全 文 ：医学研究杂志0 20 9 年2 1 月 第3 8卷 第2 1 期
· 论 着 ·
内源性精氨酸加压素在毒扁豆碱
引起大鼠低温反应中作用
杨永录 李晓 明 孟 立 果 颖
摘 要 目的 研究皮下注射毒扁 豆碱 ( PHY ) 引起低温反应与内源性精氨酸加压 素 (A V P) 的关系 。 方法 用无线遥测技
术连续记 录2 5℃ 环境温度中雌性大 鼠的体核温度和活 动 , 用 数字体温计测量尾部皮肤 温度 , 每次 间 隔 30 m in 。 皮 下注 射 P H Y
(0
.
25 m留 k g )引起大 鼠低温期 ,分别给动物注射中枢胆碱能 阻断剂东莫若碱 ( l m g / k g , cs ) 和 A V P V , 受体阻断剂 ( 30 卜 g / k g , ip ) 。
注射 PH Y 50 m in 后 , 测量血浆中 A V P 的含量 。 结果 皮下注射 P H Y 可导致体温快速降低 , 同时伴有尾 部皮肤散热反应 明显增
加 。 在给 P H Y 50 m in 后 , 血浆中 A V P 的含量明显升高 。 东蓑若碱和 A V P V 、 受体阻断剂可明显 阻断 P H Y 引起的低温反应 。 结
论 内源性退热物质 A V P 参与 P H Y 引起 的低温反应过程 。 这可能是易逆性 抗胆碱醋酶药 ( 如 P H Y )引起低温反应 的一 个新机
制 。
关键词 毒扁豆碱 低温 精氨酸加压素 精氨酸加压 素 V , 受体阻断剂
R o l e o f E n d o g e n o u s A r g i n in e V a s o P r e s s i n i n P h y s o s t ig m in e I n d u c e d H y P o ht
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r a t s m a in t a in e d a t a n a m b i
e n t t e m p e r a t u r e o f 2 5℃ . T a i l s k i n t e m P e r a t u r e w a s m e a s u r e d a t 3 0 m i n i n t e r v a ls w i t h d i g i t a l t h e r m o m e t e r . T h e
e e n t r a l e h o li n e r g i e a n t a g o n i s t
, s e o p o ]a m i n e ( 1m g / k g )
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n i s t e r e d d u r i n g t h e p e r i o d o f p H Y
( 0
.
2 5 m酬 k g ) in d u e e d h yp o th e r m i a · p la s m a A V p e o n e e n t r a t i o n w a s m e a s u r e d a t 5 0 m i n a ft e r a dm i n i s t r a t i o n o f p H Y . R e s u l t s S u b e u t a -
n e o u s in j e e t i o n o f P H Y le d t o a r a P id r e d u e t i o n in e o r e t e m P e r a t u r e e o n e o m i t a n t w i t h a m a rk e d e l e v a t i o n i n th e h e a t 10 5 5 ofr m th
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一 a n t a g o n i s t
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P la s m a AV P e o n e e n t r a t i o n i n e r e a s e d m a r k e d ly a t 5 0
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C o n e l u s io n
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s o l t s s u g g e s t th a 之 e n d o g e n o u s A V P e o u ld b e in v o l v e d i n P H Y 一 i n d u e e d h y P o t h e r m j e P r o e e s s e s . T h i s
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s u e h a s p H Y )
一 in d u e e d h y p o th e rm i a
.
K e y w o r d s Ph y s o s t i g m i n e ; H y P o th e r m i a : A r g i n in e v a s o p r e s s i n ; A V P V
一 r e e e p t o r a n t a g o n i s t
毒扁豆碱 ( P HY )是一种易逆性抗胆碱酷 酶药 ,
在动物实验和临床药理中 ,被广泛用于拟胆碱药来研
究中枢生理性和病理性的机制 〔’ 一 ’ } 。 有研究发现 , 往
大鼠侧脑室注射 P H Y 不仅可以引起正常动物出现低
温反应 ,而且还 能阻止 动物活动引起 的体温 升高反
应 〔4 一 6 〕 。 关于 P HY 对体温调节 的作用 机制研 究不
多 , 目前认为 P H Y 的低温效应与 P H Y 抑制胆碱醋酶
( A ChE )活性 ,导致生理作用部位胆碱能递质系统活
动增强有关 ,因为乙酞胆碱 ( A c h )能降低机体产热和
提高散热反应 L4 , , 〕 。 另外 , A ch 还能促进 内源性退热
基金项 目 : 国家自然科学基金资助项 目 ( 3 0 8 7 0 901 )
作者单位 : 6 1 00 8 3 成都 , 成都 医学 院生理教研室 (杨永 录 、 孟立 、
粟颖 ) ; 兰州军区总医 院 ( 李晓明 )
通讯作者 : 杨永录 , 电子信箱 : y ly an g@ c m c . e d u . C n
物质精氨酸加压素 ( A v )P 的分 泌或释放 L ’ 」。 所 以本
实验用无线遥测技术连续 同步观察皮下注射 P H Y 对
体温和活动 的影 响与 内源性 A V P 的关 系 , 旨在为
P HY 引起低温反应的机制和临床合理应用药提供新
的实验依据 。
材料与方法
1
. 动物 、 药品和试剂 :实验用成年雌性 SD 大鼠 ( 四川医学
科学院实验动物研究所提供 ) , 体重 2 10 ~ 2 6吨 。 毒扁豆碱 、东
蓑若碱和 A v P v ; 受体阻断剂均为 iS g m a 公司产品 , A V P 放射
免疫测定盒是美国 iD as r in 公 司产品 。
2
. 动物手术 : 用 4% 戊 巴 比妥钠溶液腹 腔 注射麻 醉 ( 40
m岁 k g )动物 , 按照常规手术方法切开腹部皮肤和肌肉 , 种植无
线温度遥 测探头 ( d a t a s e i e n e e s in t e r n a t i o n a l , m o d e l T A 10 r A -
4F o )后 ,缝合腹部肌肉和皮肤 , 然 后肌 内注射青霉素以防感
染 。 手术后 ,动物分别单笼饲养 ,恢 复 7 天以上进行实验 。
·
2 5
·
· 论 着 · M ed R s e.D e e2 0 0 9 . Vo l 、 3 8 N o 、 12
3
.体核温度的测量 和判定体 温变化 的指 标 :用无线 遥控
技术 (r ai do tl e emt er y)测量 大鼠的体温 和活 动 。 将腹腔内置有
无线温度遥测探头的大鼠放入清洁鼠笼 内 , 然后置于遥控测
温仪 的接收板上 。 大鼠体内无线遥测探头每间隔 s m in 采集 1
次体核温度信号 , 由接收板接收后 , 输人计算机储存和数据处
理 。 用数字测温仪 (北 京 司南仪器厂 生产 )测 量尾 部皮肤温
度 。 在实验前 1 天下午剃 去尾 部测温部位的毛 , 所有实验动
物测量皮肤温度的部位均为尾部背侧距尾根部 1 . oc m 处 。 为
了减少频繁测 温引起应激性体温升高反应对实验结果的影
响 , 在实验中每次测量皮肤温度间隔时间为 30 m in 。 体温反应
指标用体温变化时 间曲线 和体温反应最大幅度与基线体温之
间的差 ( △ )T 表示 。 散热反应指标用散热指数 ( H LI )表示 [ ’ 〕 ,
H L I 的计算公式是 : H L I = ( T 。 ` 一 T 。 ) / ( T 。 一 T 。 ) 。 H LI 可 以排
除环境温度 ( T 。 ) 和体核温度 ( T 。 )对皮肤温度 ( T 。 、 ) 的影 响 , 正
常值为 O 一 1 。 当 H LI 值为 0 时 , 表示皮肤血 管完全处 于收缩
状态 ; 川一 J 值为 l 时 ,表示皮肤血管完全处于舒张状态 。
4
. 实验分组与步骤 : 实验分为两部分 。 ( l) 观察毒扁豆碱
( P H Y )引起 大鼠体温和活动的变化与尾部皮肤温度 反应的关
系 以及中枢胆碱能阻断剂东蓖若碱对其效应 的影响 。 实验分
为对照组 ( n = 9 ) : 皮下注 射无菌 生理盐水 2 m l / k g ; P H Y 组 ( n
二 9 ) :皮下注射 p H Y 0 . 2 5 m g / k g ( 0 . 2 5 m g / m l 生理盐水 )和生
理盐 水 l m l/ k g ; P H Y + 东蓑若碱组 ( n 二 9) : 皮 下 注射 P H Y
0
.
2 5 m酬 k g 和东食若碱 1 m g / k g ( 1 m g / m l 生 理盐水 ) 。 ( 2 )观
察 A V P V , 受体阻断剂对 P H Y 引起大鼠体温 和活动变化 的影
响 以及 P H Y 引起大鼠低温反应与血浆中 A V P 含量变化的关
系 。 实验分为对照组 、 P H Y + 盐水组 和 P H Y 十 A V P V , 受体阻
断剂 组 , 每组各 9 只大 鼠 。 腹 腔 注 射 A V P V . 受体 阻断剂
30 哪k/ g ( 30 此 / ml 生理盐水 ) , 皮下注射 P H Y 的剂量和 生理
盐水的容量同 ( 1 ) 。 实验前 1 天下午 ,将大鼠移入实验室 , 称
体重后置于 25 ℃ 的人工气候箱 内 ( 重庆永 生实验仪器 厂产
品 ) , 动物处于 自由活 动 、 进食和进水状态 , 进行适应性过夜 。
箱内明暗时间各为 1h2 , 上午 6 时开灯 , 下午 6 时关灯 。 实验
当天上午 8 时开始记录大鼠的体温和活动 , 上午 10 时动物给
药后 , 连续观察体温和活动的变化 。
5
. 血浆 中 A v P 含 量 的测 量 : 用 放射免疫法 测量 血 浆中
A v P 的含量 。 采用含有肝素的注射器经心脏穿刺法抽取血液 ,
并将其放在冰中 , 然后在 5℃ 条件下离心 巧 m in ( 4 0 0 o x g ) , 取
血浆储存于 一 30 ℃ 的冰箱中 , 以备测量 A V P 含量 。
6
. 统计分析 :实验数据用 牙幻表示 , 采用配对 t 检验或 团
体比较 t 检验进行统计分析 。
结 果
1
. 中枢胆碱能阻断剂东蓑若碱对 P HY 引起降温
作用 的影响 :从 图 1 连续记 录的实验结果来 看 ,对照
组注射生理盐水后体温曲线无明显变化 , 而皮下注射
P HY 可导致大鼠的体温快速降低 ,在给药 50 m in 后 ,
体温 由给药前 ( 36 . 94 土 0 . 46 ) ℃ (面土 3 ,下同 ) 降低到
( 3 5
.
9 7 士 0 . 6 2 )℃ , △ T 为 ( 一 0 . 9 7 士 0 . 2 6 )℃ ( P <
0
.
0 1 )
,给药后 70 m in 体温恢复到基线水平 。 中枢胆
碱能阻断剂东蓑若碱则可以 明显翻转 P H Y 的降温效
应 , 在 给 药 50 m in 后 , 体 温 由 给 药 前 ( 36 . 89 士
0
.
2 9 ) ℃升高到 ( 3 7 . 5 6 士 0 . 4 1 ) ℃ , △ T 为 ( 0 . 6 7 士
0
.
38 ) ℃ ( 尸 < 0 . 01 ) ,持续到给药后 3 . s h , 体温恢 复
基线水平 ; 同时大 鼠的活动也出现快速增加反应 ,也
持续到给药后 3 . s h 恢复基线水平 (图 1 ) 。
3 8巧
给药
3 8
.
( )
ǎ求O一、写à
OC曰
称坦
36
一
0
3 5 ) 咭 2 3 4
IJ寸问 ( h ) 卜l寸间 ( h )
图 1 东莞若碱对 P H Y 引起低温反应 ( A )和动物活动 ( B )的影响 (妥士 、 )
S A L
: 生理盐水 ; P H Y : 毒扁豆碱 ; SC P : 东蓖若碱 ; * 尸 < 0 . 05 , 巾 中 P < 0 . 01 , 与生理盐水组 比较
2
. 东蓑若碱对 P H Y 引起大鼠低温反应 与尾部散
热变化的影响 : 给大鼠皮下注射 P H Y 体 温出现 降低
反应时 ,伴有尾部皮肤温度升高 ,散热指数明显增加
(图 2 ) 。 皮下注射东蓑若 碱可 阻断 PH Y 降温效应 ,
并且尾部皮肤温度降低 ,散热指数也明显降低 ,但持
续 的时间较动 物活动增 加持续 的时 间短 ( 图 1 、 图
2 )
。
2 6
医学研究杂志 2 0 0 9年 2 1) J 第 8 3卷 第 2 1期 · 论 着 ·
一 S A L +S A L
~
P Y H +只A L
戴积瑞拓
国曰
一 P Y H +A V P 丫一 P HY +S C I〕
戴葬纂招
} !寸问 (}, ) 一于,J问 (11)
图 2 生理盐水 ( S A L ) 、 毒扁豆碱 ( p H Y ) 、 精氨酸加压素 V ; 受体阻断荆 ( A V p V , )和
东蓖若碱 ( S C )P 对大 鼠散热指数 ( H L )I 的影响 (夏士 、 , n 二 9)
’ 尸 < 0 . 05 , 与生理 盐水组和给药前 比较
3
.
P H Y 引起的低温反应与内源性精氨酸加压素
的关系 : 给大鼠皮下注射 P H Y 后 ,立即腹腔注射 A V P
V I 阻断剂可明显阻断 P H Y 引起的低温反应 ,在给药
s o m in 后 ,体温由给药前 ( 36 . 78 士 0 . 28 ) ℃ 只降低到
( 3 6
.
5 9 士 0 . 6 1 ) ℃ , △ T 为 ( 一 0 . 19 土 0 . 2 0 )℃ , 与
P H Y 组 比较相差极显著 (尸 < 0 . 01 ) , 同时尾部皮肤散
热指数明显降低 ;但 A V P V , 阻断剂对大 鼠的活动无
明显影响 (图 2 、 图 3 ) 。 给大鼠皮下注射 PH Y 5 0 m in
后 ,体温降低到最低点时 ,血浆中的 A V P 浓度则明显
提高 ,与对照组 比较相差显著 ( 尸 < 0 . 0 5 ) ( 图 4 ) 。 此
外 ,从图 1 和图 3 中可见所有动物在给药均 出现一个
快速而短暂的活动增加反应 以及对照组体温也 出现
短暂的升高反应 , 这是 由于移动动物和注射药物而
引起的应激性活动增加和体温升高反应 。
3 8刀
3 7 5
ǎ巾O一、韶à商坦
3 6刀
3 5
.
5
3
日寸l司 ( h )
3
时间 ( h)
图 3 毒扁 豆碱 ( p H Y ) + 生理盐水 ( s A L )和 p H Y + 精氨酸加压素 V , 受体阻断剂 ( A V p V , )
对大鼠体温 ( A )和活动 ( B )的影响 (王士 ￡ , n 二 9)
*
P < 0
.
0 5
, ” P < 0 . 0 1 , 与 P H Y + S A L 组 比较
讨 论
众所周知 ,临床上使用 PH Y 通常是经皮下或肌
肉注射的外周给药途径 , P H Y 进人体 内后不仅 能透
过血脑屏障抑制 中枢胆碱醋酶 ( A hc E ) 的活性 , 同时
也能广泛抑制外周 A ch E 的活性 〔’ , , 〕。 关 于 P HY 对
体温调节的作用 , 以往 的作者是经侧脑室给药证 明 ,
PH Y 能引起明显 的低 温反应 仁` 一 6 〕 , 但外周 给药对 体
温影响 的研究 未见报 道 。 本 实验 给大 鼠皮 下注 射
P H Y 后 ,能快速引起正常大 鼠出现 明显 的低温反应
和尾部皮肤的散热反应增加 ,而皮下注射中枢胆碱能
受体阻断剂东食若碱则能明显 翻转 P H Y 的低温效应
和阻断 尾部皮 肤 的散热 反应 。 实 验证 明 , 外 周 给
PH Y 引起的低温反应是通过兴奋体温调节中枢散热
通路 , 引起 散热增 加所 致 。 另外 , 东蓖 若碱在 翻转
PH Y 的低温效应 中 , 提高动物活动 持续 的时间明显
长于散热指数降低所持续的时间 ,提示胆碱能阻断剂
论 着 J M e d Re s, D e e 2 0 0 9 , V o l . 3 8 N o . 1 2
桨谓一主冬`补V
S A L P }{ Y
图 4 给大 鼠皮下 注射生理 盐水 ( S A L )和毒扁豆碱
( P H Y )对大 鼠血 浆中精氨酸加压素 ( A V P )
含量的影响 ( x 土 s , n = 7 )
` 尸 < 。 . 05 , 与生理盐水组比较
翻转 PH Y 的低温反应 主要与提高动物 的活动 , 而导
致机体产热增加有关 。 抗胆碱醋酶剂对体温调节的
作用已经引起了人们的关注 } 8 , , : 。 许多研究证明 ,难
逆性抗胆碱醋酶剂 引起的调节性低 温 ( r ge ul at de h y -
oP ht er m ia )反应对机体有 一定的保护作用 , 并且对其
机制也进行了较多的研究 [ 8 , 9 ’ 。 我们 以 前的工作证
明 , 内源性退热物质 A V P 参与难 逆性抗胆碱醋酶剂
有机磷杀虫剂毒死蚌和神经毒 剂梭曼引起的调节性
低温反应过程 l ’ 。 · ” 」。 因为 A v P 具有限制发热 、 促进
退热 、 抑制应激性体温过高和参与调节性低温的反应
过程 [ ’ 。 一 `’ { 。 为了探讨 易逆性抗胆碱酷酶药 P H Y 引
起低温反应的机制 ,本实验观察了 A V P 在 P H Y 引起
低温反应 中的作用 。 实验结果显示 ,给大鼠腹腔注射
A V P V , 受体阻断剂能 明显阻断皮下注射 P H Y 引起
的低温反应 ; 在给 P H Y 5 0 m in 后 , 即体温降低到最低
点时 , 血浆中的 A V P 浓度则 明显提高 。 实验从两方
面证明 , 内源性 A V P 参与 P H Y 引起 的低温反应 过
程 。 这可能是 P H Y 引起低体温反应的一个新机制 。
上述实验证明 , 外周注射 P H Y 能提高机体 的散
热反应 ,而导致机体出现低温反应 ,其机制可能与体
内的 A V P 升高有关 。 另外 ,实验也为 P H Y 的临床应
用提供了一个有趣的实验依据 , 即要注意用药不当出
现低温反应 。 由于低温现象和危害性 未引起人们足
够的重视 ,在急诊病人中往往容易被忽略 , 在临床上
因低温而影响治疗效果或者致人死亡 的病例并不少
见 。
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d u r i n g fe v e r [ J」. J N e L, r o s o i N u 。 , 20 0 3 , 35 ( 5 ) : 2 8 1 一 2 8 6
( 收稿 : 20 0 9 一 0 9 一 0 2 )
( 修 回 : 20 0 9 一 10 一 2 0 )
儿奎基金套和世界卫 生租 担 发起腹 泻 病防治 战略
腹泻病是儿童的第二大致命杀手 。 在发达国家中 , 腹泻病 只是造 成一些不便而 已 , 而在发展 中国家 , 每年共有 1 50 万儿童
因患腹泻病 而夭折 。 虽然 已有廉价和有效 的腹泻病治疗方法 ,但在发展中国家 , 只有 39 % 的腹泻 儿童获得所推荐的治疗 。 联合
国儿童基金会和世 界卫生组织发表 r 一份题为《造 成儿童腹泻死亡的原 因和我们的对策 》的专题报 告 , 呼吁重振全球防治腹泻病
运 动 , 并就此提出了 7 点讨一划 :补液治疗 , 以防脱水 ;补锌治疗 ;接种轮状病毒疫苗和麻疹疫苗 ; 鼓励早期 纯母乳 喂养和补充维生
素 A ;促进用肥皂洗手 ;改善供水数量 和质量 , 包括改进家庭 用水 的处理 和安全储存 ;促进社区环境卫生 。
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