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不同产地赤小豆总三萜的含量测定及品质评价



全 文 :出 19 种,干样共鉴定出 6 种。天竺葵根系鲜样的挥发性物质数
量远多于干样,成分差别也较大,两处理共有的成分是六甲基环
三硅氧烷和角鲨烯。在天竺葵根系中检测到的角鲨烯、三十烷醇
等物质在医药及农业生产领域均有较大的应用价值,本研究为天
竺葵的进一步开发利用提供理论依据。
参考文献:
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京:科学
技术出版社,1998.
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[J].江苏农业科学,2010,38(1) :270.
[4] 王巨媛,翟 胜,崔庆新.等.天竺葵花瓣中精油成分分析[J].湖北
农业科学,2010,5:1196.
收稿日期:2011-02-24; 修订日期:2011-06-24
基金项目:国家自然科学基金科技资源共享平台项目
(No. 2005DKA21000)
作者简介:闫 婕(1984-) ,女(汉族) ,河南新乡人,现为成都中医药大学
在读博士研究生,硕士学位,主要从事中药品种、质量及资源研究工作.
* 通讯作者简介:卫莹芳(1945-) ,女(汉族) ,四川乐山人,现任成都中医
药大学教授,博士研究生导师,主要从事中药品种、质量及资源研究工作.
不同产地赤小豆总三萜的含量测定及品质评价
闫 婕,卫莹芳* ,龙 飞,王化东,郭山山
(成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室,四川 成都 611137)
摘要:目的 通过测定与赤小豆利尿作用相关的总三萜类成分的含量,评价赤小豆药材品种、质量优劣。方法 以齐墩果
酸为对照,用香草醛 - 冰醋酸 - 高氯酸比色法测定赤小豆样品中总三萜的含量。结果 线性方程为 A = 48. 894C -
0. 077 4,相关系数为 r = 0. 999 8,平均加样回收率为 100. 29%,RSD为 1. 23%(n = 6)。全国 11 省 37 份赤小豆总三萜的
含量在 0. 26% ~ 0. 69%之间。结论 不同产地、不同品种赤小豆总三萜的含量差异较大,赤小豆入药较赤豆为良,最佳产
地为广西百色。
关键词:赤小豆; 赤豆; 总三萜; 齐墩果酸; 分光光度法
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2012. 02. 022
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0305-02
赤小豆始载于《神农本草经》,《中国药典》2010 年版Ⅰ部收
载为赤小豆 Vigna umbeuata Ohwi et Ohashi或赤豆 Vigna angularis
Ohwi et Ohashi的干燥成熟种子[1],其所含化学成分主要为赤豆
皂苷(三萜皂苷)、糖苷、鞣质[2]及黄酮[3]等,具有利水消肿、解毒
排脓的功能。现代研究更表明赤小豆具有抗氧化、增强免疫、抗
菌、雌激素样作用等药理作用,应用于临床治疗急性肾炎,肝硬化
腹水,水痘,腮腺炎等[2]。赤小豆药食兼优,又叫红豆、红小豆
等,是我国种植的主要食用豆类之一。
现行版《中国药典》赤小豆项下质量标准极为简单,缺乏定
性定量指标,亟待完善。本课题组前期的药理实验表明,赤小豆
利尿作用的有效部位是氯仿萃取部位和正丁醇萃取部位[4]。本
文以齐墩果酸为对照品,通过分别测定不同产地药材氯仿萃取部
位中游离三萜化合物(皂苷元)及正丁醇萃取部位中三萜皂苷的
的含量,计算总三萜类成分的含量,制定相应的质量标准,为科学
评价药用赤小豆的品种与质量提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 UV -1100 紫外 -可见分光光度仪(上海天美科学仪
器有限公司) ,BP211D电子天平(十万分之一 Startorius德国赛多
利斯股份公司)。
1. 2 材料 样品在种质资源调查采集样品的基础上,选取有代表
性的 12 个省区 37 赤小豆药材样品,其中赤豆 29 份,赤小豆 8
份。经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为豆科植物赤豆 Vigna
angularis Ohwi et Ohashi或赤小豆 Vigna umbeuata Ohwi et Ohashi
的干燥成熟种子。
1. 3 试剂与试药 试剂均为市售分析纯,齐墩果酸对照品购自中
国药品生物制品检定所(批号:110709 - 200505)。
2 方法与结果
2. 1 赤小豆总三萜类成分定量分析方法的建立
2. 1. 1 显色方法及测定波长的选择 分别精密吸取齐墩果酸对
照品溶液和供试品溶液适量至具塞试管中,水浴挥干溶剂,各加
入新配置的 5%香草醛 -冰醋酸 0. 2 ml,高氯酸 0. 8 ml,密塞摇
匀,于 70℃水浴中加热 15 min,取出立即流水冷却 15 min,加入乙
酸乙酯 4 ml稀释,摇匀。以空白试剂为对照,于 200 ~ 800 nm 波
长范围内进行扫描,对照品溶液、样品氯仿萃取部位溶液和正丁
醇萃取部位溶液均在 550 nm处有最大吸收,故选取 550 nm为测
定波长。
2. 1. 2 标准曲线的制备 取干燥至恒重的齐墩果酸对照品
19. 50 mg,精密称定,置 100 ml量瓶中,加甲醇超声溶解定容,制
得每 0. 195 mg /ml 标准溶液。精密量取对照品溶液 0. 1,0. 2,
0. 3,0. 4,0. 5,0. 6 ml,分别置至具塞试管中,按照“2. 1. 1”项下,
自“水浴挥干溶剂”起,显色。在 550 nm 的波长处测定吸光度。
回归方程为 A = 48. 894C - 0. 077 4,r = 0. 999 8,齐墩果酸在 0.
003 9 ~ 0. 023 4 mg /ml浓度范围内,吸光度与浓度呈良好线性关
系。
2. 1. 3 供试品溶液提取方法的考察 通过单因素考察结合正交
设计的方法筛选出赤小豆总三萜类成分的最佳提取方法即用纯
甲醇 50 ml,回流提取 2 h(另文发表)。
2. 1. 4 供试品溶液制备方法 取各个产地的赤小豆药材粉末约
1. 0 g,精密称定,置 250 ml锥形瓶中,加甲醇 50 ml,于水浴温度
75℃回流提取 2 h,放冷,滤过,滤液回收溶剂至完全,加蒸馏水
30 ml溶解;依次分别石油醚、氯仿、正丁醇萃取 3 次,30 ml /次。
①合并氯仿萃取部位,回收溶剂后,用甲醇定容至 25 ml 量瓶中,
摇匀,作为供试品储备液Ⅰ。②合并正丁醇萃取部位,回收溶剂
后,用甲醇定容至 25 ml量瓶中,摇匀,作为供试品储备液Ⅱ。
2. 1. 5 精密度实验 精密吸取齐墩果酸对照品适量于具塞试管
中,平行 6 份,按照“2. 1. 2”项下方法显色测定吸光度,计算含
量。求得 RSD(%)= 0. 71(n = 6)。
2. 1. 6 稳定性实验 精密吸取齐墩果酸对照品适量于具塞试管
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
中,按照“2. 1. 2”项下方法,显色,放置 5,10,15,30,45,60,90,120 min 后,分别测定吸光
度,计算含量。不同时间测得结果的 RSD = 1. 62%(n = 8)。
2. 1. 7 重复性实验 取同一批赤小豆样品约 1. 0g ,平行 6 份,精密称定,按照“2. 1. 4”项
下制备供试品溶液,分别吸取供试品储备液Ⅰ、Ⅱ各 0. 4 ml,至不同具塞试管中,按照“2.
1. 2”项下方法显色测定吸光度,计算含量。6 次重复实验的测定结果 RSD分别为 1. 21%
(n = 6)。
2. 1. 8 加样回收率实验 精密称取齐墩果酸对照品 25. 54 mg,精密称定,置 50 ml 量瓶
中,加甲醇适量,超声处理使溶解,备用。称取已知含量的赤豆粉末 1 g,平行 6 份,精密称
定,精确加入上述新制备的对照品溶液 10 ml,混匀,按照“2. 1. 4”项下制备供试品溶液,
按照“2. 1. 2”项下方法显色测定吸光度,计算含量。结果见表 1。
结果表明,测定 6 次试验的加样回收率测定结果在 98. 63% ~ 102. 27%之间,平均回
收率为 100. 29%,RSD = 1. 23%(n = 6) ,表明本法回收率好,方法可行。
表 1 加样回收率实验结果
编号
样品中总三萜
类成分含量 m /mg
对照品加入量
m /mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 5. 365 5. 108 10. 515 100. 82
2 5. 365 5. 108 10. 457 99. 69
3 5. 365 5. 108 10. 433 99. 22 100. 29 1. 23
4 5. 365 5. 108 10. 528 101. 08
5 5. 365 5. 108 10. 589 102. 27
6 5. 365 5. 108 10. 403 98. 63
2. 2 不同产地赤小豆样品中总三萜类成分的含量测定 精密量取各样品试品储备液Ⅰ、
Ⅱ各 0. 4 ml,分别至不同具塞试管中,按照“2. 1. 2”项下方法显色测定吸光度。根据标准
曲线分别计算游离三萜类成分和三萜皂苷类成分含量,并计算总三萜类成分的含量。结
果见表 2。
表 2 全国不同产地赤小豆药材总三萜类成分的含量 %
编号 来源 产地 采集方式
游离三
萜含量
三萜皂苷
含量
总三萜类
成分含量
a - 1 赤豆 山西省原平县沿沟乡 2008 年自采 0. 36 0. 24 0. 60
a - 2 赤豆 山西省原平县崞阳镇 2008 年自采 0. 33 0. 29 0. 62
a - 3 赤豆 山西省静乐县新村乡 2008 年自采 0. 18 0. 28 0. 46
a - 4 赤豆 山西省平遥县西善乡 2008 年自采 0. 23 0. 28 0. 51
a - 5 赤豆 山西省代县阳明堡镇 2008 年自采 0. 21 0. 32 0. 53
a - 6 赤豆 陕西省富县张村驿镇 2008 年自采 0. 30 0. 30 0. 60
a - 7 赤豆 陕西省富县北道德乡 2008 年自采 0. 20 0. 23 0. 43
a - 8 赤豆 陕西省甘泉县道镇 2008 年自采 0. 15 0. 20 0. 35
a - 9 赤豆 陕西省甘泉县劳山镇 2008 年自采 0. 19 0. 22 0. 41
a - 10 赤豆 陕西省佳县方塌镇 2008 年自采 0. 21 0. 39 0. 60
a - 11 赤豆 河北省景县温城乡 2008 年自采 0. 21 0. 20 0. 41
a - 12 赤豆 河北省景县温城乡 2008 年自采 0. 26 0. 19 0. 45
a - 13 赤豆 河北省沧州市旧州镇 2008 年自采 0. 24 0. 20 0. 44
a - 14 赤豆 安徽省太和县双浮镇 2008 年自采 0. 37 0. 20 0. 57
a - 15 赤豆 安徽省裕安区韩摆渡乡 2008 年自采 0. 32 0. 21 0. 53
a - 16 赤豆 安徽省金安区中店乡 2008 年自采 0. 37 0. 21 0. 58
a - 17 赤豆 河南省滑县城关镇 2008 年自采 0. 14 0. 16 0. 30
a - 18 赤豆 河南省辉县常村镇 2008 年自采 0. 11 0. 15 0. 26
a - 19 赤豆 河南省固始县蒋集镇 2008 年自采 0. 18 0. 20 0. 38
a - 20 赤豆 山东省东明县 2008 年自采 0. 29 0. 12 0. 41
a - 21 赤豆 云南省大理州巍山县 2008 年自采 0. 16 0. 26 0. 42
a - 22 赤豆 河南购黑龙江佳木斯产商品 2008 年购自新乡市 0. 17 0. 23 0. 40
a - 23 赤豆 河北省购东北产商品 2008 年购自唐山市 0. 20 0. 34 0. 54
a - 24 赤豆 四川省购东北产商品 2008 年购自荷花池药材市场 0. 19 0. 25 0. 44
a - 25 赤豆 云南省购商品 2008 年购自菊花村药材市场 0. 34 0. 21 0. 55
a - 26 赤豆 山西省临汾市购商品 2008 年购自临汾市 0. 28 0. 22 0. 50
a - 27 赤豆 山西省清徐县购商品 2008 年购自清徐县 0. 22 0. 23 0. 45
a - 28 赤豆 山东省菏泽市购商品 2008 年购自菏泽市 0. 26 0. 24 0. 50
a - 29 赤豆 四川省购德阳产商品 2008 年购自荷花池药材市场 0. 33 0. 23 0. 56
c - 1 赤小豆 贵州省黔东南苗族侗族自治区 2008 年自采 0. 20 0. 28 0. 48
c - 2 赤小豆 广西省巴马瑶族自治县凤凰乡 2008 年自采 0. 26 0. 18 0. 44
c - 3 赤小豆 广西省东兰县三石镇 2008 年自采 0. 43 0. 17 0. 60
c - 4 赤小豆 四川成都购泸州产商品 2008 年购自荷花池药材市场 0. 43 0. 19 0. 62
c - 5 赤小豆 四川成都购彭州产商品 2008 年购自荷花池药材市场 0. 35 0. 18 0. 53
c - 6 赤小豆 湖南省购商品 2008 年购自永州市 0. 52 0. 14 0. 66
c - 7 赤小豆 广西省购百色市田东县产商品 2008 年购自南宁市 0. 54 0. 15 0. 69
c - 8 赤小豆 广东省购商品 2008 年购自清平药材市场 0. 24 0. 18 0. 42
n =3
3 讨论
不同产地、不同品种赤小豆总三萜
含量差异较大。全国 13 省,37 份赤小
豆样品中总三萜类成分含量在 0. 26%
~ 0. 69%之间,建议赤小豆药材按干燥
品计算,总三萜类成分的含量以齐墩果
酸(C30 H48 O3)计,不得低于 0. 40%,为
完善赤小豆药材的质量标准提供依据。
三萜类成分是赤小豆药材利尿作用
的主要有效成分[4],赤小豆 Vigna um-
beuata 样品的平均总三萜含量为 0.
56%,赤豆 Vigna angulari样品的平均总
三萜含量为 0. 48%,认为赤小豆 Vigna
umbeuata的利尿作用强于赤豆 Vigna
angularis。符合李时珍《本草纲目》“以
紧小而赤黯色者入药”的观点,也与经
验认为“赤小豆入药为良”的观点一致。
总三萜含量最高的产地为广西百色
0. 69%,对药用赤小豆规范化种植选择
栽培地点有一定指导意义。
参考文献:
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 2