全 文 ：第 23卷第 2期 (第 1页)
2006年 　　 　　 湖北民族学院学报 医学版Journa l o fH ube i Institu te forN ationalities Medica l Edition　　 　　　Vo .l 23 No. 2 P. 12006
基金项目　湖北省自然科学基金项目 [ 2005] 28 -2005ABA197
作者简介　黄德斌(1966 - ),男 , 湖北恩施人 ,副教授 , 主要研究方向:神经药理 。
鬼箭羽三种提取物对氧自由基作用的影响
黄德斌 ,余昭芬
湖北民族学院医学院药理学教研室(湖北 恩施 445000)
【摘要】目的　观察鬼箭羽(Euonymu sA la tus, EA)主要提取物对氧自由基的影响。方法　从鬼箭羽中分离出总黄
酮 (To ta l F lavonolds o f Euonymus A la tus, TFEA)、总甾体(To tal S te ro ids of Euonym usA latus, TSEA)和总多糖(Tota lPo l-
y saccharide of Euonym usA la tus, TPEA),利用黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶(Xanthine /Xan thine ox idase, Xan /XO)和多形核白
细胞(Polym o rphonuc lear leaukocy te s. PMN)呼吸爆发介导鲁米诺化学发光(Chem lum ine sence, CL)体系 H2O2诱导大
鼠肝匀浆脂质过氧化体系进行实验 ,观察 3种成分对氧自由基作用的影响。结果　TFEA和 TSEA有良好的清除氧
自由基作用 , 其中 TFEA效果最好 , TSEA次之。结论　鬼箭羽提取物具有抗氧化作用 , 其主要成分是 TFEA、TSEA
和 TPEA。
【关键词】鬼箭羽提取物;抗氧化;总黄酮;总甾体
【中图分类号】R285. 5　　【文献标识码】A　　【文章编号】1008 - 8164(2006)02 -0004 - 03
The E ffects of the Chief Components Isolated from Euonymus
A latus on ScavengingO xygen Free Rad ica l
HUANG De - bing, YU Zhao - fen
(Department of Pharmacology, Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000 , China)
【Abstract】Objec tive To observe the effect of the ch ief components iso lated from Euonymus
A latus on scaveng ing oxygen free rad ica.l M ethods Tota l F lavono lds of Euonymus A latus
(TFEA)、 tota l S tero ids of Euonymus A la tus (TSEA) and total Po lysaccharide of Euonymus A la-
tus (TPEA)were iso lated from Euonymus A latus, the effect ofwhich on scaveng ing oxygen
free rad ica lw ere stud ied us ing Lum ina l chem ilum inescence (CL) em itted by Xanth ine /Xan-
th ine ox idase (Xan /XO) and Phorbo l- 12 -myr istate - 13 - acetate (PMA) stmi u lated Po ly-
morphonuclear leaukocytes (PMN) and lip id - perox idation of rat liver homogenate induced by
H2O2 - Fe
2+
. Results It show ed that both TFEA and TSEA possessed the ab ility for scaveng ing
oxygen free rad ica.l The effect of TFEAw as stronger than that of TSEA. Conc lus ion:Euonymus
A latus possessed the ab ility for scavenging oxygen free rad ical, its the ch ief components are
TFEA , TSEA and TPEA.
【Keywords】Euonymus A latus components;anti- ox idase;TFEA;TSEA
　　鬼箭羽 (Euonymus A la tus, EA)系卫茅科植物 ,
为重要的益气中草药 。现代药理研究该药物有抑制
变态反应 、降低血糖等广泛的药理作用[ 1, 2] 。我们
从中分离提取出鬼箭羽总黄酮 (To tal F lavonolds of
Euonymus A latus, TFEA)、总皂甙 (To tal Stero ids of
EuonymusA latus, TSEA)和总多糖 (Tota l Po ly saccha-
ride of Euonymus A latus, TPEA)三种成分 ,研究三
者的抗氧自由基作用。现报道如下:
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　药物 　鬼箭羽购于湖北省医药公司 ,按文
献[ 2, 3]分离出 TFEA、TSEA和 TPEA等 3种成分备
用。
1. 1. 2　试剂　鲁米诺 (Lum ino l)为 Merck - Schue-
hard公司产品 (0041108),黄嘌呤 (西德 Serra,进分
27268),佛波醇酯 (PKC激活剂 , Pho rbol - 12 -my-
ristate - 13 - aceta te, PMA)系 Sigma 公司生产
(001218),淋巴细胞分离液 Dex tran70(0021024)、
Ficoll(0030616)为 Pharmacia公司产品 ,四乙氧基丙
烷 (TEP, 0021122)系 Fluka产品 , 硫代巴比妥酸
(TBA)为上海试剂二厂生产 (0030919),黄嘌吟氧
化酶(X anthine oxidase, XO)为南京建成生物工程
研究所产品 (0030823),其它实验试剂均为国产分
析纯。
1. 1. 3　动物　W iste r大鼠 ,购自湖北省实验动物中
心 ,体重 220 ～ 250 g。
1. 1. 4　仪器　上海精密科学仪器有限公司 756MC
紫外分光光度计;WDD -1发光测试仪(北京第二光
学仪器厂生产);650 - 60荧光分光光度计 H itachi,
LTD , Tokyo Japan产品。
1. 2　方法
1. 2. 1　肝匀浆的制备　参照文献 [ 3] , ♂大鼠 10
只断头处死 ,立即取出肝脏 ,置 4℃生理盐水中 ,洗
去表面残血 ,并用滤纸吸干 ,制成 5%生理盐水肝匀
浆液 ,将此液分成等容量的对照组 、TFEA组 、TSEA
组和 TPEA组 ,每组 10份 。
1. 2. 2　清除氧自由基 (O -2 )的测试条件　参见文
献 [ 3, 4] , X an和 Lum ino l分别用 pH 10. 2, 50mmo l /L
碳酸盐缓冲液配成 0.2mmo l /L溶液 ,用时按 1∶1混
匀 , 50μlXO启动反应(反应总体积为 1. 0m l),先记
录第 1m in发光值后 ,再加入药物记录发光值 ,并计
算其发光抑制率 ,观察药物对的清除能力 。
1. 2. 3　丙二醛(MDA)的测试　按 R ielys法 [ 3, 4] :将
药物用生理盐水稀释 ,取 0. 2m l, 5%肝匀浆 1.5m l
(对照组以生理盐水替代), 37℃水浴 15m in,每管加
H2O2 0.1m l(对照组加生理盐水 )使终浓度为 1
mmo l /L, 37℃水浴 30m in,加 MDA显色液终止反应 ,
放 100℃水浴 , 30m in,冷却后离心 1500 r /m in, 15m in。
取上清液于分光光度计 , 532 nm波长处比色 ,以 TEP
为标准浓度 ,计算每克肝组织 (湿重 )MDA的生成
量。
1. 2. 4　多形核白细胞 (Polymorphonuc lear leauko-
cytes. PMN)呼吸爆发介导鲁米诺 CL的测试 按文
献[ 3, 4]制备 106mmo l /L的 PMN ,取 PMN 1.0m l, 0.1
mmo l /L Lum ino l,用磷酸钠缓冲液 (PBS)调总体积
至 1.95m l,加 50μl PMN启动呼吸爆发 ,立即置于
WDD -1发光测试仪 (北京第二光学仪器厂生产 )
观察发光值 ,绘出不同时间发光值变化曲线 。
2　结果
2. 1　对 Xan /XO鲁米诺 CL体系影响　结果显示
TFEA、TSEA和 TPEA均可降低其发光强度 ,其中
TFEA清除作用最强 , TSEA次之 , TPEA最弱。见图
1。
图 1　鬼箭羽三中提取物对 Xan /XO鲁米诺 CL
抑制率的作用(x ±s, n =10)
2. 2　对 H2O 2诱导脂质过氧化物生成的影响　实
验结果发现 TFEA和 TSEA可显著地抑制 H2O2引
起的 MDA的生成 (P <0.01), TPEA随浓度增高其
抑制作用反而下降 ,使 MDA生成量反而有所增高。
见表 1。
表 1　鬼箭羽三种提取物对 H2O2诱导脂质过氧化的影响(MDA nmo l /g肝湿重 , x ±s, n =10)
成分 药物剂量(m g /L)
0. 00 52. 59 81. 84 112. 39
TFEA — 198. 46±7. 32** 123. 35±31. 52** 91. 41±6. 38**
TSEA — 312. 63±12. 54** 251. 37±8. 34** 121. 35±12. 31**
TPEA — 342. 42±10. 58** 402. 13±8. 47* 469. 25±7. 37
NS 498. 38±96. 31 — — —
　　*P<0. 05, **P<0. 01,与 NS组比较
2. 3　对 PMN呼吸爆发介导的鲁米诺 CL的影响　
结果发现 TFEA和 TSEA对 CL有显著的抑制作用 。
其中 TPEA对 CL的抑制作用较弱 ,并随其浓度的增
高而作用强度降低 。其发光强度随时间增加而逐渐
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增强 , 12 ～ 20m in达到高峰 ,而后渐渐降低 。见图 2
～ 4。
图 2　TFEA对 PMA刺激 PMN产生 CL的影片
图 3　TSEA对 PMA刺激 PMN产生 CL的影响
图 4　TPEA对 PMA刺激 PMN产生 CL的影响
3　讨论
在有氧条件下 , XO催化 Xan生成尿酸并释放
O
-
2 等自由基 , O -2 与发光剂鲁米诺反应 ,使鲁米诺进
入激发态 ,当返回基态时 ,放出光子 ,产生化学发
光 [ 3] 。因此 ,具有清除O -2 活性的物质均可降低其发
光强度 。本实验证实鬼箭羽三种提取成分 TFEA、
TSEA和 TPEA能显著降低其发光强度 ,具有清除活
性O -2 作用。
人体内存在大量不饱和脂肪酸 ,极易受自由基氧
化产生脂质过氧化物 ,其最终产物是 MDA ,而 H 2O2
对机体细胞的损伤是通过形成 OH所致 [ 4, 5] 。生
理状态下肝组织细跑中含有一定量的铁离子 , 当
H2O 2加入后 ,通过 Fentons反应释放 OH ,迅速引
发脂质过氧化反应链 ,产生 MDA。本研究证实鬼箭
羽主要成分 TFEA和 TSEA可显著地抑制 H2O2引
起的 MDA生成 ,而 TPEA随其浓度增高而抑制作用
下降 ,使 MDA生成量反而增高 ,可能是 TPEA具有
免疫增强作用 ,可提高白细胞和巨噬细胞的吞噬指
数[ 3, 6] ,而肝匀浆中含有部分免疫活性细胞 ,当这些
免疫细胞受到刺激后 ,在释放免疫因子的同时 ,释放
活性氧 [ 3] , 活性氧进一步引发脂质过氧化 , 生成
MDA。
PMA可作用于 PMN膜上的 PKC引起呼吸爆发
而释放大量活性氧自由基 ,鲁米诺受自由基激发 ,导
致 CL[ 3, 7] ,因此 ,凡能清除O -2 和 OH的物质 ,皆可
改变其发光曲线。鬼箭羽提取成分 TFEA和 TSEA
对 CL有显著的抑制作用 ,表明其具有清除O -2 和
OH的作用 , 可防止生物膜的脂质过氧化 。其中
TFEA的作用明显优于 TSEA ,是鬼箭羽最强的抗氧
化活性成分 ,而 TPEA清除氧自由基的能力较弱 ,并
随浓度增高而作用强度降低 ,不宜单独作为自由基
清除剂使用。相关作用机制有待进一步研究 。
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[收稿日期 2006 -02 - 10]
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