全 文 ：数量性状遗传的研究还需进一步开展 . 主要根
据性状遗传力 、 祖先的组合力和筛选指数 进 行 选
择二
遗传生物化学技术将逐步应用于无性系化 、 程
序化和遗传工程 . 果树改良需要较长时间 , 但在将
来粼能通过简单的生化处理将一种新基因转入桃
染色休。
乍 结 束 语
用这样一个难度大的树种进籽遗传学研究似乎
是徒劳的 . 但通过长期艰苦努力获得的结果具有重
要意义 . 首先 . 丰富了桃树资料 ; 其次 , 这些研究
结果将在广大领域发挥作用 。
我们是育种工作者 , 正因如此 , 我们需要遗传
学作指导 , 利用孟德尔性状鉴别栽培品种 ( 同工酶
的应用将会促进我们的工作。 ) 将某些性状重新组
合可能产生新的品种 ( 如 , 在加里佛尼亚有一个重
要的矮化育种方案 , 作者在桃树 厂垂习性及扁形桃
方面进行研究 ) 。 这些尝试将会明显改变 栽 培 条
件 . 使其更加经济 . 毫无疑问 , 抗病性遗传的研究
也将进一步开展 。
最后 , 数量性状遗传研究会使选择方法更加合
理化 , 而不那么依赖于偶然性 。
我们并不指望在更适合树种上获得的研究成果
来促进桃遗传研究 , 我们目前的工作是开创未来的
力量源泉。
译 自 ( 美 ) ( A e t a H o r t i e u l t u r a e )
1 9 8 9年 , 2 5 4卷 , 4 9一 5 7页
作者 M o n e t R .
译者 洪 觅
校者 杨克钦
`键 ’来檬与 `伏令夏 ’橙原生质体
融合产生的种间体细胞杂种植株
从胚悬浮培养物 中分离出的 ` 键 ’ 来像原生质体与 ` 伏令夏 ’ 橙叶片原生质体触合产生 了种间异源四倍体
体细胞杂种植株。 杂种植株再生是原生质体融合后杂种组织体细胞胚胎发生能力提高的作用 。 体细胞杂种 已彼
叶片形态 、 染色体数和礴酸有糖变位醉醉谱的分析鉴定证实 。 杂种植株长势极弧 , 其形态介 于两亲本之间 。 这
种杂种的产生对 于柑桔品种改良具有重要愈义 。
引 盲
酸橙 ( 为著名的 M e x i e a n 、 西印度 、 键来檬 )
果小 , 树体大小中等 , 果实内种子数中等 . 果皮极
薄 . ’ `键 ’ 来檬的多胚性中等 , 其童期在柑枯属所
有种中是最短的 ( 只有 18 个月 .) `键 ’ 来檬非常
不耐由G lo e o s p o r i u m L im e t t ie o l u m引起的来檬 炭
疽病 . 栽培上由于感染这种病和不抗寒而 受 到 限
制一 `键 ’ 来檬也感柑枯衰退病毒 , 当感染这种病
时 , ’树体表现很特殊的症状 . 因此 , `键 ’ 来檬常
被用作衰退病生物测定试验时的指示植物。 `键 ’
来檬实生苗也很感山F u s a r i u m o x y s p o r u m 引起 的
气
顶梢枯萎病
`伏令夏 ’ 橙抗寒性中等 , 在亚热带气候条件
下农现良好 。 `伏令夏 ’ 橙高度多胚性 , 其果实中
.等到大 , 成热时谷色好 . 谈品种朱头种子 f汉少 , 在
树上挂果好 , 极适于加工 . `伏令夏 ’ 橙是生产上
所有刮橙中成熟最晚的一个品种 。 与 `键 ’ 来檬相
比 . `伏令夏 ’ 橙童期长达 8 、 10 年 , 耐衰退病毒
和抗来檬炭疽病 。
由 一3几封{七彗的生殖周期长 、 珠心多胚性和极其杂
合性 ( 包括高频率的隐蔽有害隐性丛因 ) 而通过传
统的育种方法改良柑枯品种的进展有限 . 需要有新
的方法加快与柑桔属其他重要种间互补性 状 的 转
移 . 通过原生质体融合的体细胞杂交对于品种改良
有潜力 , 它可以把一些优良的品种与直接的品种潜
势结合起来培育异源四倍体 , 或在二倍体与四倍体
的有性杂交中用于亲本培育优良无核三倍体品种 。
最近 , 我们介绍了在有性杂交亲合的甜橙品种
`哈殉林 ’ 和积品种 `飞龙 ’ ( F l y i n s n r a g o n )间
产生属间体细胞杂种植珠的方法 。 从驯化了的胚发
生悬浮培养物分离出的 `哈姆林 ’ 甜橙原生质体与
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从童期叶片组织分离出的 `飞龙 ’ 积原生质 体 融
合 . 根据 `哈姆林 ’ 甜橙原生质体的再生能力与以
后 `飞龙 ’ 积三叶性状的表达的互补来进行杂种选
择 . 以后又用这个方法培育了 `哈姆林 , 甜橙与杂
交不亲合的柑桔近缘属酒饼筛和吉勒特氏樱桃桔属
间体细胞杂种植株 . 这些杂种的重要性是增加了用
于柑桔砧木育种的种质资源 .
本研究的目的是这种技术是 否 也 能 通 过 再
生柑桔属亲缘关系校近的品种间的种间体细胞杂种
植株进行品种改良。 本研究报告介绍了 `谁’ 来檬
和 `伏令夏 ’ 橙原生殖体融合后种间体细胞杂种值
株的产生和性状特点 .
材料和方法
按 G r o s s e r和C h a n d l e t 方法分离 `伏令夏 ’ 橙
叶片原生质体 . 从在人工气候室 ( 光照 16小时 . 光
强3 0 0件摩尔 / 秒 / M , , 26、 30 ℃ ) 生 一长的幼龄珠
心苗取叶片。 `键 ’ 来檬胚珠诱导的胚发生愈伤组
织悬浮培养 2个月后分离其原生质体 。 悬浮培养物
保存和继代培养 ( 每隔 2 周培养一次 ) 在改良 M T
基本培养基上 ( 此培养基包括 0 5克 / 升麦芽 糖 提
取物和 6 0克 / 升蔗糖 ) . 为了分离悬浮培养诱导的
原生质体 . 在一个 60 x l5 毫米的培养皿中将 2毫升
悬浮液 ( 从 7 、 12天变成“ 天一个周期 ) 与 2 . 5 毫
升酶液混合 . 然后用 N es co 薄膜密封 , 并在一 个旋
转摇动器上28 ℃ 条件下温浴 6 、 15 小时 。 两亲本的
原生质体制备液通过一个45 微米不锈钢滤器过滤 ,
再离心 ( 10 分钟 , 10 0克 )去掉酶与培养基液 , 在融
合前把这些小颗粒在 5 毫升 B H . 培养基中再进行悬
浮 。
用 C r 。 : s er 等介绍的聚乙烯乙二醇方法将 大 约
相等数量的 `伏令夏 ’ 橙和 `键 ’ 来檬原生质体进
行混合和融合 。 融合前 . 混合的粒状原生质体再悬
浮在 4 倍于原生质体颗粒的B H . 培养基中 , 每个融
合培养皿用两滴混合的原生质体 . 融合后 . 在融合
培养皿中放入 8 、 20 滴B H 。原生质休培养基进行原
生质体培养 . 融合盘用N es co 薄膜密封 , 在 28 ℃ 的
黑暗条件下于塑料箱中贮藏 。 融合后 6 周融合培养
液中放入 10 ~ 12 滴 1 : 2 ( 体积 比 ) 的 B H 。培养基
和液体M T 基木培养基 ( 包含12 5克 / 升蔗搪和0 . 5
克 / 升麦芽糖提取物 ) 混合液 , 融合后 8 周再放入
10 、 12 滴液体M T基本培养基 ( 包含1 0 克 / 升蔗塘
和 0 . 5克 / 升麦芽糖提取液 ) . 以 后每两周往 融 合
盘中补充 10 、 12 滴液休M T培荞埃 胚发生愈伤 组
织群体直径达到约 2毫米时就转移到琼脂固化 M r
基本培养基中 . 重新得到的杂种愈伤组织形戍的体
细胞胚转移到含有5 . 0毫克/ 升 6 一节基腺嗦 吟的
M T 基本培养基中诱导新梢形成 . 幼茎在含有 0 . 5
克 / 升中性活性炭和 0 . 02 毫克 / 升N人 A二分 之 一
浓度的M T基本培养基土生根 .
观察了再生体细胞杂种植株的形态特征 , ’ 并与
亲本植株进行了比较 。 观察了根尖的染色体数 . 根
据T or er s等方法进行 `键 ’ 来檬 、 `伏令夏 ’ 橙 和
休细胞杂种苗叶片组织的同工酶分析 。 用水平淀粉
凝胶电泳在含有 7 . 3形C o n n a u g ht 牌淀粉的凝 胶 上
进行同工酶的分离 。 用 p H S . 7的组氨酸一泞檬酸盐
缓冲液溶解磷酸葡糖变位酶 、 苹果酸脱氢酶和磷酸
葡糖异构酶同工酶。 在 250 伏 、 4 ℃条件下进 行 电
泳 4 小时 . 用V a l l e oj s ( 19 8 3 ) 方法或其改良法进
行染色 .
结果与讨论
按以前介绍的选择方法再生 `键 ’ 来檬和 `伏
令夏 ’ 橙种间杂种植株 。 从两个融合盘中得到了妞
个具有大的扭曲子叶的体细胞杂种胚 . 从 这 些 胚
中 , 得到了 了个整个植株 , 已转移到了盆中的混合
土壤上 . 两个幼茎没有生根 . 转移到土壤后 3个带
根的小植株被真菌侵染致死 。 从原来 7个植棒剪下
的生根侧枝又得到了24 个植株 。 同我们以前再生的
体细胞杂种一样 , 再生植株的形态表现一致 , 介于
两亲木之间 ( 图 1 ) . 从两个再生植株中每个植味
至少有 3 个细胞观察到 了染色沐数 口为36 ( 每个亲
本 Z n = Z x = 18 ) 的双二倍体 。 `伏令夏 , 橙在碑
酸葡糖变位酶这个基因位是杂合F S . 而 `键’ 来棣
是另外两个等位基因M 和 I 是杂合的 . 与这 4 个等
位基因对应的谱带在体细胞杂种中也存在 . 体细胞
杂种中的苹果酸脱氢醇和磷酸葡塘异构酶的谱带类
型是亲本等位基因的混合 .
`键 ’ 来檬亲本提供了从异核体获得胚发生愈
伤组织和体细胞胚的能力 。 悬浮培养诱导的原生质
体融合后 . 我们从未从没有融合的原生质体中得到
再生植株 。 利用胚发生悬浮培养 (以前是 `哈姆林 ’
甜橙 , 而现在是 `键 ’ 来檬 ) 提高了选择的效率。
似乎是胚发生悬浮细胞与有丝分裂活动有关 . 尽管
它们有胚发生的潜力 , 但很难激发其表达 . 悬浮细
胞适合于在液体培 冷旅中生氏 , 是与组织培养相关
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圈 1 叶 片形态 . 左边为 `健 , 来裸 ,
中间为 `健 , 来株与 `伏令夏’ 橙的体细 胞
杂种 , 右边为 `伏令复 ’ 橙 。
的优良原生质体来源 . 与第二个亲本非胚发生原生
质体的融合 ( 本试验是 `伏令夏 ’ 橙叶片组织 ) 可
明显刺激获得的体细胞杂种组织中的体细胞胚胎的
形成 . 这个结果是仅使杂种植株再生的选择计划 。
本研究的主要目的是确定原生质体融合技术是
否能把品种组合在一起 . 在异源四倍体水平上直接
产生新的品种类型 . 或至少产生能在二倍体 x 四倍
体的有性杂交 ( 试图培育有潜力的无核三 倍 体 后
代 ) 中可利用的优良异源四倍体育种亲本 , 对 ` 键 ’
来檬和 `伏令夏 ’ 橙的原生质体融合 。 对完成两个
方向的基因转移是有利的 . 例如 , 把 `伏令夏 ’ 橙
的瓶性 、 抗酸橙炭疽病和耐衰退病毒转移到接穗
品种中并结出来檬型果实是相当有用的 . 在培育少
籽和大果的新来檬类型也是具有潜力的 . 另 一 方
面 , 是想把 `键 ’ 来檬的短童期性状转移到甜橙中
去 。 目前与所有甜橙有关的长的结果周期大大延迟
了新甜橙类型的评价 ( 达到 1D 年 ) 。 再生体细胞杂
种来檬一甜橙植株的评价也有助于重要性状显隐性
关系的确定 。
最近 S o o s t和 C a m e r o n育出的两个袖与葡 萄袖
的杂种 `奥罗布兰科 ’ ( o r o b l a n e o ) 和 `美洛金 ’
( M e1 O g ol d ) 证明二倍体与四倍体杂交可 培 育 优
良的无核三倍休品种 。 这两个新品种都是二倍体抽
C R C 22 4 O与向源四倍体杂交产生的三倍体后代。 柑
桔育种利用二倍休与四倍体杂交因缺少适宜的育种
亲本而受到限制 。 山于柑桔属 ( 袖除外 ) 的高度杂
合性 , 现有同源四倍体数量少 、 树势弱和园艺性状
差 . 我们的结果表明通过不同重要品种间原生质体
融合的体细胞杂交培育许多新的种间同源四倍体杂
种是可能的 . 这种杂种做为育种亲本具有 很 大 潜
力 .
译 自 ( 荷 ) 《 S e i e n t i a H o r t i e o l 一
t u r a e 》 1 9 8 9年 , 3 9 卷 , i 期 ,
2 3~ 2 9页 诊
作者 G r o s s e r J . W .
译者 杨有龙
校考 刘志成
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