全 文 ：从山金柑试管实生苗直接诱导
胚性愈伤组织的研究
邓秀新 章文才
、华 中农 业大学园艺系 )
备
提 要 山金柑 ( F or t n e ol Za h主n j i : : S w 呈n g ;e )种子在 M`r 培养基上培养5 0夭 , 可从幼苗子
叶下 0 . 1一 2 . 0厘米处产生胚性愈伤组织 , 并能在无激素的基本培养瑟中继代保存 , 仍有胚性再生
能力 。 取自田间植株的种子 , 其试管苗产生胚性愈伤组织的频率为 16 . 7 % , 显著地低于温室盆栽
树种子试管苗愈伤组织的发生频率 3 7 . 1% , 不同年份之间这种频率没有显著差异 。 产 生愈伤组织
的实生苗高度只有未产生愈伤组织苗高的 6 6 . 4% , 叶片数也只有后者的 13/ , 将子叶 以下 0 . 5厘米
的茎段在基本培养基上进行离体培养 , 3 8 . 5% 的外植体产生了胚性愈伤组织 。
关键词 山金柑 , 胚状体发生 ; 愈伤组织 ; 胚状体
柑桔胚性愈伤组织能从不定胚或受粉后 l一 6周的珠心组织 〔 7〕以及没有受粉受精的胚珠获
得 c ` 、 4 、 6 , , 从败育 的脐橙种子中 , 也能得到胚状体〔。 ’ 。 M a t s u m o t o等 ( 1 9 5 3 ) 从积的珠心苗茎
段组织诱导出不定芽和珠心胚 。 总之 , 在柑桔中 , 从珠心和子房之外的组织直接诱发出胚性
愈伤组织的报道较少 `幻 。 本文所报道的是 山金柑实生苗直接产生胚性愈伤组织和胚状体的研
究结果 。
弊
材 料 与 方 法
山金柑 ( F or t“胆 l la 尔”成 : ` S , 1n g le )果实取 自华中农业大学温室盆栽树和田间品种园 ,
盆栽树生长势较田间植株弱 。 成熟果实经表面消毒后 , 取出种子 , 剥去内外种皮接种于试管
中 , 以M T加 3%蔗糖加0 . 8%琼脂为基本培养基 , 设加硫酸腺嗓岭 (S A D ) s p lP n 、 6一糠基嗓吟
(K )T 1 P m 和赤霉素 ( G A ) 3P p m 3 个处理 , 以不加激素为对照 , 研究不同激素 对 产 生胚性
愈伤组织的影响 。 在不同年份进行重复 , 培养条件为 28 土 1℃ , 15 0 l0 x 光 照 12 小时。 接种 2
周后 , .开始观察萌发和胚性愈伤组织发生频率 。 采用基本培养基对两种来源的种子进行了比
较研究 。 对试验结果进行差异显著性测验。
将接种后 20 天的幼苗子叶以上 0 . 5厘米和 以下 0 . 5厘米区域切成 2 毫米长的小段 , 接种于
前述基本培养基中 , 以观察在离体情况下这两种组织的胚性愈伤组织再生能力 。
山金柑种子胚数是在体视解剖镜下 , 用解剖针在水 中分离统计的 。
结 果 与 分 析
山金柑是高度多胚性的种 , 平均每种子含有 9 . 2土 3 . 9粒胚 , 在试管中的萌发率很高 , 平
均每种子可出苗3 . 85 棵 `见表 ) 。 激素对出苗无明显影响 , 但加有赤霉素 3 p p m 的苗生长纤细 。
由于同一种子 内胚的发育程度不一致 , 所以同一种子长出的苗大小有差异 。
、
50 天时 , 从幼苗下胚轴和根部产生胚性愈伤组织 , 一般发生在子叶以下 准 . 6 毫米处 , 但
在子叶以下 1一 20 毫米这一区域均观察到胚性愈伤组织的产生 (见图版一 1 , 封三 , 下同 ) 。 也
曾观察到从极少数没有成熟的幼胚直接产生胚性愈伤组织和胚状体的情况 , 此种胚性愈伤组
1
_
9 8 8年 第 1 7卷 第 。 期 中 川 柑 桔 · 7 ·
DOI : 10. 13938 /j . i ssn. 1007 -1431. 1988. 04. 002
织比函劫备王产生的愈伤组织出现早 .但增殖能力没有后者强。 随着培养时间增长 , 胚性愈
伤组织不断增殖并转化为胚状体 (图版一2) 。 在同一株小 苗的根部常常可见到处于不同发育时
鞠的胚状体 (图版一3) , 早期的胚状体有一部分可发育成典型的具子叶的胚状体 (图版一的 , 另
一部分则从胚状体胚轴区再派生出新的胚状体 (图版一 5) 或者愈伤组织 。 由幼苗产生的愈伤组
织能在无激素的基本培养基中继代繁殖 , 并保持其胚胎发生能力 , 愈伤组织一旦转入含有硫
酸腺 l票吟 s p p m 的固体培养基中 , 则分化出胚状体 , 并萌发成为完整的植株 (图版一 6) 。
从表中可以看出 , 50 天之后 , 随着培养时间延长 , 产生愈伤组织的幼苗频率逐渐提高 , 但
达到一定值后不再增加 。 不同处理之间达到这一定值的时间不同 , K T 有助于提早达到这一
时期 , 约 65 天 , S A D与对照相近 ; 而 G A大大推迟了胚性愈伤组织出现的时间 , 这可能与使
用 G A后 , 植株变得纤细有关。 显著性测验表明 , 不同激素处理之间产生胚性愈伤 组织幼苗
的百分率没有显著差异 , 说明胚性愈伤组织发生受激素的影响较小 , 激素只对其发牛时间的
影响较明显 。 山金柑幼苗在无激素的培养基中也能产生胚性愈伤组织 。
在不同年份用温室盆栽山金柑种子在无激素 的基本培养基上接种 , 产生胚性愈伤组织的
幼苗百分率 1 9 8 5年为 3 9 . 1% , 198 6年为 35 . 1% , 显著性测验表明 , 年份之间产生胚状体苗的
频率差异不显著 。 从该结果还可看出 , 温室盆栽树种子实生苗产生胚性愈伤组织的频率平均
为 37 . 1% , 而田间树种子实生苗此频率只有 1 6 . 7% (见表 ) , 差异极显著 , 这可能与树体的生
理状态及营养情况有关 。
手
激素对山金柑种子出苗和产生胚性愈伤组织的影晌
产生胚性愈伤组织幼苗百分率
处 理 l 种子勿 总出苗数
每拉种子
出苗数 。 5天 】。。天 { ,。。天
G A 3 p p m
K T i p p m
SA D 5 p Pm
CK
二5 }一:. 。 】:;
,` ’ 。
{
’ 6“
1
’ 6
12
一
2 1 16
一 7 } 16
。
l
。
5
.
4
.
7 尹
:洲一的rd只ùùb一ùUO臼no .月恤
76乃佣韶介舀战口J马内jù石`U叶仁户d26d`ō翻“368
注: 种子来自田 间树 。
将子叶以上。 . 5厘米和子叶以下 0 . 5厘米茎段为外植体 , 接种在无激素的基本培养基中 ,
结果表明子叶以下 0 . 5厘米茎段在离体条件下同样能产生胚性愈伤组织 , 其频率为 3 8 . 5% ,与
活体条件下的频率没有显著差异 。 子叶以上 0 . 5厘米茎段未能产生愈伤组织 。
对产生或不产生愈伤组织的实生苗的测定表明 , 产生愈伤组织的苗高只有不产生愈伤组
织苗高的 6 6。 4% , 叶片数也只有后者的 13/ , 说明太强壮的苗不利于产生胚性愈伤组织 。这两
种苗在激素水平上的差异 , 以及愈伤组织的产生与珠心苗或合子苗是否有联系等都有待于进
一步研究 。
讨 论
在以前所研究的所有柑桔中 , 没有一个种能在无激素条件下直接从实生苗产生胚性愈伤
组织。 〕 , 虽然对积用激素可从试管苗诱导出球性胚 csJ , 但其普遍性和容易性不如山金柑 , 山
金柑具有的这种再生能力强的特性为进一步研究提供了方便 。 目前山金柑还处于野生和半野
生状态 , 还没有作为育种亲本加以利用 。 由于它具有早果性 , 实生苗第二年就可开花 , 加上
“
8
。 中 国 柑 桔 19 8 8年 第 17 卷 第 4 期
特别矮化 , 所以有可能成为培养矮化品种的有价值的原始材料 , 通过杂交将其早果性和矮化
性转入到其他栽培品种中去 。 由于其多胚性的影响 , 杂交之后难以得到杂种苗 , 这一障碍将
影响杂交育种的开展 。 然而利用其再生能力强的特点 , 与其他优良品种进行原生质体融合将
有希望克服这一障碍 。
从山金柑实生苗直接产生胚性愈伤组织 , 是与其本身的遗传特性相联系的 , 目前对其他
柑桔种还不能这样容易地得到胚性愈伤组织 。 因此 , 进一步研究其遗传生理与其他种的差异 ,
搞清楚控制这种现象的机制 , 将有助于解决组织培养中的再生问题 , 最后达到人为控制培养
材料的分化之 目的 。
)
参 考 文 献
〔 1 〕 B u t t o n , J。 e t a l。 : D e v e lo p m e n t o f 加 e e lla r p la址 5 f r o m u n p o l li an t e d a n d u n f e叶 i l i z e d o 丫u le , o f t h e W a比 -
i n gt o 口 an ve l o ar 叱 e i n v i t r o , J。 S o u th 。 A f r i。 B o 上。 1 9 7 1 , 3 7 , 1 2 7一 1 3心
c Z 〕 L i t z , R . E . : I n v i t r o sy s t恤 。 f o r o or p a g a t io n a n d i m p r o v e m e n七 o f * or p ica l f r u i t s a n d p a lm 、 , H o rt 玉e u lt -
”
er R
e v 。 1 9 8 5
,
7
*
15 7一 2 00
〔 3 〕 M a t s o m oOt
,
K , e t a l
. :
I
o
d
u e t i o n o f
a d v e nt ive b
u d s a n d g l o b
o la r e m b yr o id s o n , e e d li n g s o f t r if o li a et o ar n
-
ge
,
J
a p n
.
1
。
B er
e
d
。
1 05 3
,
33 ( 2 )
:
2 2 3一 1 2 9
〔 4 〕 M o o 代, G 。 A 。 : ` aF ct o 件 af f e ct i n g in 甲i t or e m b叮 o g e ne s i s f r o m u n d e帕 l o eP d o v ” le o f m a t u代 e i t r u s f r u it ,
]
。
A m
。
S o e
。
H
o rt
。
S
e i
。
1 98 5
,
〔 5 〕 I n v i t or
1 10 ( ] )
.
6 6一7 0
i n i t ia t io n of n u ce l la r e m b r y o i n rn o n oe 也 b叮。垃 e e it r u , , H o性 S e ie n ce , 1 , 6 5
〔 6 〕
R
a娘a n, T。 S。 et a l· :
3 . 2 26一 2 27
S t
a r r a址 i n o , A 。 e t a l。 :
v a sr
,
H
o rt s
e i e n c e
。 1 9 8 0
S
e e d l i n g , f or 止 u n d e v e lo eP d o v u l e s of r i讲 f ur i t s o f · P o lye m b r y o n ie e i t r ” 5 e u lt i一 ,
〔 7 〕 V a r d i , A 。 e全 a l . * P坛址
1 5 * 2 9 6一 2 9 7
代 g e en ar t i o o f or m e i t r u s p or fo p la s st : va r ia b il it y i n m e th o d o lo g ica l 代 q u i代 m eust
a m o o g e “ lt i v a朽 a n d s阵 e ies , T抽 o .r A p p l。 eG n e t 。 1 35 2 , ` 2 . 1 7 1一 17 6
欢迎订阅 1 9 8 9年度下列期刊呜

刊 名 每期定价 全年订价
国外农学一 果树 (季刊》 0 . 80 元 3 . 20 元
果树科学 (季刊 ) 0 . 90 元 3 。 60 元
落叶果树 (季刊 ) 1 。 10 元 4 . 40 元
江西柑桔科技 (季刊 ) 0 . 60 元 2 . 40 元
江西农业科技 (双月刊 ) 0 . 60 元 3 。 60 元
茶叶文摘 (双月刊 ) 1 . 0 元 6 . 0 0元
中国麻作 (季刊 ) i 。 00元 4 . 0 0元
中国农业文摘一植物葆护 (双月刊 ) 1 . 50 元 9 . 0 元
农业图书情报学刊 (双月刊 ) 2 . 0 元 1 2 。 。 o元
中国农学通报 (双月刊 ) 。 . 50 元 3 . 0 元
订 阅 处
各地邮局 (代号 : 3 6一 4 1 )
河南郑州南郊中国农科院果树所
山东泰安山东省果树所
江西淆江昌付双全柑桔试验站
各地邮局 (代号 : 吐4一 2 0 )
各地邮局 (代号 : 32 一 8 9)
湖南沉江中国农科院麻类所
北京白石桥路中国农科院信息中心
北京白石桥路中国农科院信息中心
北京农展馆路南里中国农学会
一 曰 . . . . . . . . . . . . ` ~ ~ 月
_
_
— —19 88年 第 1 7卷 第 4 期 中 国 柑 桔 9 ·