轴＞幼根＞子叶＞
近顶端上胚轴。在柑橘胚性愈伤诱导试验
中，可首先考虑幼龄试管苗的下胚轴作为诱
导外植体，试管苗不带菌，不经历消毒灭菌，
外植体分离后易快速进入愈伤生长。
参考文献
［1］ 霍合强,郝玉金,邓秀新.宽皮柑橘品种的胚性
愈伤组织诱导[J].实验生物学报.1999,32(3)：
289～295
［2］ 张秀芝.红江橙与柠檬愈伤组织诱导的研究
[J].广西农业科学.2008，39(1)：6～11
［3］ 何永睿,洪勇,陈善春等.柑橘组织培养中的次
生胚胎发生研究[J].热带作物学报，1999，20
(1) :45～51
柑橘种质资源丰富，但地理分布不均
衡，随着柑橘生产和人类对柑橘消费品种日
益多样化的需求，人类开展了广泛的柑橘引
种，就是将柑橘资源从产地引入其它地区，
用于品种改良或更新，柑橘引种简便而且实
用，目前在世界范围内已经取得了巨大的成
功，促进了柑橘产业的持续稳定发展。但柑
橘引种的成败与多种自然条件和人为因素
有关，关键在于引种时要综合考虑引入地的
生态环境因子是否与引入柑橘种的的生态
型相协调。为了促进柑橘引种的进一步发
展，推动地域之间柑橘品种的不断改良更
新，本文对影响柑橘引种的主要生态因子进
行综述，以期为合理广泛进行柑橘引种提供
科学基础和理论依据。
1 柑橘生长的生态环境条件
柑橘是亚热带常绿果树，喜温暖湿润气
候。一般适宜的气候为年平均气温15℃以
上，最冷月平均气温5℃以上，极端最低气温
在-5℃。柑橘生长的温度低限是12.5℃、最
高是37～39℃，最适温度为24～28℃。柑橘
的春芽萌发一般需要日均温在10℃以上，夏
梢抽发的适宜温度为23℃，秋梢抽发的适宜
温度为27℃，柑橘花期需要日均温在17℃以
上。不同柑橘种类长期在某种生态环境条
件下生长发育，能形成对该种特定生态因子
的适应性，即柑橘生态型。在柑橘引种过程
中就要充分考虑柑橘的生态型，只有当柑橘
(品)种特性与引种地固有或人工创造的生
态环境一致时，柑橘(品)种才能表现其固有
优良种性；而世界柑橘生态型主要分为：气
候温暖潮湿的夏湿带和气候干燥的夏干
带。夏湿带主要分布在我国长江流域以及
南部地区、日本南部、朝鲜南部的沿海地区、
美国东南部的佛罗里达州和得克萨斯州等
地区；而夏干带则主要分布于地中海沿岸，
包括西班牙南部、意大利、里海沿岸的部分
地区以及美国的加里福尼亚州一带，气候特
点是夏半期(4～10月)高温干燥，冬半期
(11～3月)气候湿润，但气温不太低。同一
柑橘生态带内相似温度条件地区的相互引
种容易成功，而不同生态气候带之间的特定
的种类、品种引种则成功机率相对较小。
2 影响柑橘引种的主要生态因子
··12