全 文 ：第 4 期 程军 等 川产道地药材梭果黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定
2010 年 12 月第 33 卷第 4 期 成都中医药大学学报
Dec. 2010，Vol. 33，No. 4 Journal of Chengdu University of TCM
中 药 研 究
川产道地药材梭果黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和
芒柄花素的含量测定
程军1 夏厚林1 邓跃宁2 黄立华1 卢先明1
( 1. 成都中医药大学 中药材标准化教育部重点实验室，四川 成都 610075; 2. 四川省中药材责任有限公司，四川 成都 610091)
摘 要: 目的: 建立梭果黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素含量测定方法，为完善梭果黄芪
的质量标准提供依据。方法: Agilent TC-C18 ( 4. 6 mm ×250 mm，5 μm) 色谱柱; 以乙腈为流动相 A，以
水 ( 含 0. 2 %甲酸) 为流动相 B，梯度洗脱; 检测波长 260 nm; 柱温 30 ℃ ; 流速 1. 0 mL /min; 进样量 10
μL。结果: 毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的线性回归方程分别为 Y = 30. 025 X + 5. 1096 ( r = 0. 999 7)
和 Y =58. 24 X-94. 279 ( r = 0. 999 7) ; 线性范围分别为 5. 52 ～ 110. 40 μg /mL和 5. 54 ～ 110. 72 μg /mL; 样
品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的总量在 0. 0053% ～ 0. 0179%之间。结论: 本实验建立的毛蕊异黄
酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法简便、准确，可用于梭果黄芪药材中黄酮类成分的质量控制。
关键词: 梭果黄芪; 毛蕊异黄酮葡萄糖苷; 芒柄花素; 含量测定
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1004-0668 ( 2010) 04-0065-03
基金项目: 四川省中药材标准起草说明项目 ( 编号: 川食药监注 ［2008］ 21 号)
作者简介: 程军，男，1985 年生，硕士研究生; 通讯作者: 夏厚林，男，1964 年生，教授，博士生导师; 研究方向: 中药
药效物质基础及质量标准研究。
Determination of Calycosin-7-O-β-D-glycoside and Formononetin in
Astragalus E rnestii Comb from Sichuan Province
CHENG Jun1 ，XIA Hou-lin1 ，DENG Yue-ning2 ，et al
( 1. Chinese Traditional Medicine Standardization Lab，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu Sichuan，610075，China;
2. Sichuan traditional Chinese medicine responsibility Limited company，Chengdu Sichuan 610091，China)
［Abstract］ Objective: To establish the quantitative methods for calycosin-7-O-β-D-glycoside and formononetin in Astragalus
ernestii Comb，in order to consummate a quality standards for medicinal Astragalus ernestii Comb. Methods: The HPLC condition was
as follows: column: Agilent TC-C18 250 mm × ( 4. 6 mm，5 μm) ，mobile phase: A was ACN，B was H2O-0. 2 % HCOOH，with
gradient elution; flow speed: 1. 0 mL /min; detection: 260 nm; temperature of column: 30 ℃ ; injection volume: 10 μL. Results:
The calibration curves were linear within the range of 5. 52 ～ 110. 40 μg /mL for calycosin-7-O-β-D-glycoside and 5. 54 ～ 110. 72 μg /
mL for formononetin ，with their regression function being Y = 30. 025 X + 5. 1096 ( r = 0. 999 7 ) and Y = 58. 24 X-94. 279 ( r =
0. 999 7) ; The content s of calycosin-7-O-β-D-glycoside and formononetin in Astragalus ernestii Comb were 0. 0053% ～ 0. 0179%.
Conclusion: HPLC is a simple and accuracy method for determining the contents of calycosin-7-O-β-D-glycoside and formononetin in
Astragalus ernestii Comb.
［Key words］: Astragalus ernestii Comb; calycosin-7-O-β-D-glycoside; formononetin; Determination
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DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2010.04.022
成都中医药大学学报 2010 年第 33 卷
梭果黄芪为豆科植物梭果黄芪 Astragalus
ernestii Comb. 的干燥根，味甘性温，具有补气固
表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效［1］。在四
川常代替药典黄芪使用， 《四川省中药材标准》
收录该品种。黄酮类成分为梭果黄芪的有效部
位［2］，主要由异黄酮和异黄酮苷组成，据报道毛
蕊异黄酮葡萄糖苷和毛柄花素为含量较高的活性
成分［3］。黄酮类成分的含量测定方法主要有分光
光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法［4-5］等。
本文采用高效液相色谱法，同时测定梭果黄芪中
黄酮类成分毛蕊异黄酮葡萄糖 ( calycosin-7-O-β-
D-glycoside) 和芒柄花素 ( formononetin) 含量。
1 仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent
公司) ，包括 VWD 检测器，Agilent 色谱工作站;
十万分之一电子天平 ( 瑞士 Mettler Toledo 公司) 。
乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析
纯。
毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素对照品为自
制，经归一法求得纯度大于 98%。药材购于西南
药都，共 9 批，经成都中医药大学药用植物教研
室卢先明教授鉴定为梭果黄芪 Astragalus ernestii
Comb. 的干燥根。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件与系统适应性
Agilent TC-C18 ( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm )
色谱柱，流动相以乙腈为流动性 A，以水 ( 含
0. 2 %甲酸) 为流动相 B，梯度洗脱 ( 见表 1 ) ;
检测波长为 260 nm，柱温 30 ℃。理论塔板数按
毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰峰计算应不得低于 3000，
分离度大于 1. 5。色谱图见图 1。
表 1 流动相的梯度变化
时间 ( min) 流动相 A ( % ) 流动相 B ( % )
0 ～ 15 20→21 80→79
15 ～ 20 21→40 79→60
20 ～ 40 40 60
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素对
照品适量，加甲醇溶解，制成每 1 mL 含毛蕊异
黄酮葡萄糖苷 27. 60 μg 和芒柄花素 27. 68 μg 的
溶液，摇匀，即得。
2. 3 供试品溶液的制备
取梭果黄芪药材粉末约 2 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 100 mL，称定重量，
加热回流 4 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足
减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 80
mL，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至 5
mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
A 对照品色谱图 ( 1: 毛蕊异黄酮葡萄糖苷; 2: 芒柄花
素) ; B 梭果黄芪药材色谱图
图 1 对照品及梭果黄芪药材的 HPLC色谱图
2. 4 准确度试验
精密称定已知含量的同 1 批样品 ( 样 2 ) 6
份，每份约 1 g，分别精密加入毛蕊异黄酮葡萄
糖苷 138 μg和芒柄花素 83 μg，按供试品制备方
法制备，测定，结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均回
收率为 98. 21 %，RSD 为 2. 86 % ; 芒柄花素平
均回收率为 103. 37 %，RSD为 2. 41 %。
2. 5 重复性试验
取同 1 批次药材粉未，精密称取样品 6 份，
按 2. 3 项下制备供试品，分别进样 10 μL，测定。
测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均含量为 0. 0074 %，
RSD为 0. 86 % ，芒柄花素平均含量为 0. 0042
%，RSD为 1. 74 %。
2. 6 线性考察
分别取对照品溶液 2 μL、5 μL、8 μL、
10 μL、25 μL、40 μL 注入液相色谱仪。以进样
量 ( μg) 为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准
曲线，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的回归方程为 Y =
30. 025 X + 5. 1096 ( r = 0. 999 7 ) ，表明毛蕊异黄
酮葡萄糖苷在 5. 52 ～ 108. 42 μg 之间，进样量
( μg) 与峰面积呈良好的线性关系。芒柄花素的
回归方程 Y = 58. 24 X-94. 279 ( r = 0. 999 7 ) ，表
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第 4 期 程军 等 川产道地药材梭果黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定
明芒柄花素在 5. 54 ～ 110. 72 μg 之间，进样量与
峰面积呈良好的线性关系。
2. 7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在 0，4，8，14，
24 h检测。结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积 RSD
为 1. 86 %，芒柄花素峰面积 RSD为 1. 95 %，表
明供试品在 24 h内具有良好的稳定性。
2. 8 样品测定
将收集到的梭果黄芪样品依法测定，结果见
表 4。
表 4 梭果黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和
芒柄花素的含量测定结果 ( n = 3)
药材
编号 收集日期
毛蕊异黄酮
葡萄糖苷 ( % )
芒柄花素
( % )
毛蕊异黄
酮葡萄糖
苷和芒柄
花素总量 ( % )
样 1 2008-12 0. 0029 0. 0024 0. 0053
样 2 2008-12 0. 0074 0. 0042 0. 0117
样 3 2008-12 0. 0139 0. 0031 0. 0170
样 4 2009-02 0. 0033 0. 0086 0. 0119
样 5 2009-03 0. 0117 0. 0021 0. 0137
样 6 2009-03 0. 0095 0. 0018 0. 0113
样 7 2010-03 0. 0089 0. 0023 0. 0112
样 8 2010-03 0. 0089 0. 0022 0. 0111
样 9 2010-03 0. 0145 0. 0033 0. 0179
3 讨论
3. 1 研究证实黄酮类成分具有清除氧自由基
抑制脂质过氧化和保护缺血再灌注损伤等多
种药理活性［6］。对梭果黄芪中黄酮类代表成分毛
蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素进行含量测定，不
仅可进一步完善其质量标准，而且为临床应用提
供科学依据。
3. 2 毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素在化学结
构中的差异
为 3-OH 和 7-D-glucoside，采用等度洗脱方
法同时测定二者的含量较困难 ［7］。我们采用梯度
洗脱的方法同时测定二者含量，具有简便、快
速、准确等特点。
3. 3 实验表明梭果黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷
和芒柄花素的总量在 0. 0053 % ～ 0. 0179 %之间，
平均为 0. 0124 %，样 1 发生虫变，其含量较低，
建议二者总量不得少于 0. 01 %。
参考文献
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酮成分的反相高效液相色谱分析 ［J］ . 药学学报，
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( 收稿日期: 2010-04-20)
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