全 文 ：收稿日期:2016 － 05 － 13
基金项目:2012 年四川省教育厅科研项目 (NO:12ZB216)。
作者简介:刘琳 (1983 －)，硕士，主治医师，从事内分泌疾病的临床、教学及科研工作。
通信作者:李生茂 (1981 －)，博士，讲师，主要从事中药药效物质基础及质量标准化研究。
野葛和粉葛不同溶剂提取物清除 DPPH
自由基活性的比较
刘 琳1 李生茂2* 袁 斌2 舒 波1 张世鹏2
1． 川北医学院附属医院，四川 南充 637000;2． 川北医学院药学院，四川 南充 637000
【摘 要】 目的:比较野葛和粉葛清除 DPPH自由基的活性。方法:分别用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和石油醚
对野葛及粉葛药材进行提取，DPPH法测定抗氧化活性并计算 IC50。结果:野葛乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物清除 DPPH
自由基的 IC50 值分别是 2. 6334、17. 5689、42. 1171mg /mL (生药)，氯仿和石油醚提取物 200mg /mL (生药)浓度时 DPPH
自由基清除率分别为 18. 03%、9. 48%。粉葛乙醇提取物清除 DPPH 自由基的 IC50 值是 12. 4629mg /mL (生药)，而丙酮、
乙酸乙酯、氯仿和石油醚提取物 200mg /mL (生药)浓度时对 DPPH 自由基清除率分别为 45. 97%、15. 03%、10. 82%、
7. 65%。结论:野葛和粉葛各溶剂提取物均具有不同程度的清除 DPPH自由基的活性，活性大小顺序均为:乙醇提取物 ＞
丙酮提取物 ＞乙酸乙酯提取物 ＞氯仿提取物 ＞石油醚提取物，相同溶剂的提取物野葛清除 DPPH自由基的活性较粉葛强。
【关键词】 野葛;粉葛;提取物;DPPH
【中图分类号】Ｒ284. 1 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2016)17 － 0018 － 04
Comparative Studies on Scavenging Activity of DPPH Free Ｒadicals of Different
Solvent Extracts from Pueraria lobata and Pueraria thomsonii
LIU Lin1 LI Shengmao2* YUAN Bin2 SHU Bo1 ZHANG Shipeng2
1． Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，China;
2． School of Pharmacy，North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，China
Abstract:Objective Comparative studies on scavenging activity of DPPH free radicals of Pueraria lobata and Pueraria thomso-
nii． Methods Pueraria lobata and Pueraria thomsonii were extracted by ethanol，acetone，ethyl acetate，chloroform and petroleum e-
ther，and the antioxidant activity was evaluated by scavenging activity of DPPH free radicals． Ｒesults The IC50 of the ethanol，ace-
tone and ethyl acetate extracts of Pueraria lobata was 2. 6334，17. 5689，42. 1171mg /mL (crude drug) respectively，and the rate of
DPPH free radicals scavenging of chloroform and petroleum ether extracts at the concentration of 200mg /mL (crude drug) was
18. 03%，9. 48% respectively． The IC50 of the ethanol extracts of Pueraria thomsonii was 12. 4629mg /mL (crude drug)，and the
rate of DPPH free radicals scavenging of acetone，ethyl acetate，chloroform and petroleum ether extracts at the concentration of
200mg /mL (crude drug)was 45. 97%，15. 03%，10. 82% and 7. 65% respectively． Conclusion All the extracts of Pueraria lobata
and Pueraria thomsonii exhibited scavenging activity of DPPH free radicals，and the sequence of the activity was of ethanol extracts ＞
acetone extracts ＞ ethyl acetate extracts ＞ chloroform extracts ＞ petroleum ether extracts，and the scavenging activity of DPPH free radi-
cals of Pueraria lobata was better than Pueraria thomsonii．
Key words:Pueraria lobata;Pueraria thomsonii;Extracts;DPPH
葛根始载于 《神农本草经》［1］，列为中品，
为中医临床常用药之一，具有解肌退热、生津止
渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒之功
效［2］。文献报道［3 － 5］，葛根含有异黄酮、葛酚苷、
香豆素和三萜皂苷等类化学成分，具有降低血压、
减缓心率、心肌缺血保护、抗心律失常、抗氧化、
降血糖和改善肝脏脂代谢等药理作用。其中抗氧
化是葛根重要的药理活性之一，葛根提取物、异
黄酮或葛根素等体外具有清除 DPPH自由基、羟基
自由基、氧自由基或超氧阴离子的作用［6 － 10］，并
可降低多种动物模型丙二醛含量，升高超氧化物
歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶或过氧化氧酶等的
活性［11 － 22］。
历代医家对葛根植物来源认识不一，豆科葛
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属植物野葛 (Pueraria lobata (Willd. )ohwi)和甘
葛藤 (Pueraria thomsonii Benth. )等的干燥根均作
为葛根药材使用，分别为葛根 (野葛)和粉
葛［23］，并认为野葛侧重于解肌透疹、升阳，粉葛
偏于清热解肌、生津止渴、醒脾解酒、解毒［24］，
《中国药典》自 2005 年版开始亦将野葛和粉葛单
列收载。现代研究显示［25 － 31］，野葛和粉葛化学成
分和药理作用均有一定的差异，但未见有二者抗
氧化活性的比较研究。因此，本实验采用 DPPH法
比较了野葛和粉葛不同溶剂提取物的抗氧化活性，
以期为合理开发利用野葛和粉葛药材提供一定的
实验依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 岛津 1750 紫外分光光度计 (日本岛津
公司);HH － 2K4 型恒温水浴锅 (巩义市予华仪
器有限责任公司);Ohaus Discovery 十万分之一电
子分析天平 (奥豪斯仪器 (上海)有限公司);
KQ3200 型超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公
司);Epoch 微孔板分光光度计 (美国 BIOTEK 公
司)。
1. 2 试剂 1，1 － 二苯基苦基苯肼 (批号:
034K1071，sigma公司);乙醇 (批号:2013091301，
成都市科龙化工试剂厂);丙酮 (批号:1511211，
西陇化工股份有限公司);乙酸乙酯 (批号:
20160110，天津市致远化学试剂有限公司);氯仿
(批号:2015012701，成都市科龙化工试剂厂);石
油醚 (60 ～ 90℃，批号:2013092701，成都市科龙
化工试剂厂)，均为分析纯。
1. 3 受试药物 野葛和粉葛分别购于安徽亳州中
药材批发市场和四川南充苍生大药房，经川北医
学院药学院杨兰讲师鉴定为豆科植物野葛 Pueraria
lobata (Willd. )Ohwi、甘葛藤 Pueraria thomsonii
Benth. 的干燥根。
2 方法
2. 1 样品溶液制备 取野葛或粉葛粗粉 5 份，每
份 1g，精密称定，分别加入 20mL乙醇、丙酮、乙
酸乙酯、氯仿和石油醚，超声提取 0. 5h，滤过，
滤液置水浴 (60℃)挥尽溶剂，加甲醇溶解并定
容至 5mL容量瓶，即得。
2. 2 DPPH 溶液配制 精密称取 DPPH 适量，加
甲醇配置成 110μmol /L的溶液，避光保存。
2. 3 提取物对 DPPH 自由基清除作用 参考文
献［32］，取“2. 1”项下各样品溶液，用甲醇稀释
成不同浓度供试品溶液。取 0. 15mL 供试品溶液与
0. 15mL DPPH溶液置 96 孔板，混匀后室温避光放
置 180min，517nm 处测定吸收度 Ai;同时测定
0. 15mL甲醇 + 0. 15mL DPPH 溶液的吸光度 A0，6
个复孔，按公式计算清除率:DPPH 自由基清除率
= (1 － Ai /A0) × 100%。以清除率 (Y)对药物
浓度 (X)对数进行线性方程回归，根据对数函数
方程求出清除率为 50%时药物的浓度 (IC50)。
3 结果
3. 1 测定波长的选择 分别观察了 DPPH、加入
野葛乙醇提取物的 DPPH、野葛及粉葛各溶剂提取
物的甲醇溶液在 200 ～ 700nm 的紫外光谱，发现
DPPH甲醇溶液在 517nm处有强吸收峰，在加入野
葛乙醇提取物后，517nm处的峰值均明显降低。野
葛及粉葛乙醇、野葛丙酮和乙酸乙酯提取物的甲
醇溶液在 240 ～ 280nm 和 300 ～ 340nm 处分别有较
强的吸收峰和明显的肩峰，而各溶剂提取物在
517nm处没有吸收，故选择 517nm 作为测定波长。
见图 1。
3. 2 样品测定 野葛和粉葛的 5 种溶剂提取物对
DPPH自由基均有不同程度的清除作用，并随浓度
的增加清除活性增强。两种葛根药材不同溶剂提取
物对 DPPH自由基清除能力的强弱顺序均为:乙醇
提取物 ＞丙酮提取物 ＞乙酸乙酯提取物 ＞氯仿提取
物 ＞石油醚提取物，其中野葛乙醇、丙酮和乙酸乙
酯提取物提取物具有较强的清除 DPPH 自由基的活
性，IC50 值分别是 2. 6334、17. 5689、42. 1171mg /
mL (生药)，氯仿和石油醚提取物则清除活性较弱，
200mg /mL (生药)浓度时对 DPPH自由基清除率分
别为 18. 03%、9. 48% (未测出 IC50值)。而粉葛乙
醇提取物具有较强的清除 DPPH 自由基的活性，
IC50值分别是 12. 4629mg /mL (生药)，而丙酮、乙
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酸乙酯、氯仿和石油醚提取物清除活性较弱，
200mg /mL (生药)浓度时对 DPPH自由基清除率分
别为 45. 97%、15. 03%、10. 82%、7. 65% (未测出
IC50值)。两种葛根药材相同溶剂的提取物清除 DP-
PH自由基的活性比较，则是野葛提取物清除自由基
的活性强于粉葛，结果见图 2。
4 讨论
体外评价抗氧化能力的方法有很多［33 － 35］，常
用的有 OＲAC 法、ABTS 法、DPPH 法、羟基自由
基清除能力法、超氧阴离子清除能力法、FＲAP
法、FC法、DNA氧化损伤法、脂质过氧化法、红
细胞溶血法和线粒体肿胀法等。其中，DPPH 法具
有简便快速等特点，为目前应用最广泛的一种体
外抗氧化活性评价方法［36］，其原理为 DPPH 自由
基在甲醇 (乙醇)溶剂中呈紫色，在 515 ～ 520nm
范围内有最大吸收，当自由基清除剂提供电子与
DPPH自由基的孤电子配对时，DPPH 自由基会褪
色，其褪色程度与接受的电子数成定量关系，故
可以通过吸光度的变化进行定量分析［37］。
实验在采用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和
石油醚对野葛和粉葛分别进行提取获得不同极性
溶剂提取物的基础上，通过 DPPH法比较了抗氧化
活性的差异。结果表明，野葛和粉葛各溶剂提取
物均具有不同程度的清除 DPPH自由的活性，并呈
明显的量效关系。同时，随提取溶剂极性的降低，
清除活性减弱，其活性的强弱顺序依次为:乙醇
提取物 ＞丙酮提取物 ＞乙酸乙酯提取物 ＞氯仿提
取物 ＞石油醚提取物。而两种药材相同溶剂提取
物清除 DPPH自由的活性也有明显差异，野葛抗氧
化的活性明显优于粉葛。进一步对各提取物的紫
外光谱数据分析并结合文献报道［10 － 38］，发现野葛
及粉葛乙醇、野葛丙酮和野葛乙酸乙酯提取物的
甲醇溶液具有典型的异黄酮类成分的紫外光谱特
·02· 中国民族民间医药 2016年 9月第 25卷第 17期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 17
征，推测其所含异黄酮类成分可能是野葛及粉葛
发挥清除 DPPH活性的主要成分。
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(编辑:程鹏飞)
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