全 文 ：一九九三年六月
《夭然气产物研究与开发》
N A T飞服 A L P R O D [J ℃T R ES E A R C H A N D D E V E L O P M E N T V o l . 5 N o . 2
粉葛采收与加工的研究 ’
仲 耘 陈碧珠 傅桂香 顾志平
(中国医学科学院药用植物资源开发研究所 北京 1 0 0 0 9 4)
摘 共 本文利用紫外分光光度法 ,高压液相色谱法对粉葛总黄酮及 5 种异黄酮进行跟踪含
t 侧定 ,对其采收时间与加工方法进行详细的研究 。 认为采收时间从 1 月底到 2月初为宜 , 加
工方法以不去皮为好。
关锐词 粉葛 ,异黄酮 ,紫外分光光度法 ,高压液相色谱法 ,采收与加工
葛根为常用中药 ,异黄酮化合物是葛根及其同属植物根中的主要成份 。 近代药理实验
证明葛根黄酮具有对血压的双向调节作用 , 抗心律失常 , 改善脑循环及外周循环 ,压受体
阻断等多种药理活性 ,对多种临床疾病有显著的疗效闭 . 日本学者曾以黄豆贰 ,黄豆贰元
及其特有成份葛根素作为评价葛根的指标闺 。
中华人民共和国药典收载葛根为豆科葛属粉葛 ( P劝e r ar 认 如m so iln eB n ht . ) 及野葛 ( .P
OL ba at ( w il d) hO w L )
。 粉葛广泛分布于广东 、 广西 、 海南 、 四川 、 云南等地 , 以农 田载培 为
主 。 据我们调查 ,农民采收粉葛都是凭经验于 12 月底至 2 月初采收 ,采收之后加工方法分
去皮与不去皮两种 。
为了科学 、 合理的对质量进行评价和控制 , 我们对广西 ,平南栽培粉葛的总黄酮及其
中 5 种异黄酮含量进行跟踪含量测定 ,对其采收时间及加工方法进行详细研究 。 结果认
为 ,黄酮含量在 1 月底 2 月初最高 ,加工之后带皮粉葛比去皮粉葛黄酮含量要高 。
实验部分
一 、仪器与药品
1
.
75 1紫外分光光度计 (上海分析仪器厂 )
2
.
w
a
etr
:
50 1泵 ;岛津 s DP 一 ZA 紫外检测器 ; CD M C 一数据处理机 (上海计算机研究所 .)
色谱柱 z y 1 1 0 Y QG 一 c 1 8 ( 5林m , 4 . 4义 2 50 n m ) ;微量注射器 ( 1 0林一,上海医用激光仪器厂 ) 。
溶剂与试剂均为分析纯 。 对照品由日本株式会社及中国医学科学院药物研究所植化
室提供 。
收稿日期 : 1 , 9 3 年 2 月 8 日
Vol
。
5N
o
.
2
二 、总黄酮含t 测定
按照中国医学科学院药物研究所报导的紫外分光光度法闭 , 以葛根素计算 ,测定总黄
酮含量。 最大吸收为 2 5 。。 m ,线性范围为 9昭 l/ .
样品测定 比较了下列方法的提取效率 : A . 超声波振荡 1 小时 ; B 、 超 声波振荡 30 分
种 ; C . 超声波振荡 15 分种 ; D . 沸水溶加热 10 分种 ; E . 加热回流 30 分种 (结果见表 1 ) 。
表 1 不同提取方法的比较
方 法 总黄酮含量 ( % )
A B C D E
光密度 0 . 5 7 2 0 . 5 8 3 0 . 5 6 2 0 . 5 8 8 0 . 5 9 5
含量 (% ) 1 1 . 2 2 1 1 . 4 4 1 1 . 02 1 1。 5 4 1 1 . 6 8
另外分别重复 6 份样品比较超声波振荡 30 分种与药物所报导的加热 10 分种的方法
进行 比较 (结果见表 2 ) 。
表 2 不同样品提取方法比较
方 法 总黄酮含量 ( % )
样 品 l 2 3 4 5 6
. 一
加热 1 0分钟 1 . 3 0 1 . 3 3 1 . 0 9 0 . 2 3 1 . 1 0 0 . 4 5
超声波振荡 30 分种 1 . 2 8 1 . 3 0 1 . 1 0 0 . 2 5 1 . 1 1 } 氏 “
测定结果基本一致 。 因超声波振荡方法简便 , 故彩用此法 。
三 、 粉截中 5 种异黄酮成份的含 t 测定
应用高压液相 色谱法 测定粉葛中葛根 素 p ue r ar in ( 1 ) , 3, 一 甲氧基葛根 素 31 一 m et h xo y -
p u e r a r i n ( 2 )
, 黄豆贰 d a id z i n ( 3 ) ,黄豆贰一 4 ’ , 7一二葡萄糖贰 4 , , 7一 d i h y d r o x y s s o r一a v o n e ( 4 ) ,黄豆
试元 血记 z e i n ( 5 )的含量 。
1
. 实验条件
紫外检测波长 2 50 n m ; 灵敏度 0 . 0 4 A a F S ;流动相流速 0 . s m l/ m in ; 柱温 , 室温 ; 纸速 .
2
.
0 m m / m i n ;压力 , 2 5 0 0p s i 。 流动相 ( 1 )舔O H一 H 2 0一 C H ZC I: 一 N H . A e ( 2 ) M e O H一 H : o 一
N H ; A e
。
由于黄豆贰元与上述其它 4 种异黄酮极性差别较大 ,样品中含量也相差极大 , 用流动
相 ( 1 ) , 既使改变流速至 1 . 5阎 / m in ,洗脱时间也要在 1 小时之后才能完成 。 因此用流动相
( 2) 进行液相层测定之 。
2
. 标准曲线与线性范围
①葛根素 :
y = 1 5 1
.
2 9 7 6 x 一 0 . 0 1 8 3 r 一 O, 9 9 7 8 ( 。 二 6 ) 线性范围 < 0 . 0 3协s
② 31 一甲氧基葛根素 :
y 一 7 0 . 1 1 2 5 x + 0 . 12 5 9 r = 0 . 9 9 7 5 ( n 一 4 ) 线性范围 < 0 . 0 8 林g
③黄豆贰 :
8, 1
y~ 1 4 6
.
2 2 0 4x + 0
.
0 3 4 3 8 r二 0 . 9 9 8 9 ( n一 5 )
④黄豆贰元 : 一于 , 7一二葡萄糖贰
y ~ 5 8
.
7 8 3 7 x 一 0 . 0 8 5 4 0 r = 0 . 9 9 9 9 ( n 一 5 )
⑤黄豆贰元 :
y ~ 1 6 9
.
4 5 7 1x ` 0 . 3吞3`1 , r = 0 . 9 9 9 7 ( n = 5 )
3
. 分离度
葛根素与黄豆贰元的分离度 4 . 1 1 ;葛根素与
氧基葛根素与黄豆贰的分离度为 2 . 45 。
4 `精密度见表 3 。
表 3 精密度试验
V o l
.
5 N o
.
2
线性范围< 0 . 0 15 阳
线性范围< 0 . 0 2鸿
线性范围< 0 . 0 1昭
3 ` 一 甲氧基葛根 素的分离度 1 . 8 2 ; 31 一甲
异黄酮含量 ( % )
葛根素 3, 一甲氧基 黄豆贰 黄豆贰 4` . 7 - 黄豆贰元
葛根素 二葡萄糖贰
进样量 (林g ) 0 . 0 1 6 0。 0 0 6 4 0 . 0 0 9 6 0 . 0 1 2 8 0 . 0 0 8刁
样品数 8 7 5 7 7
变异系数 (% ) 2 . 2 1 2 . 8 6 2 . 5 9 2 . 7 7 1 3 5
5
. 提取方法 比较
按照总黄酮提取方法 , 同时与赵世萍 [’] ,用 70 %二醇溶液回流提取 1小时方法进行
对比 。 (结果见表 4 ) 。 决定超声波方法提取 。
表 4 提取方法的比较
异黄酮含量 (% )
葛根素 黄豆贰 黄豆贰
中 一 7 -
二葡萄糖贰
超声波振荡
热回流
0
.
4 1 0
.
1 3 0
.
0 6 2
0
.
3 1
3,
一甲氧基
葛根素
0
.
3 2
0
。
2 6 0
.
1 0 0
.
0 7 7
6
. 回收率
粉葛粉末加吞精确量葛根素 。 按上述方法测定含量 。 重复 3次 。 葛根素加样回收率
为 1 0 0 . 3 0% 。
粉葛采收时间的研究
据我们在广西粉葛农田栽培场地调查 , 一般在春季扦插到地里 , 于当年 12 月至次年
1 月底 2月初采收 , 由于农民个人经验及其它作物种植管理情况不同 , 采收时陆陆续续延
续 2 个月时间 。 为了观察采收时间与黄酮成份之间的关系 ,我们于 1 9 8 8年 9 年 2 月期间 ,
在广西平南 , 大新乡 ,福安村粉葛栽培地 ,每月 l一 2 次定期采收随机样品 3一 4 份 ,共采收
Vo l
.
5N o
.
2
8次不去皮烘干 , 测定其总黄酮含量及异黄酮含量 (结果见表 5 ) 。
表 5 采收时间比较
采 收 黄酮含量 (沁 )
时 间 样品数 葛根素
3
一甲氧基 黄豆贰 黄豆贰 中 , 7 - 黄豆贰元 总黄酮
葛根素 二葡萄糖试
9 月 1 9 日 l (发霉 ) 0 0 1 9 0 , 0 0 0 5 6 0 . 0 00 7 5 0 . 0 1 0 0 , 0 6 8
9 月 2 8 日 l 0 . 2 5 0 , 0 1 8 0 . 0 0 9 5 0 . 6 0
10 月 3 0 日 4 (花期 ) 0 . 3 7 0 . 0 1 7 0 . 0 2 3 0 . 0 1 7 1 . 4 5
1 2 月 4 日 3 0 . 4 3 0 . 0 4 2 0 . 0 2 5 0 . 0 13 0 . 9括
1 2 月 2 9 日 3 0 . 2 1 0 . 0 1 3 0 . 0 2 6 0 . 0 2 3 0 . 0 1 2 0 . 5 8
I 月 3 0 日 4 0 . 6 9 0 . 0 4 5 0 . 0 4 3 0 . 0 4 3 0 . 0 1 1 ] . 0 5
2 月 2 8 日 4 0 . 5 1 0 . 1 8 0 . 1 0 0 . 1 3 0 . 0 2 4 1 . 月5
结果表明 , 9 月中间 ,其总黄酮及各异黄酮含量均很低 ,这后数月明显逐渐升高 , 1一 2
月含量最高 。 尤其是葛根素 。 黄豆贰元 一 4) , 7 一二葡萄糖贰和 31 一 甲氧基葛根素的含量在 1
月以前的样品中在检测量之下 ,或几乎在检测量下 。 但在 2 月份 , 其与黄豆贰在样品中的
含量明显增加 。 黄豆贰元 , 可能由于与贰分解的控制有关 , 7 份徉品含量有高有 低 . 但总趋
势也呈逐渐升高 ,而且 2 月份固定在最高含量 。 可见 , 粉葛采收时间在 1 月底 , 2 月初为合
适 ,如果能集中在 2 月份 , 葛根的质量更好 。
粉葛加工方法的研究
据我们调查 ,粉葛加工方法 , 采收当年生粉葛 ,清水洗净 , 多刮去外部褐色皮 ,纵切成
片块 , 或再横切成长方形小片块 , 用硫磺熏后 , 晾干或烘干 。硫磺烟熏可以达到防腐增白的
效果 。 也有不去皮而将完整根部烘干或晾干 。 因此我们对刮去外皮 (简称去皮 )的粉葛与
不去皮 (简称带皮 )的粉葛分别进行含量测定 , 比较其质量 。
1 9 8 8 年 l 月 , 在广西壮族 自治区平南县大新乡的粉葛栽培地 , 将刚采收的粉葛 , 随机
取大小相近的葛根样品 , 一组去皮 , 一组带皮 ,分别各取 5一 7 份 , 烘干 。 测其总黄酮与 5 种
异黄酮的含量 (结果见表 6 ) 。
表 6 加工方法的比较
样品数 黄酮含量 ( % )
葛根素 3 一甲氧基 黄豆贰 黄豆 夕 , 7 - 黄豆贰元 J急黄酮葛根素 葡萄糖贰
去 皮 7 0 . 4 5 0 . 0 9 4 0 0 6 9 0 . 0摺l 0 . 0 1 9 } 1 . 1 3
带 皮 5 0 . 4 5 0 . 0 1刁 0 . 0 3 3 0 . 0刁1 0 . 0 ] 6 0 . 5 8
结果表明 ,虽然葛根素 、 黄豆贰元的含量带皮组与去皮组基本相似 ,但是 ,其它 3 种异
黄酮 31 一甲氧基 一葛根素 ,黄豆试 ,黄豆贰一 4` , 7 一二葡萄糖贰含量带皮组均 比去皮组高 。 由此
Vo l
`
5 No
.
2
可以推测粉葛中黄酮成份在皮部有很大分布 , 将外皮刮去将是一大损失 , 所以粉葛去皮保
存的加工方法有待进一步商榷 , 我们的意见是不去皮比去皮质量为佳 。
结 论
1
. 关于粉葛采收时间 , 经过含量测定 ,粉葛从 9 月至次年 2 月 ,其总黄酮及上述 5 种
异黄酮含量呈增加趋势 , 以二月最高 , 由于考虑二月下旬农 田要改种其它作物 , 所以 1 月
底 2 月初为最佳采收期 。 如果集中在 2 月采收 , 质量更好 。
2
. 传统粉葛加工方法为去皮后干燥 ,我们实验结果表明 ,带皮粉葛的总黄酮及其异黄
酮含量比去皮粉葛含量要高 。 因此认为去皮的加工方法应予以改进 ,带皮粉葛质量更好 。
[ l〕
[ 2〕
参 考 文 献
瘫林 : 葛根的实验研究与临床应用新进展 ,中国中药杂志 , 4 ( 5 ) : 5 2 ( , 。。 ) , 1 089
H
.
J u n K o et a l
: s t u d治 o n Ph y笋Ic司 an d e h e n u c a l q u a l i t y e v a lu a t i o n o f e r u d e d r u g e P r e阵 r a t i o n s , I·
A an l羚15 of UP e rar 运 r a 山 x a n d s户沁 Ies Pue r a r址 . Y a k u as k u Z孙 s h i 1 0 4 ( l ) , 5 0一 6 , 1 9 8 4 .
中国医学科学院药物研究所 :葛根及其制剂— 愈风宁心片 (葛根片 ) 。 药学学报 , 1 5 ( 7 ) : 刁o ,
1 9 8 0
赵世萍等 : 蕊根中异黄酮含量的薄层光密度法测定 。 药学学报 2 0 ( 3 ) : 2 0 3一 2 08 , 1% 5
,
`
J.O口月,一.rL. J
S T U D Y O F G E T H E R IN G A N D P R O C E S S IN G O N G E G A N
Z h o n g Y u n
,
Ch e n B止 h u , F u G u 议 i a n g , G u Z h i Pi n g
(而度放血 of 对州淤臼喇 尸阮” 亡伪砚戚 〕产洲“ , C肠`脱 乃之勿如 n刃 oj M州介成 阮。哪 , 庚勺啊 1 0 0 0 9 ,1)
A怡 t r` c t Th is p a pe r dae l w it h ht e 喊加 a t i o n of e o n t e n t o f t o at l f al v o n o id s b y m e a n s of U V a n d
5 is of l
a v o n o id s by H P L C o n r a d ix o f uP
e r a r扭 th o m os n i i eB n ht , 7 tim e s i n 6 m o t h s i n s u e Ces i o n
.
i n o r de r t o P r o v i d e a m e ht ol o gy of 解ht e r in g a n d P r oc e S i n g f份 ht e t r a d i t io n a l C h i n e se d r u g
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.
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s f o u n d t h a t ht e P r oc es m
e t h od o f b r i n g e o r et x 15 be t et r t h a n t h a t o f sa r i n g e o r t
e x
.
T h e P i r od t im e of e o ll e e it n g 15 bo t t e r f rom ht
e e n d o f J a n u a r y t o ea
r l y F e b u a r y
.
K e y W
o r山 P u e r a r协 t h o m s on 五 , j加 f l a v o n o id s , U V , H P L C , g e th e r i n g a n d P r oc e s in g