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砂生槐种子水提物对S180荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用



全 文 :·20· Chinese Journal of Information on TCM May 2009 Vol.16 Suppl.

·实验研究·
砂生槐种子水提物对 S180 荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用
贺学强 1,郭 君 2
(1.中国人民解放军第 181 中心医院,广西 桂林 541002;2.广西壮族自治区南溪山医院,广西 桂林 541002)
摘要:目的 研究砂生槐种子水提取物的体内抗瘤作用,探讨其抗癌的药理机制。方法 以 S180 荷瘤小鼠为研
究对象,分别观察砂生槐种子水提取物各剂量组对 S180 荷瘤小鼠的抑瘤率、生存期、胸腺指数、脾脏指数、T 淋巴
细胞增殖活性。结果 砂生槐种子水提取物 1 200、2 400 mg/kg 剂量组的抑瘤率分别为 34.9%、41.4%,与荷瘤对照
组比较差异有统计学意义(P<0.05);小鼠平均存活时间与荷瘤对照组比较明显延长(P<0.01)。结论 砂生槐种子
水提取物能明显抑制 S180 小鼠体内肿瘤生长,并具有延长荷瘤小鼠生存期的作用。
关键词:砂生槐种子水提取物;S180 荷瘤小鼠;抗肿瘤
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2009)S05-0020-02
Effect of SMSWE Anti-tumor on S180 Sarcoma in Mice HE Xue-qiang1, GUO Jun2 (1.No.181 Center Hospital
of PLA, Guilin 541002, China;2.Nanxishan Hospital of Guangxi, Guilin 541002, China)
Abstract:Objective To study the anti-tumor effect of water extracts from Sophora Moorcroftiana seed (SMSWE) in vivo on
mice. Methods S180-bearing mice group were observed. The inhibitory rate of tumor, survival period, indexes of thymus and
spleen, the proliferative ability of T lymphocytes were assayed. Results 1.2 and 2.4 g/kg SMSWE could inhibit the growth of S180
tumor in mice and prolonged survival period (P<0.05). SMSWE of 1.2 and 2.4 g/kg had inhibitory effects on tumor growth in
inhibitory rate of 34.9% and 41.4%. Conclusion SMSWE could inhibit the growth of tumor and prolong the survival period of
S180-bearing mice.
Key words:water extracts from Sophora Moorcroftiana seed;S180 bearing mice;anti-tumor
砂生槐(Sophora Moorcroftiana,SM)泛指豆科槐属,又名
西藏“狼牙刺”、“刺紫”,具有抑菌、抑病毒、抗心率失常、
调节免疫等多种药理学作用[1]。以往多见于对其营养成分的分
析[1-2],马氏等[3]体外试验结果显示,砂生槐种子生物碱具有诱
导 SCG-7901 细胞凋亡的作用,但对砂生槐种子水提取物(Water
extracts from Sophora Moorcroftiana seed,SMSWE)抗肿瘤作
用方面,尤其是体内抗肿瘤作用的研究尚未见报道。本实验对
SMSWE 的小鼠体内抗肿瘤作用进行了初步探讨,现报道如下。
1 实验材料
1.1 实验动物
昆明种小鼠,清洁级,6~8 周龄,体重(22±2)g,雌雄各半,
由兰州大学医学实验动物中心提供(医动字第 14-005 号)。
1.2 瘤株
小鼠 S180 肉瘤腹水型细胞株由兰州大学药理研究所提供,
由本研究所定期腹腔接种传代保种。
1.3 主要仪器
YJ-875 超净工作台(苏州净化设备公司),DG-3022 酶联免
疫测定仪(华东电子医疗设备厂)。CO2 培养箱:美国杜邦公司
产品。
1.4 药物与试剂
SMSWE 由兰州大学天然药物化学研究所提供,纯度 98%。
RPMI-1640 培养基由美国 Invitrogen 公司提供;小牛血清购
自杭州四季青生物有限公司;刀豆蛋白 A(conA)、脂多糖
(LPS)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏
死因子-α(TNF-α)均购自华美生物工程公司;环磷酰胺(CTX)
购自江苏恒瑞医药股份有限公司(批号 06050821);分析纯二
甲亚砜(DMSO)为金山化工厂产品。
2 实验方法
2.1 肿瘤模型的建立
将接种肿瘤细胞后 7 d 生长良好的小鼠颈椎脱臼处死。置
75%酒精中浸泡 10 min,置超净工作台,从腹腔抽出的乳白色腹
水,用无菌生理盐水按 1∶4 比例配制成癌细胞悬液(2×10/mL),
每只小鼠右腋窝皮下接种 0.2 mL。以上均在无菌环境中操作。
2.2 分组及给药
设 6 组,每组 10 只,雌雄各半。设 1 组为不接种瘤株的生
理盐水正常对照组;余 50 只小鼠每只右腋皮下接种 0.2 mL
癌细胞悬液,24 h 后随机分为 5 组,即荷瘤对照组、环磷酰胺
对照组及 SMSWE 600、1 200、2 400 mg/kg 3 个剂量组。正常
对照组和荷瘤空白对照组用生理盐水灌胃,阳性药对照组腹腔
注射环磷酰胺 20 mg/(kg·d),连续给药 5 d,SMSWE 3 个剂量
组接种第 2 天开始灌胃给药,每日 1 次,连续 10 d,第 11 天处
死小鼠。
2.3 细胞悬液制备
给药结束后第 2 天小鼠眼球采血后颈椎脱臼处死小鼠,无
2009 年 5 月第 16 卷增刊 中国中医药信息杂志 ·21·

菌条件下取出肿瘤组织,脾脏分别置于盛有 RPMI-1640 培养
液的培养皿中,将脾脏剪碎后用玻璃针心轻轻挤压,使细胞分
散为悬液,用 200 目不锈钢网滤出单细胞悬液,经洗涤 2 次后
(1 000 r/10 min),用RPMI-1640培养液调细胞浓度至5×10/mL。
2.4 观察指标及方法
2.4.1 肿瘤抑制率 停药后第 2 天处死小鼠,剥离完整肿瘤
组织,电子天平称量瘤体湿重(精确到 0.010)并计算肿瘤生长
抑制率。肿瘤组动物平均质量小于 1 表示肿瘤生长不良,实验
组小鼠死亡率超过 20%表示药物所致毒性。抑瘤率=(对照组
平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。
2.4.2 对小鼠免疫器官和生存期的影响 灌胃给药结束后次
日解剖小鼠,取出胸腺、脾脏,计算脏器重量。脏器指数=免疫
器官质量/体质量×1 000。生命延长率(%)=(给药组平均存活
天数-模型组平均存活天数)/模型组平均存活天数×100%。
2.4.3 荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖活性 应用MTT法(噻唑蓝比
色法)测定 T淋巴细胞转化活性,用检测波长 570、630 nm 为参
比波长进行比色测 A值。以刺激指数(SI)作为判断淋巴细胞增
殖的程度。SI=实验孔 A/对照组 A。淋巴细胞转化率(%)=(实
验孔 A 值-对照孔 A值)/对照孔 A值×100%。
2.4.4 细胞因子测定 采用小鼠 IL-2、TNF-α放免试剂盒,
严格按照说明书操作。
3 统计学方法
用 SPSS10.0 统计软件分析。检测结果采用—x±s 表示,各组
间均数比较采用单因素方差分析,实验组与对照组间均数比较
用独立样本 t检验。
4 结果
4.1 小鼠一般生长情况
荷瘤小鼠与对照组相比,活动减少,精神较差,饮水饮食减
少。而药物治疗组小鼠活动增多,体重增加,精神尚可。
4.2 各组抑瘤率比较(见表 1)
表 1 SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用(—x±s)
组别 n 剂量(mg/kg) 肿瘤重量(g) 抑瘤率(%)
空白对照组 10
荷瘤对照组 10 1.11±0.11
环磷酰胺组 10 20 0.61±0.16* 49.9
SMSWE低剂量组 10 600 0.83±0.12 25.2
SMSWE中剂量组 10 1 200 0.72±0.13* 34.9*
SMSWE高剂量组 10 2 400 0.65±0.20* 41.4*
注:与荷瘤对照组比较,*P<0.05(下同)
4.3 SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠 T淋巴细胞增殖活性的影响
本实验显示,3种浓度的SMSWE对 S180荷瘤小鼠 T淋巴细
胞增殖活性并无显著影响,与正常对照组和荷瘤对照组比较
差异均无统计学意义(P>0.05);但在 1 200 mg/kg 剂量时与
环磷酰胺组比较,SMSWE对 S180荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖活性
还是具有明显影响。
4.4 SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠血清细胞因子的影响
荷瘤小鼠的血清 IL-2、TNF-α水平与正常对照组比较明
显降低。SMSWE 1 200、2 400 mg/kg 时,荷瘤小鼠的血清IL-2、
TNF-α含量显著高于荷瘤对照组(P<0.05,P<0.01)。
4.5 SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数及生存期的
影响
实验中得出各剂量组的胸腺和脾脏指数与荷瘤对照组比
较差异无统计学意义(P>0.05)。而从表 2可见,SMSWE 能够明
显延长小鼠带瘤生存时间,SMSWE 各剂量组小鼠平均存活时间
均长于肿瘤模型组(P<0.05)。
表 2 SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠生存天数和生命延长率的影响(—x±s)
组别 n 剂量(mg/kg) 生存时间(d) 生命延长率(%)
空白对照组 10 30±2.2
荷瘤对照组 10 24±3.2
环磷酰胺组 10 20 38±2.2 58.0
SMSWE 低剂量组 10 600 30±2.1 25.1*
SMSWE 中剂量组 10 1 200 32±1.7* 33.3*
SMSWE 高剂量组 10 2 400 35±1.1* 45.7*
5 讨论
治疗恶性肿瘤的有效方法包括手术、放疗、化疗。多年临
床研究证明,这些治疗在除去或杀伤肿瘤细胞和组织的同时,
对正常细胞和组织也有着极大的破坏效应,并且使得机体的各
种生理功能遭受严重的损害,容易导致患者死亡。能否找到一
种不杀伤正常细胞为手段的治疗方法,在肿瘤的治疗中显得尤
其重要[2]。因此,寻找高效低毒的抗癌药物以及抗癌辅助药物
是当前肿瘤研究的重要课题。
许多中药具有抑制肿瘤生长作用,且不良反应较低,近些
年有些中药做为抗肿瘤药物已应用于临床[4-5],并显示出了较
好的抗癌效果。本研究选取的砂生槐是我国西藏高原一种特有
植物物种,以往进行的体外实验和研究已证实,SMSWE 对培养
的多种人肿瘤细胞具有杀伤作用[4]。基于此,笔者对 SMSWE 进
行了体内抗肿瘤实验研究,结果显示SMSWE对S180荷瘤小鼠具
有明显抗瘤效果,且各剂量组均无死亡现象,根据预试验对药物
剂量的摸索,该药物毒性低,本实验采用600、1 200、2 400 mg/kg
3 个剂量组。在 1 200、2 400 mg/kg 剂量组的抑瘤效果分别可
达 34.9%、41.4%,差异有统计学意义。
综上所述,SMSWE 对 S180 荷瘤小鼠具有明显抗肿瘤效果,
且各剂量组均无死亡现象,作为抗癌药物,值得进一步研究。
参考文献:
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[5] Rowley PT, Tabler M. Telomerase inhibitors[J]. Antiancer Res,
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(收稿日期:2008-05-08,编辑:陈静)