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鸡眼草3种不同溶剂提取物对ABTS自由基和羟自由基清除活性的研究



全 文 :China Pharmacy 2012Vol.23No.11 中国药房 2012年第23卷第11期
【主要药理作用】现代研究表明,白术具有促进肠胃运动
的作用、调节腹膜孔的作用、抑制子宫平滑肌的作用、调节淋
巴细胞作用、免疫调节作用、延缓衰老作用,此外还有利尿、降
血糖、抗凝、抗菌、保肝、抗肿瘤、抑制代谢活化酶及强壮身体
机能等药理作用。
【注意事项】本品性偏温燥,热病伤津及阴虚燥渴者不宜。
【不良反应】未见
【贮藏】置阴凉干燥处,密闭保存,防蛀。
【规格】100g/袋
【有效期】×年×月×日
【批准文号】未规定(×××××)
【生产厂家】企业名称:×××××
地址:×××××
联系电话:×××××
中药饮片说明书的编制应在传统的中医药理论指导下进
行,尽量以科学性、全面性、通俗易懂作为编写原则,避免推销
性语气的出现。此外,药品说明书的书写还应符合《中华人民
共和国药品管理法》及国务院药品监督管理部门对说明书的
有关规定[5~8]。
参考文献
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(收稿日期:2011-03-12修回日期:2011-06-19)
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·中药研究·
鸡眼草3种不同溶剂提取物对ABTS自由基和羟自由基清除活性的研究Δ
李培源1*,霍丽妮1,苏 炜2#,邓超澄1,滕明敏1,卢澄生1(1.广西中医学院药学院,南宁 530001;2.广西师范
学院化学与生命科学学院,南宁 530001)
中图分类号 R285;R97 文献标志码 A 文章编号 1001- 408(2012)11-0964-03
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012.11.02
摘 要 目的:研究鸡眼草3种不同溶剂提取物对ABTS自由基(ABTS·+)和羟自由基(·OH)的清除活性。方法:用冷浸法得到鸡
眼草乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物,以UV法测定3种提取物的总黄酮含量,并测定3种提取物对ABTS·+和·OH的清除活性。结
果:鸡眼草丙酮提取物的总黄酮含量最高(131.41mg·g-1),对自由基的清除效果也最好,其对ABTS·+和·OH的清除率最高可达到
88.79%和95.81%。结论:鸡眼草乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物都具有较强的自由基清除能力,有作为天然抗氧化剂开发利用的
潜力。
关键词 鸡眼草;提取物;自由基清除活性
Scavenging Activity of Different Extracts of Kummerowia striata on ABTS Radical and Hydroxyl Radical
LI Pei-yuan,HUO Li-ni,DENG Chao-cheng,TENG Ming-min,LU Cheng-sheng(College of Pharmacy,Guangxi
Traditional Chinese Medical University,Nanning 530001,China)
SU Wei(College of Chemistry and Life Science,Guangxi Normal College,Nanning 530001,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To study the scavenging activity of 3extracts of Kummerowia striata on ABTS and hydroxyl free radi-
cal. METHODS:The ethanol,acetone and ethyl acetate extracts were obtained by cold-extraction,then the total flavonoid content
was determined by UV method and their scavenging activities on ABTS and hydroxyl radical were studied. RESULTS:The content
of total flavonoid in acetone extract was the highest(131.41mg·g-1),and it also exhibited the most remarkable scavenging activity
on the above two free radicals,with the highest scavenging capacity of 88.79% and 95.81%,respectively. CONCLUSION:All the
three extracts of K. striata have prominent antiradical activity,which possessed the potential to be natural antioxidants.
KEY WORDS Kummerowia striata;Extracts;Free radical scavenging activity
Δ 教育部科学技术研究重点项目(210168)
*讲师,硕士。研究方向:植物提取分离。 E-mail:lipearpe-
ar@yahoo.cn
# 通讯作者:副教授,博士。研究方向:天然产物和化学结构修
饰。E-mail:aaasuwei@yahoo.com.cn
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中国药房 2012年第23卷第11期 China Pharmacy 2012Vol.23No.11
鸡眼草Kummerowia striata(Thunb.)Schindl,又名人字草、
三叶草、苍蝇翅、三叶人字草,为豆科鸡眼草属植物,分布于福
建、广东、广西、云南等地,一年生草本。全草供药用,有利尿
通淋、解热止痢之效,主治咳嗽胸痛、暑热口渴、小儿疳积、久
痢、疟疾、中暑发痧、伤暑小便不利、小便尿血、急性胃肠炎、夜
盲症[1]。周玖瑶等[2]发现鸡眼草具有明显的止血和升高血小板
作用,王霞等[3]发现鸡眼草可用于治疗 IgA肾病。鸡眼草在民
间使用非常广泛,但对其清除自由基活性的研究未见报道。
本研究首次探讨了鸡眼草3种提取物(乙醇、丙酮、乙酸乙酯提
取)对2,2′-联氨 -双(3-乙基苯并噻唑啉 -6-磺酸)二胺盐
(ABTS)自由基(ABTS·+)和羟自由基(·OH)的清除能力,并对
其总黄酮含量进行测定,以期为鸡眼草的作用机制研究提供
参考,并为其开发利用提供基本资料。
1 仪器与试药
UV1901型紫外-可见分光光度计(北京普析电子科技有限
公司)。
鸡眼草采于广西百色,由广西中医学院壮药学院韦松基
教授鉴定为真品。ABTS(美国Sigma公司);芦丁标准品(北京
百灵威科技公司,批号:20090618,含量>98℅);其余试剂均
为分析纯。
2 方法
2.1 鸡眼草不同溶剂提取物的制备
称取20g鸡眼草粉末,加入200mL95%乙醇,冷浸72h。
重复上述操作3次,合并提取液。旋转蒸发回收溶剂,得鸡眼
草乙醇提取物(EE)0.7g,得率为3.5%。同法,用丙酮和乙酸
乙酯提取,得丙酮提取物(AE)0.7g和乙酸乙酯提取物(EAE)
0.9g,得率分别为3.5%、4.5%。
2.2 总黄酮含量的测定
2.2.1 标准曲线的制备 精密吸取适量芦丁标准品溶液(1
mg·mL-1)置于10mL量瓶中,加5%亚硝酸钠0.4mL,静置6
min,再加入5%硝酸铝0.4mL,静置6min。加5%氢氧化钠试
液4.0mL,用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置15min。在510
nm波长处测定吸光度。以吸光度对溶液浓度进行回归分析,
制备标准曲线,得回归方程。
2.2.2 鸡眼草提取物总黄酮含量测定 将芦丁标准品溶液换
为固定浓度提取物溶液,同“2.2.1”项下方法测定吸光度,多次
测量求平均值。根据标准曲线计算总黄酮的芦丁当量,总黄
酮含量以每1g 干物质的芦丁当量(mg)表示,并计算提取得
率。
2.3 鸡眼草提取物对ABTS·+清除能力的测定[4]
将ABTS用蒸馏水配制成2mmol·L-1的溶液,取50mL该
溶液与200mL K2S2O8溶液(70mmol·L-1)混合均匀,避光放置
12~16h,得到ABTS·+溶液。用PBS将ABTS·+溶液稀释至吸
光度为(0.70±0.02)(Abs=734nm 处)。将鸡眼草提取物用
95%乙醇稀释为4个不同浓度药液(0.3、0.6、0.9、1.2mg·mL-1),
取0.1mL提取物药液,加入ABTS·+溶液1.9mL,混匀,在1、3、
5、10min时测其吸光度。以芦丁作为阳性对照,以不加药液或
芦丁的体系作为阴性对照。ABTS·+清除率(S)计算公式如下:
S(%)=(A0-A)/A0。其中,A0为ABTS·+溶液的吸光度;A为加
药液后的吸光度。
2.4 鸡眼草提取物对·OH清除能力的测定
依次往25mL容量瓶中加入1.0mL邻二氮菲水溶液(7.5
mmol·L - 1)、5.0mL PBS(pH7.4)、1.0mL FeSO4溶液(7.5
mmol·L-1)、1mL0.1%H2O2溶液和一定量提取物溶液,以蒸馏
水定容。室温下放置60min时测510nm波长处吸光度。以芦
丁作为阳性对照。其中既加药液又加H2O2的为加药管;不加
药液,只加H2O2的为损伤管;两者均不加的为未损伤管。表观
自由基S计算公式如下:S(%)=[(A 加药-A 损伤)/(A 未损伤-A 损伤)]×
100%。S为负值即促氧化,S为正值即抗氧化。
3 结果
3.1 鸡眼草提取物总黄酮含量的测定
AE总黄酮含量最高,为131.41mg·g-1;EE总黄酮含量最
低,为59.25mg·g-1;而EAE总黄酮含量为103.40mg·g-1。3
种提取物总黄酮含量顺序为:AE>EAE>EE。大量研究发
现,植物的自由基清除能力与其总黄酮含量成正相关。鸡眼
草提取物均具有较高的总黄酮含量,因此3种提取物,特别是
AE 和 EAE,都是极具潜力的自由基清除剂。鸡眼草提取物
总黄酮含量见图1。
3.2 AE对ABTS·+的清除能力
由不同浓度的 AE 对 ABTS·+的清除能力测定结果可看
出,随着提取物浓度增大,AE对ABTS·+的 S也迅速上升。在
3min时,浓度为0.2mg·mL-1的AE对ABTS·+的S为45.39%;
而当浓度升高到1.2mg·mL-1时,AE对ABTS·+的 S也随之增
加到77.47%,相比0.2mg·mL-1的AE,其S增大了70.68%,可
见药液浓度对其ABTS·+清除能力的影响非常明显。同时,反
应时间对药液的ABTS·+清除能力也有影响。对于浓度为0.8
mg·mL-1的AE,1min时S为58.43%,3和5min时S分别增大
到70.14%和74.00%,而到10min时,S达到80.94%,可见反应
时间越长,药液对ABTS·+的清除能力越好。AE对ABTS·+的
清除能力见图2。
3.3 3种提取物对ABTS·+的清除能力
在0.5mg·mL-1的较低浓度时,EE的S就达到了44.72%,
而AE和EAE的 S高达71.55%和77.50%。当浓度为1.2mg·
mL-1时,3种提取物对ABTS·+的S均超过了80%,其中AE的S
最高,达到88.79%,与阳性对照物芦丁对ABTS·+的S接近,表
现出极其出色的ABTS·+清除能力。结果表明,不管是在高浓
度还是低浓度的情况下,鸡眼草提取物都具有良好的ABTS·+
图1 鸡眼草提取物总黄酮含量
Fig 1 Total flavonoid content of K. striata extracts
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China Pharmacy 2012Vol.23No.11 中国药房 2012年第23卷第11期
清除能力。3种提取物对ABTS·+的清除能力见图3。
3.4 3种提取物对ABTS·+的最大效应浓度(EC50)值
EC50的物理意义为当抗氧化剂对 ABTS·+的清除率达到
50%时的质量浓度。EC50值越低,抗氧化剂清除自由基的能力
越强。3种提取物对 ABTS·+的 EC50值排序为:AE<EAE<
EE,即提取物清除ABTS·+的能力为:AE>EAE>EE。3种提
取物对ABTS·+的EC50值见表1。
表1 3种提取物对ABTS·+的EC50值
Tab 1 EC50value of 3extracts on ABTS·+ free radical
提取物
EE
AE
EAE
提取物对 ABTS ·+ 的EC 50值/mg·mL-1
0.33
0.20
0.23
3.5 3种提取物对·OH的清除能力
随着浓度增大,提取物对·OH 的清除效果逐渐增强。
EAE 在浓度为0.2mg·mL-1时 S 为16.40%,浓度为0.5mg·
mL-1时S为50.42%,而在浓度为1.2mg·mL-1时S为76.98%,
是0.2mg·mL-1浓度S的4.69倍。在3种提取物中,AE对·OH
的清除效果最好,在浓度为 1.2mg·mL - 1时,S 可达到
95.81%。3种提取物对·OH的清除能力见图4。
3.6 3种提取物对·OH的EC50值
3种提取物对·OH的EC50值排序为:AE<EAE<EE,即提
取物清除·OH的能力为AE>EAE>EE。这与其清除ABTS·+
的能力一致,与总黄酮含量的顺序也一致,表明较高的总黄酮
含量是鸡眼草提取物具有良好自由基清除能力的主要原因。
3种提取物对·OH的EC50值见表2。
表2 3种提取物对·OH的EC50值
Tab 2 EC50value of 3extracts on hydroxy free radical
提取物
EE
AE
EAE
提取物对·OH 的EC 50值/mg·mL-1
0.89
0.30
0.50
4 讨论
现代研究表明,人体内产生的自由基活跃且不稳定,过量
自由基可能会引起癌变和细胞凋亡,从而导致许多疾病发生,
如心血管疾病、老年痴呆等。而来源于植物的天然抗氧化剂,
不仅可以避免合成抗氧化剂的副作用,而且可以预防和治疗
这些疾病[5]。本研究探讨了豆科鸡眼草属植物鸡眼草3种溶剂
提取物对ABTS·+和·OH的清除能力,并对其总黄酮含量进行
测定。结果表明,AE对2种自由基的 S均为最高。提取物清
除自由基能力顺序为 AE>EAE>EE。这与其总黄酮含量由
高到低的顺序一致,表明较高的总黄酮含量是鸡眼草提取物
具有良好的自由基清除能力的主要原因。鸡眼草3种提取物
均有良好的自由基清除能力,可作为有效的天然抗氧化剂开
发应用。
参考文献
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(收稿日期:2011-03-12修回日期:2011-07-26)
图2 AE对ABTS·+的清除能力
Fig 2 Scavenging capacity of acetone extracts on ABTS·+
free radical
图3 3种提取物对ABTS·+的清除能力
Fig 3 Scavenging capacity of 3 extracts on ABTS·+ free
radical
图4 3种提取物对·OH的清除能力
Fig 4 Scavenging capacity of 3 extracts on hydroxy free
radical
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