全 文 ：第 1 9卷
1 9 99年
第 3 期
8月
高 师理 科 学刊
Jo u rn a lo f 段ien e e o f T ea e h e r s ’ Co lle g e a n U d山v e r s it y
V o l
.
1 9
A u g.
N o
.
3
1 99 9
胡卢巴苗期不同生长时期醋酶同工酶分析
黄永红 尤凤丽 吴永红 司翠雪 许海英
(大庆高等专科学校 )
摘要 利用聚丙烯酸胺凝胶电泳分析胡卢巴苗期不 同生长时期醋酶同工酶的变化 ,
按其生长顺序在苗期进行 6 次取样 , 每次取全株和叶两组 , 分析得到清晰的酶借带 .
结果表明 : 在苗期早期胡卢巴醋酶同工酶语丰富且酶含量高 ,在同一时期不同部位和
不 同时期 同一部位醋酶同工酶语均有差异 , 从而为胡卢巴杂交育种的研究提供 7 理
论依据 .
关键词 胡卢巴 醋酶 同工酶
O 前言
同工酶是指具有相同或相似催化功能而分子结构不同的一类酶 lj[ . 近年来随着对同工酶
基础研究的进展 , 同工酶分析技术在动 、 植物生理生化及遗传育种工作中应用越来越广泛 , 根
据酶谱的变化已作为鉴定物种 、 研究分类与进化 、遗传与变异的重要指标民叹
胡卢巴 ( rT lg on el la 为龙做m 一g r a ￡c u m I J . ) 又名香草 , 是一种半野生豆科植物 , 在我国栽
培历史悠久 ,具有较高的经济价值 , 可用于食品 、 纺织 、 皮革 、 建材 、 日用化学品 、 石油开采等行
业 . 但因产量低 , 而影响其开发和利用 , 因此对其进行遗传育种 , 提高产量是必要的 . 我们于
1 9 9 4 ~ 1 9 9 7 年对胡卢巴品种苗期进行了醋酶同工酶分析 , 为胡卢巴遗传育种提供了较为理想
的生理生化指标 .
1 材料与方法
1
.
1 材料
胡卢 巴来源于大庆高等专科学校生物系农园 .
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 育苗 将种子在温水 中浸泡 8一 10 h 播于花盆中 , 在 2 一27 ℃的温室中培养出苗 .
1 : 2
.
2 取材 按表 1分 5 次取材 , 每克鲜重加 2 n il 泌 p H一 7 . 2 磷酸一蔗糖提取缓冲液 , 在研
钵中冰浴研磨成匀浆 , 再用 T G I J 16 9 高速离心机以 3 5 0 o r / 而 n 离心 8 而 n , 取上清液置于
冰箱中备用 .
1
.
2
.
3 聚丙烯酞胺凝胶电泳 按文献 [ 4 〕进行 .
1
.
2
.
4 染色 参照周光宇等方法 s1[ .
本文 1 9 9 9 年 4 月 1 9 日收到 .
高 师 理 科 学 刊 第 9 1卷
表 1胡卢巴取材时期及编号
取 样 时 期
取样部位及编号
全株 叶
aa扩第 1次
第 2次
第 3次
第 4 次
b 1
l e
d 1
e 1
第 5 次
子叶未展开
子叶展开
子叶全展开第 1真叶刚出
第 1真叶展开第 2真叶刚出
第 2真叶展开第 3真叶刚出
第 3真叶展开第 4 真叶刚出
第 4 真叶展开
2结果与讨论
2
.
1基本酶谱
对胡卢巴在苗期按 5 个时期取全株和叶进
行酷酶同工酶分析 , 所得不同时期的全株和叶
的酷酶同工酶谱带叠加共得 16 条酶谱带即得
到基本酶谱 , 按酶谱集中程度 , 由负极到正极分
为两个区 : I 区迁移率为 0 . 02 一 0 . 295 共 8 条
酶谱带 . 1 区迁移率为 0 . 41 ~ 0 . 65 共 8条酶谱
带 (见图 1) .
2
.
2 酶谱分析
由图 2 和表 2 可以看出胡卢巴在苗期早期
无论是全株还是叶片 , 酶谱带较多 . 由酶谱带染
色深浅程度 困 可以看出胡卢巴在苗期早期酶含
量高 , 且叶的酶含量远远高于全株的酶含量 . 如
第 1 次取样 a 为 n 条酶谱带 、 a . 为 12 条酶谱
带 , a 、 a , 有 7 条弱酶谱带 。 a ` 、 a “ 均为 13 条酶谱
带 . a , 、 a ” 均只有 1 条弱酶谱带 . 在叶中 l 。带均
为较强带 , 在全株 中 1 8 带均为较弱带 , 这说明
了胡卢巴早期叶 中酶含量高于早期全株酶含
量 . 胡卢巴随着培养时间的增加有的酶谱带由无到有 ,
(一 ) 0 . 0 迁移率
区
、l|忆…J10乙
:
óO1甘
{
1 ·
(十 ) 1 . 0
图 1 胡卢巴苗期 酣酶 同工酶基本酶语
例如 u s 带在 b 中出现 , x : 带在 d , 中
出现 , 有些酶谱带又逐渐消失 . 如 I : 带在 b 、 〔! 、 e 、 f 、 。 ` 、 d ` 、 e ’ 、 fl 中均消失 . 胡卢巴同一部位不
同时期酶谱带数略有不同 , 如 a 为 n 条酶谱带 , a 为 12 条酶谱带 , b 、 f 有 6 条酶谱带 , c 、 d 、 e
分别有 9 、 5 、 7条酶谱带 , a ` 、 a b 有 1 3 条酶谱带 , b , 有 9 条酶谱带 , 。 ` 、 e ’ 均有 8 条酶谱带 , d ` 、 f ,
均有 7条酶谱带 .
第 3 期 黄永红等 :胡卢巴苗期不同生长时期醋酶同工酶分析 5 3
图 2 胡卢巴苗期醋酶同工酶谱
注 :由右— 左依次为 a、 a.、 b、 。 、 d 、 e、 f 、 。 ’ 、 a“ 、 b, 、 。 , 、 d ` 、 e , 、 f ,
表 2 胡卢巴苗期酣酶同工酶语不 同时期全株及叶情况
a a a b e d e f a ] a b b l e l d l e l f l
料+十
料十料十料十料料+
料+十一
料+十一
料十料+料十料十料+料+料+
料 料料十
1 5 ~
· · · ·
~
· … … 料 十 + 十 十 +
注 : 十表示强带 · 表示弱带
高师 理 科学 刊 第 19 卷
关于酶谱带出现或消失的原因解释包括 2个方面 图 :新谱带的出现证明新的酶分子的出
现 , 这种新的酶分子的出现可以由酶分子的重新合成或者是原已存在的酶分子的前体的活化
而造成 ,对于某些酶谱带的消失则由于酶分子在发育过程的降解 、基因的表达 、 调控结果 .
3 结论
胡卢巴苗期同一部位不同发育时期醋酶同工酶谱不同 , 不同部位同一时期醋酶同工酶不
同 . 在苗期早期醋酶同工酶谱丰富且酶含量高 .
酶的本质是蛋白质 ,而蛋白质的合成是受基因控制的 , 同工酶谱的变化可反映基因的变化
即遗传物质的变化 . 因此 ,根据以上结论可 以确定 ,用醋酶同工酶方法进行胡卢巴育种研究 , 可
选择苗期早期的叶 , 因为此时叶中酷酶同工酶种类丰富且含量高 , 酶活性大 , 有望在短时间内
找出亲本与杂交种的遗传差异 , 确定优势品种 , 鉴别真假杂交种 , 从而为胡卢巴育种研究提供
了理论依据 .
参 考 文 献
1 M
a r k e rt G L e t a l
.
M
u l t ip le f o r m
s o f e n z y m e s : t is u e o n t o g e n e t l e a n d s p e e l e s s叶e l f le p a t t e rn s . P r o e
N a t A e a d cS i
.
U S A
.
195 9
,
4 5
: 7 53
2 S w ~
n a t h a n B e t a l
.
J A Pp I aB e t e n o l
,
198 2
,
52
:
15 1
3 Z ink D L
e t a l
.
N a t u r e
,
1980
,
2 83 : 22 4
4 黄永红等 . 胡卢巴苗期不同生长时期的过氧化物酶同工酶分析 . 哈尔滨医科大学学报 , l明 7 , ( 5 ) : 89
5 周光宇等 . 远缘杂交的分子基础— D N A 片断杂交假设的一个论证 . 遗传学报 , 1979 , 6 (4 ) : 408
6 黄永芬等 . 蕃茄过氧化物酶和过氧化物酶同工酶的活性测定 . 哈尔滨师范大学自然科学学报 , 1 989 ,
( l ) : 9 4~ 9 7
7 李玉湘等 . 白菜不同杂交组合过氧化物酶同工酶的比较研究 . 园艺学报 , 1980 , 17 ( 4 ) : 43 一 46
A n a l y s i s o n t h e E s t e r a s e I s o z y m e C h a n g e s o f
T r i g o n e l l a F o e n u m G
r a e c u m L i n D i f f e r e n t S e e d l i n g P e r i o d
H u a n g Y o n g h o n g Y o u F e n g l i W
u Y o n g h o n g 51 C u i x u e X u H a i y i n g
任殆 q i l啥 场 g h e r T r a iin n g cS h o l)
A bs t r a e t T h i s s t u d y a n a ly z e d t h e e s t e r a s e i s o z yme
e h a n g e s o f T ir g 田 Ze l l a 介粉之u m g aer c u m
L i n d i f f e r e n t s e e d l i n g 阵 r ide w i t h 卯 ly a e r y l a而 d e g e l e l e e t r o p h o r e s i s . A e e o r d i n g t o t h e i r
g r o w i n g s e q u e n e e
,
t h e s a m p l
e s w e r e t o k 6 t ime
s i n s e e d l in g 卯 r ied . W l飞。 l e p la n t s a n d l e a v e s
w e r e t a k
e n i n e a e h t ime
,
r e s详 e t iv e ly . T h e e lae r z ymo g r a rns w e r e o b t a i n e d b y a n a ly s i s
.
T h e
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e e s t e r a s e i s o z y me
e o n t e n t s o f T ir g
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e z y m o g r a nst w
e r e r i e h i n t h e e a r ly s e e d li n g 详 r iod . T h e e s t e r a s e is o z y me z y -
m o g r a ms h
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e s i n d i f f e r e n t p a r t s o f t h e s a me 碑 r i团 a n d i n t h e s a m e p a r t o f d i f-
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