全 文 ：［收稿日期］ 20121121(610)
［基金项目］ 国家重点基础研究发展计划 (973)项目
(2010CB530600)
［第一作者］ 张开霞，硕士研究生，Tel:010-64014411-2938，E-
mail:zhangkaixia － 01@ 163. com
［通讯作者］ * 刘安，副研究员，硕士生导师，从事中药化学研
究，Tel:010-64014411 － 2938，E-mail: la62
@ 163. com
HPLC测定粉葛饮片中 3 种黄酮类成分的含量
张开霞1，2，章军1，荆文光1，王跃生1，刘安1*
( 1. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700; 2. 江西中医学院，南昌 330006)
［摘要］ 目的:建立 HPLC同时测定粉葛饮片中葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆苷 3 种黄酮类成
分含量的方法。方法:采用 Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以甲醇-0. 02%磷酸(25∶ 75)为流动相，检测波长
250 nm。结果:精密度、稳定性和重复性合格，3 个成分的线性范围分别为 0. 123 ～ 0. 737，0. 024 9 ～ 0. 150，0. 021 7 ～ 0. 130 μg，3
个成分的平均回收率分别为 99. 4%，99. 0%，99. 1%，测定了 4 批粉葛饮片中 3 个成分的含量。结论:该方法简便、快速、准确
度高，可为粉葛饮片的质量控制提供参考依据。
［关键词］ 粉葛;葛根素;大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷;大豆苷;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)06-0078-03
Determination of Three Flavonoids in Radix Pueraria thomsonii by HPLC
ZHANG Kai-xia1，2，ZHANG Jun1，JING Wen-guang1，WANG Yue-sheng1，LIU An1*
(1. Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China;
2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330006，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for determination of puerarin，daidzein-8-C-apiosyl-
(1→6) glucoside and daidzin in Radix Pueraria thomsonii． Method:The mobile phrase was methanol-0. 02%
phosphoric acid (25∶ 75)with a Diamonsil C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，detection wavelength at 250
nm． Result:The accuracy，stability，and reproducibility of this method all met the requirements． The linearity
range of puerarin，daidzein-8-C-apiosyl- (1→6) glucoside and daidzin is 0. 123-0. 737，0. 024 9-0. 150 μg and
0. 021 7-0. 130 μg． The average recovery of three components is 99. 4%，99. 0% and 99. 1% ． The method was
applied to determine the content of four batches of Radix Pueraria thomsonii． Conclusion:The method is rapid，
simple and accurate，which can be used in the quality control in Radix Pueraria thomsonii．
［Key words］ Radix Pueraria thomsonii;puerarin;daidzein-8-c-apiosyl- (1→6) glucoside;daidzin;
HPLC;quantitative determination
粉葛具有解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，
通经活络和解酒毒的作用，用于治疗外感发热头痛，
消渴，麻疹不透，泄泻，中风偏瘫等。2000 年版《中
国药典》以前粉葛和豆科植物野葛 Pueraria lobata
(Willd．)Ohwi．共同作为葛根药材使用，在 2005 年
版《中国药典》［1］开始把二者分开记载。文献研究
发现，粉葛的化学成分与野葛类似，以异黄酮类物质
为主，但含量明显低于野葛［2-3］，在质量控制上主要
为葛根素、大豆苷元和总黄酮的含量测定［2-12］，其他
成分的含量研究未见报道。为此，本文将报道
HPLC 同时测定粉葛中葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜
糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆苷 3 种成分含量的方法，
该方法简便、快速、准确，可为粉葛饮片的质量控制
提供参考依据。
1 材料
岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪，SPD-M20A 型
紫外-可见光二极管阵列检测器，SIL-20A 型自动进
样器，岛津 LC-Solution 工作站，Sartorius BP211D 型
·87·
第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.06.041
天平(d = 0. 01mg) ;KQ3200E 型超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司) ，甲醇(色谱纯，Fisher 公
司) ，双蒸水(娃哈哈) ，其余试剂均为分析纯。
葛根素和大豆苷对照品购于中国食品药品检定
研究 院 (批 号 分 别 为 110752-200912，111738-
200501) ，大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷对
照品为本实验室自制，经 HPLC检测，纯度 ＞ 98%。
从不同饮片厂采购 4 批粉葛饮片，经中国中医
科学院中药研究所何希荣主管药师鉴定，均为豆科
植物甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth．的干燥根。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 Diamonsil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 02%磷酸(25∶ 75) ，
流速 1. 0 mL·min －1，柱温 40 ℃，对照品溶液进样量
5 μL，供试品溶液进样量 10 μL，检测波长 250 nm，
理论塔板数均不低于 3 000，混合对照品溶液和供试
品溶液的色谱图见图 1，各色谱峰的分离效果良好。
1. 葛根素;2. 大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷;3. 大豆苷
图 1 混合对照品(A)和粉葛饮片(B)HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取葛根素、大
豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆苷对照
品适量，用甲醇配制成每 1 mL 分别含 52. 04，
20. 32，8. 672 μg的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取粉葛饮片粉末 0. 5 g，
精密称定，置锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50 mL，
称重，超声处理 15 min，冷却，50%甲醇补重，过微孔
滤膜(0. 45 μm) ，取续滤液，即得。
2. 4 线性关系考察 精密称取 3 个对照品适量，用
甲醇配制成一定质量浓度的混合对照品溶液，其中
葛根素浓度为 61. 40 mg·L －1;大豆苷元-8-C-芹菜
糖-(1→6)葡萄糖苷浓度为 12. 44 mg·L －1;大豆苷
浓度为 10. 84 mg·L －1，分别精密吸取混合对照品溶
液 2，4，6，8，10，12 μL，按 2. 1 项下色谱条件进行测
定，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量(μg)为横
坐标，进行线性分析得到回归方程。葛根素:Y =
3 827 194X － 1 667. 1(r2 = 0. 999 9) ，线性范围
0. 123 ～ 0. 737 μg。大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡
萄糖苷:Y = 2 312 952X － 469. 5(r2 = 0. 999 9) ，线性
范围 0. 024 9 ～ 0. 150 μg。大豆苷:Y = 3 782 263
X － 81. 5 (r2 = 0. 999 9) ，线 性 范 围 0. 021 7 ～
0. 130 μg。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，重复
进样 6 次，样品中葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-
(1→6)葡萄糖苷和大豆苷峰面积的 RSD 分别为
0. 2%，1. 5%，1. 0%。表明仪器性能良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按 2. 1 项下
色谱条件分别于 0，2，4，8，12 h 进行测定，计算葛根
素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆
苷峰面积的 RSD分别为 0. 2%，1. 1%，1. 0%。表明
供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一供试品，按 2. 3 项下方法
平行制备 6 份供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进
行测定，葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄
糖苷和大豆苷的含量分别为 0. 254 7%，0. 020 9%，
0. 043 1%，RSD 分别为 1. 1%，2. 7%，1. 0%。表明
方法重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取
已知含量的粉葛饮片粉末 0. 25 g，置锥形瓶中，精密
加入混合对照品适量，按 2. 3 项下方法制备供试品
溶液。平行制样 6 份，按 2. 1 项下色谱条件测定，计
算平均回收率和 RSD，葛根素、大豆苷、大豆苷元-8-
C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷的平均回收率分别为
99. 4%，99. 1%，99. 0%，RSD 分别为 1. 7%，2. 0%，
1. 9%。表明该方法准确可靠。见表 1 ～ 3。
2. 9 含量测定 取粉葛饮片粉末按 2. 3 项下方法
制备成供试品溶液，平行制备 2 份，按 2. 1 项下色谱
条件测定 3 个成分含量，结果见表 4。
3 讨论
结果可见，粉葛中葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜
糖-(1→6)葡萄糖苷和大豆苷的含量均远低于野葛，
并且野葛中含量较高的 3-羟基葛根素和 3-甲氧基
·97·
张开霞，等:HPLC测定粉葛饮片中 3 种黄酮类成分的含量
表 1 葛根素加样回收率
No．
样品
质量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 0. 255 1 0. 649 7 0. 864 1. 528 101. 7
2 0. 257 1 0. 654 8 0. 864 1. 507 98. 6
3 0. 250 4 0. 637 8 0. 864 1. 500 99. 8
99. 4 1. 74 0. 258 7 0. 658 9 0. 864 1. 496 96. 9
5 0. 256 2 0. 652 5 0. 864 1. 520 100. 4
6 0. 253 3 0. 645 2 0. 864 1. 498 98. 7
表 2 大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷加样回收率
No．
样品
质量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 0. 255 1 0. 053 32 0. 098 4 0. 152 9 101. 2
2 0. 257 1 0. 053 73 0. 098 4 0. 150 5 98. 3
3 0. 250 4 0. 052 33 0. 098 4 0. 146 4 95. 6
99. 0 1. 94 0. 258 7 0. 054 07 0. 098 4 0. 152 0 99. 5
5 0. 256 2 0. 053 55 0. 098 4 0. 151 8 99. 8
6 0. 253 3 0. 052 94 0. 098 4 0. 150 9 99. 6
葛根素在粉葛中无法检测出［13］，说明两种饮片中有
效成分在种类和含量上存在很大差异。因此建议
表 3 大豆苷加样回收率
No．
样品
质量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 0. 255 1 0. 109 95 0. 208 0. 320 8 101. 4
2 0. 257 1 0. 110 81 0. 208 0. 316 6 98. 9
3 0. 250 4 0. 107 92 0. 208 0. 315 6 99. 8
99. 1 2. 0
4 0. 258 7 0. 111 50 0. 208 0. 310 9 95. 9
5 0. 256 2 0. 110 42 0. 208 0. 319 8 100. 7
6 0. 253 3 0. 109 17 0. 208 0. 313 0 98. 0
葛根成方制剂中应增加 3-羟基葛根素、3-甲氧基
葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷和
大豆苷作为检测指标，这样不仅可以更加全面的控
制含葛根制剂质量，也可以防止用粉葛代替野葛
投料。
粉葛中有效成分为异黄酮苷类，在流动相中加
入少量酸可改善峰形，提高柱效和分离度。在粉葛
饮片的制备方法中，提取溶剂考察了甲醇、50%甲
醇、30%甲醇，当提取溶剂为 50%甲醇时，3 种黄酮
类成分提取率高且色谱峰形良好。本方法简便、快
速、准确，可为粉葛饮片的质量控制提供参考依据。
表 4 4 批不同来源粉葛的含量测定(n = 2) %
批次 厂家 产地 批号 葛根素 /% 大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷 /% 大豆苷 /%
1 北京仟草中药饮片有限公司 河南 110613002 0. 244 9 0. 020 29 0. 042 49
2 北京华邈中药工程技术开发中心 广西 110101 0. 249 0 0. 003 46 0. 032 84
3 北京圣惠堂中药饮片有限公司 湖南 11031604 0. 234 0 0. 003 06 0. 030 11
4 北京丰泰金源药业有限公司 河南 11081501 0. 262 3 0. 003 88 0. 049 34
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013