全 文 ：作者简介:魏永生 ,男 ,副教授　　Tel:(0971)3720704　　E-mail:bestwys@sohu.com
5.2　头孢哌酮与其他头孢类药物的性质差异较大 ,
所以出峰时间较迟 , k′较大 ,如果采用梯度洗脱 ,效
果会更令人满意 。 (收稿日期:2003-05-26)
HPLC测定藏药鬼箭锦鸡儿中黄酮类
化合物的含量
魏永生 ,郑敏燕(咸阳师范学院化学系 ,陕西 咸阳 712000)
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:A　　　文章编号:
1001-2494(2005)01-0073-02
藏族民间用药“作毛兴”系豆科 、锦鸡儿属灌木
鬼箭锦鸡儿[ Caragana jubata(Pall.)Poir.] ,广泛分布
于青藏高原地区 ,主要生长在海拔 3 000 ～ 4 700 m
的阴坡 、半阴坡 。藏医用其干燥红色木质茎部分作
为药材。本实验采用 HPLC对鬼箭锦鸡儿中黄酮类
化合物的含量进行了分析测定 ,为鬼箭锦鸡儿藏药
资源的综合开发利用提供科学依据 。
1　材料 、仪器与试剂
鬼箭锦鸡儿采自青藏高原地区 ,由青海藏医药
研究所提供 ,经青海师范大学生物系植物学副教授
李健民鉴定 。收集其去皮茎部分作为供试药材 ,粉
碎过 40目筛 、自然干燥后备用。
岛津 LC-6A高效液相色谱仪(SPD6AV紫外检
测器 , C -R3A 数据处理机), YWG C18色谱柱(10
μm ,4.6 mm×250 mm)。山奈酚对照品(Edward Gurr
Ltd.);槲皮素 、异鼠李素对照品(中国药品生物检定
所)甲醇(色谱纯);其他试剂为分析纯。
2　分析样品的制备
称取鬼箭锦鸡儿样品约 0.75 g ,精密称定 ,用滤
纸包好 ,放入索氏提取器中 。加入 75%乙醇 ,水浴
加热回流 ,至回流液完全无色为止 ,得鬼箭锦鸡儿黄
酮提取液 ,耗时 10 h。将提取液挥干溶剂 ,加 25%
盐酸 5 mL ,甲醇 30 mL ,水浴回流酸水解 2 h ,冷却后
转移至 50 mL量瓶中 ,以甲醇稀释至刻度 ,得鬼箭锦
鸡儿黄酮类物质酸水解分析样品溶液。精密吸取
10 mL 置 25 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,用 0.45
μm微滤膜过滤后 ,用于 HPLC 分析 。色谱条件为:
流动相 ,甲醇-0.4%磷酸(60∶40);检测波长 ,360 nm;
流速 ,1 mL·min-1;柱温 ,室温;进样量 ,10 μL。
3　标准曲线制备
精密称取干燥至恒重的槲皮素 13.38 mg ,山奈
酚 5.74 mg ,异鼠李素 9.01 mg ,分别置 50 mL 量瓶
中 ,用甲醇溶解 、稀释至刻度 ,作为各自的对照品储
备液 。分别吸取上述储备液各 1.0 , 2.0 , 4.0 , 6.0 ,
8.0 mL ,分别置 25 mL 量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,
分别吸取 10 μL按“2”项下色谱条件进行测定 ,见图
1。以峰面积(A)对浓度(c ,mg·mL-1)进行回归计
算 ,得回归方程:A槲皮素 =3.285 8×106 c -116 6 , R
=0.999 7 ,线性范围 0.010 70 ～ 0.085 63 mg·mL-1;
A山奈酚=2.945 8×106c -146 8 , r =0.999 8 ,线性范
围 0.004 592 ～ 0.036 76 mg·mL-1;A异鼠李素=4.083 3
×106c -3 831 , r=0.999 8 ,线性范围 0.007 208 ～
0.057 66 mg·mL-1 。
图 1　对照品(A)和样品(B)的 HPLC 谱图
1-槲皮素;2-山奈酚;3-异鼠李素
Fig 1　HPLC chromatograms of reference(A)and the extract from
Caragana jubata (Pall.)Poir(B)
1-quercetin;2-kaempferol;3-isorhamnetin
4　重复性实验
取 5份鬼箭锦鸡儿样品 ,测定 ,结果见表 1。
表 1　重现性测定结果.%
Tab 1　Method repeatability.%
编号 槲皮素 山萘酚 异鼠李素 黄酮总量
1 0.946 8 0.101 0 0.725 2 1.773
2 0.954 5 0.103 2 0.746 3 1.804
3 0.995 3 0.106 2 0.763 3 1.865
4 0.998 7 0.108 8 0.771 5 1.879
5 0.939 6 0.100 2 0.722 2 1.762
平均值 0.967 0 0.103 9 0.745 7 1.817
RSD 2.89 3.47 2.96 2.92
5　回收率实验
采用加样回收法 ,取已知含量的鬼箭锦鸡儿样
品适量 ,精密称定 ,分别精密加入槲皮素 、山萘酚 、异
鼠李素适量 ,按“2”方法和色谱条件测定 ,结果为:槲
皮素平均回收率为 101.3%, RSD=1.57%;山奈酚
平均回收率为 98.5%,RSD=2.16%;异鼠李素平均
回收率为97.9%,RSD=2.04%。
测定样品的色谱图见图 1(B),采用峰面积外标
法定量 。取青海藏医药研究所不同时期收购的鬼箭
锦鸡儿药材 3批 ,分别按前述方法制备分析样品 、测
·73·中国药学杂志 2005年 1月第 40卷第 1期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Chin Pharm J , 2005 January , Vol.40 No.1
作者简介:薛健 ,女 ,副研究员　　Tel:(010)62899730　　E-mail:xuejian200@sina.com
定 ,每批药材平行 3次测定 ,结果见表 2。不同批次
样品测定结果显示 ,鬼箭锦鸡儿药材中槲皮素 、山萘
酚 、异鼠 李素 的 平均 含量 分 别为 0.9713%,
0.1040%, 0.7479%, 以 苷 元 计 , 黄 酮 总 量 为
1.823%。
表 2　样品测定平均结果.n=3 , %
Tab 2　Average determination results of samples.n=3 , %
批号 槲皮素 山奈酚 异鼠李素 黄酮总量 RSD
1 0.965 5 0.103 2 0.744 9 1.814 2.58
2 0.934 5 0.100 0 0.720 5 1.755 3.18
3 1.014 0.108 8 0.778 3 1.901 3.06
(收稿日期:2004-02-10)
精制红花种子油气相色谱的测定
薛健1 ,卢树杰2 ,刘慧灵1 ,陈建民1(1.中国医学科学院-中
国协和医科大学 药用植物研究所 北京 100094;2.石家庄神威药业
股份有限公司 ,河北 石家庄 051430)
中图分类号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:
1001-2494(2005)01-0074-01
精制红花种子油是菊科植物红花(Cartnamus
tinctorius L.)的种子油经过皂化提纯而得到的脂肪
酸混合物 ,具有软化血管 ,降血脂的功效 ,常用于心
脑血管疾病的治疗。为了和其他植物的种子油进行
区别 ,笔者参考现有资料[ 1～ 2]进行了实验研究 。
1　仪器与材料
瓦里安 3400型气相色谱仪 ,氢火焰检测器。棕
榈酸甲酯 、硬脂酸甲酯 、油酸甲酯 、亚油酸甲酯对照
品(Sigma公司 ,纯度 >99.0%),所用甲醇 、氯化钠 、
正己烷均为分析纯 ,水为双蒸水;精制红花种子油从
新疆产区购得。
2　色谱条件
色谱柱:25 m×0.25 mm PEG20000弹性石英毛
细管柱 ,进样口温度 230℃,柱温 200℃,检测器温度
250℃,载气:N2 40 mL·min-1 ,H2 30 mL·min-1 ,空气
300 mL·min-1 ,进样 1 μL ,分流比 1∶50。
3　样品测定
3.1　样品的制备
取样品油 3 滴 , 加 2 mL 硫酸-甲醇(10%), 搅
匀 ,62℃～ 65℃恒温水浴 ,期间不断振摇 , 2 h后取出
冷却至室温 ,加入 2.5 mL正己烷 、2 mL 饱和食盐水
　　
溶液 ,充分震荡后静置 30 min ,取上层清液测定 。
3.2　共有峰的确定
通过10批样品的测定和比较 ,确定相对峰面积
5%以上的共有峰有 4个 ,占总峰面积的 98%左右 ,
分别为 3 ,5 ,6 ,7号峰 ,结果见表 1 ～ 2 ,图 1。由图 1
可见 ,红花种子油的 7 、6号峰面积比约 8:1 ,亚油酸
甲酯含量80%左右 。
表 1　10 批精制红花种子油样品共有峰的保留时间.min
Tab 1　Retention time of the community peak in ten batchs of re-
fined Cartnamus tinctorius L.seed.min
共有
峰号
样品批号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
3 3.55 3.56 3.55 3.55 3.55 3.55 3.55 3.54 3.55 3.54
5 5.86 5.87 5.87 5.87 5.86 5.86 5.86 5.85 5.86 5.85
6 6.19 6.21 6.19 6.19 6.19 6.19 6.19 6.17 6.20 6.18
7 7.11 7.16 7.07 7.08 7.10 7.09 7.10 7.06 7.14 7.09
表 2　10批精制红花种子油样品共有色谱峰的相对峰面积.%
Tab 2　Relative peak area of the community peak in ten batchs of
refined Cartnamus tinctorius L.seed.%
共有
峰号
样品批号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
3 5.78 5.63 6.05 6.02 5.94 5.89 5.68 6.04 5.78 6.66
5 2.30 2.28 2.37 2.42 2.35 2.36 2.23 2.37 2.15 2.67
6 9.76 9.67 10.00 10.55 10.12 10.39 9.99 10.45 10.41 10.14
7 81.20 79.83 80.71 80.55 81.19 80.68 81.14 79.26 80.54 79.16
图 1　红花种子油的色谱图
3-棕榈酸甲酯;5-硬脂酸甲酯;6-油酸甲酯;7-亚油酸甲酯
Fig 1　Chromatogram of sample
3-methyl plamitate;5-methyl stearate;6-oleic acid methy l ester;7-methyl linoleatc
3.3　精制红花种子油气相色谱图重现性实验
以第10批样品按图谱重现性实验(n=5),3 ,5 ,6 ,7
号峰的相对峰面积和保留时间RSD%均小于3%。
3.4　稳定性实验
按照“3.1”所述方法制备的供试液在 24 h 内稳
定。
4　小　结
精制红花种子油的气相色谱图有明显的特征
性 ,可以用来鉴别 。
(收稿日期:2004-02-14)
·74· Chin Pharm J , 2005 January ,Vol.40 No.1　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中国药学杂志 2005年 1月第 40卷第 1期