全 文 ： 药理药化
收稿日期:2007-04-07;　修订日期:2007-11-27
作者简介:郭　君(1981-),女(汉族),甘肃兰州人 ,现为兰州大学基础医学
院免疫学研究所在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事肿瘤免疫研究工作.
＊通讯作者简介:马兴铭(1969-), 男(汉族),甘肃人 ,现任兰州大学基础
医学院免疫研究所副教授 ,博士学位 ,主要从事肿瘤免疫分子研究工作.
砂生槐种子水提物对荷瘤小鼠免疫功能的影响
郭　君 1 , 马兴铭1, 2＊ , 安方玉 1 , 田卫花1
(1.兰州大学基础医学院免疫学研究所 ,甘肃 兰州　730000;
2.甘肃省新药临床前研究重点实验室 ,甘肃 兰州　730000)
摘要:目的 研究砂生槐种子水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 以 S180荷瘤小鼠为研究对象 ,砂生槐种子水提
取物不同剂量连续灌胃给药 10 d, 分别测定其抑瘤率 、胸脾指数 、自然杀伤细胞 、白细胞介素 -2(IU-2)水平。 结果 砂
生槐种子水提取物在 1 200 mg/kg, 2 400mg/kg剂量组时 ,其抑瘤率分别为 34.9%, 41.4%;用药灌胃后 ,白细胞介素 -2
(IU-2)含量及 NK细胞杀伤活性均显著提高(P<0.01)。结论 砂生槐种子水提取物可通过提高荷瘤小鼠免疫功能而
发挥抗肿瘤作用。
关键词:砂生槐种子水提取物;　抗肿瘤;　免疫活性调节
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-封 3-02
TheEffectofWaterExtractfromSophoramoorcroftiana(SMSWE)onImmuneFunc-
tioninTumor-bearingMice
GUOJun1 , MAXing-ming1, 2＊ ,ANFang-yu1 , TIANWei-hua1
(DepartmentofImmunology, InstituteofBasicMedicalScience, LanzhouUniversity, Lanzhou730000 China;2.
TheKeyLaboratoryofNowDruy, LanzhouUniversity, Lanzhou730000 China)
Abstract:ObjectiveTostudytheefectofwaterextractfromSophoramoorcroftiana(SMSWE)onimmunefunctionintumor-
bearingmice.MethodsS180-bearingmicewereusedandtheinhibitoryrateoftumor, indexesofthymusandspleen, activityof
NKandthelevelofIL-2 weredetected.Results 1200 and2400 mg/kgSMSWEcouldinhibitthegrowthofS180-bearing
miceandinhibitoryrateswere34.9% and41.4% respectively.ThelevelofIL-2 andactivityofNKweresignificantlyhigher
thanthoseinS180-bearingcoutrolgroup(P<0.01).ConclusionSMSWEhasanti-tumoreffectandcanenhancetheimmune
functioninS180-bearingmice.
Keywords:WaterextractsfromSophoramoorcroftianaseed;　Anti-tumorefect, 　Activityofimmune
　　砂生槐(Sophoramoorcroftiana, SM)泛指豆科槐属 ,又名西藏
“狼牙刺”“刺紫” 。据报道 , 砂生槐具有抑菌 、抗病毒 、抗心律失
常 、调节免疫等多种药理学作用 [ 1] 。以往对其营养成分的分
析 [ 2, 3]的报道较为多见 , 马兴铭等 [ 4]体外实验结果显示 , 砂生槐
种子生物碱能诱导 SCG-7901细胞凋亡的作用 , 但对砂生槐种
子水提取物 (Waterextractsfrom Sophoramoorcroftianaseed,
SMSWE)抗肿瘤作用方面 ,尤其是体内抗肿瘤作用的研究尚未见
报道。本实验探讨砂生槐种子水提取物对小鼠免疫功能的影响。
现报道如下。
1　材料与仪器
1.1　药物 砂生槐种子水提取物由兰州理工大学杨云裳博士
馈赠。
1.2　动物及瘤株
1.2.1　动物 昆明种小鼠(合格证:医动字第 14-005号),清洁
级 , 6 ～ 8周龄 ,体重(22±2)g, 雌雄各半 ,由兰州大学医学实验动
物中心提供。
1.2.2　瘤株 小鼠 S180肉瘤腹水型细胞株和 YAC-1细胞株由
兰州大学药理研究所提供 ,由本研究所保存。
1.3　仪器及试剂
1.3.1　仪器 YJ-875超净工作台(苏州净化设备公司), DG-
3022酶联免疫测定仪(华东电子医疗设备厂), CO2培养箱:美国
杜邦公司产品。
1.3.2　试剂 RPMI-1640培养基由美国 Invitrogen公司提供;
小牛血清购自杭州四季青生物有限公司;白细胞介素 -2(IL-
2)放射免疫检测试剂盒购自华美生物工程公司;环磷酰胺
(CTX)购自江苏恒瑞医药股份有限公司(批号 06050821);分析
纯二甲亚砜(DMSO)为金山化工厂产品。
2　方法
2.1　肿瘤模型的建立 将接种肿瘤细胞后 7d生长良好的小鼠 ,
颈椎脱臼处死 ,置 75%的酒精中浸泡 10 min, 置超净工作台 , 从
腹腔抽出的乳白色腹水 ,用无菌生理盐水按 1∶4比例配制成癌
细胞悬液(2×106 /ml)。将该肿瘤细胞悬液对实验小鼠进行造
模 , 每只小鼠右腋窝皮下接种 0.2 ml。以上均在无菌环境中
操作。
2.2　分组及给药 设 6组 , 每组 10只 , 雌雄各半。设一组为不
接种瘤株的生理盐水正常对照组;余 50只小鼠每只右腋皮下接
种 0.2 ml癌细胞悬液 , 24 h后随机分为 5组 , 即荷瘤对照组 , 环
磷酰胺对照组及砂生槐种子水提物 600, 1200, 2400 mg/kg3个剂
量组。正常对照组和荷瘤空白对照组用生理盐水灌胃 ,环磷酰胺
对照组腹腔注射环磷酰胺 20 mg/(kg· d), 连续给药 5 d,砂生槐
种子提物 3个剂量组于接种第 2天开始灌胃给药 , 1次 /d, 连续
10 d,第 11天处死小鼠。
2.3　测肿瘤抑制率 停药后第 2天处死小鼠 , 剥离完整肿瘤组
织 , 电子天平称量瘤体湿重(精确到 0.01 g)并计算肿瘤生长抑
制率。
抑瘤率(%)=荷瘤对照组平均瘤重 -给药组平均瘤重荷瘤对照组平均瘤重 ×100%
肿瘤组动物平均质量小于 1表示肿瘤生长不良 ,实验组小鼠
死亡率超过 20%表示药物所致毒性。
2.4　观察对小鼠免疫器官的影响 。灌胃给药结束后次日解剖
小鼠取出胸腺 , 脾脏 ,计算脏器重量 、脏器指数。脏器指数 =免疫
器官质量 /体质量 ×1000
2.5　荷瘤小鼠NK细胞杀伤靶活性的测定 常规制备脾脏细胞 ,
制成浓度为 5×106个 /ml的细胞悬液。与 96孔板每孔中分别加
入 100 μl脾细胞悬液和(YAC-1细胞 , 靶细胞(YAC-1细胞 ,
浓度为 1×106个 /ml, 效靶比值为 50:1), 设靶细胞自然释放组
和最大释放对照组(YAC-1细胞 100 μl+1%NP-40 100 μl)。
每样本设 3个重复孔 , 培养 16 h后 ,吸出各孔上清 100μl加入另
一细胞培养板中 , 置 37℃ 10 min, 每孔加入新鲜配置的低物液
100μl,室温 、避光反应 10 ～ 15 min, 再加入 1.0 mol/L柠檬酸终
止液 30μl,酶标分析仪 570 nm波长处测定 A值 , 按以下公式计
算 NK细胞杀伤靶活性。 NK细胞活性(%)=(实验组 A-自然
释放组 A)/(最大释放组 A-自然释放组 A)×100%。
2.6　细胞因子测定 采用小鼠白细胞介素 -2放免试剂盒 , 严格
按照说明书操作。
2.7　统计学方法 用 SPSS10.0统计软件分析。检测结果采用 x
±s表示 ,各组间均数比较采用单因素方差分析 , 实验组与对照
组间均数比较用独立样本 t检验。
3　结果
3.1　抑瘤率 实验显示 , 砂生槐种子水提取物 1 200 mg/kg, 2 400
mg/kg剂量组对 S180小鼠的生长具有一定抑制作用 , 抑瘤率分别
为 34.9%, 41.4%。 与荷瘤对照组比较有显著性差异(P<
0.01)。结果见表 1。
表 1　SMSWE对 S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用
组 别 剂量 C/mg· kg-1 肿瘤重量 m/g 抑瘤率(%)
正常对照 - -
荷瘤对照 1.11±0.11 -
环磷酰胺 20 0.54±0.16﹡ 50.9
砂生槐种子
600 0.83±0.12 25.2水提物低剂量
砂生槐种子
1200 0.72±0.13﹡ 34.9水提物中剂量
砂生槐种子
2400 0.65±0.20﹡ 41.4水提物高剂量
　　与荷瘤对照组比较 , ﹡ P<0.05, ﹡﹡P<0.01;n=10
3.2　对胸腺指数及脾脏指数的影响 从表 2可以看出用药各剂
量组的胸腺和脾脏指数与荷瘤对照组比较无显著差异(P>
0.05)
表 2　SMSWE对 S180荷瘤小鼠胸腺指数 、脾脏指数的影响( x±s)
组 别 剂量C/mg· kg-1
胸腺指数
C/mg· kg-1
脾脏指数
C/mg· kg-1
正常对照 4.11+0.37 14.81+1.09
荷瘤对照 2.94+0.46 11.74+2.07
环磷酰胺 20 2.81+0.29■ 10.29+1.03■
砂生槐种子
600 3.11+0.43■ 10.97+1.32■水提物低剂量
砂生槐种子
1200 3.21+0.34■ 11.03+1.05■水提物中剂量
砂生槐种子
2400 2.96+0.42■ 10.74+1.26■水提物高剂量
　　与荷瘤对照组比较 , ■P>0.05;n=10
3.3　SMSWE各剂量组对 S180荷瘤小鼠 IL-2分泌量 、NK细胞杀
伤靶活性的影响 结果(见表 3)。 由表 3可见 , 荷瘤小鼠的 NK
细胞杀伤活性与正常对照组比较普遍降低。荷瘤对照组的 NK
细胞杀伤活性和血清 IL-2分泌量与正常对照组比较明显降低 ,
SMSWE2400 mg/kg剂量组 NK细胞杀伤活性显著高于荷瘤小鼠
对照组(P﹤ 0.01)而血清 IL-2分泌量 1200 mg/kg, 2400mg/kg
剂量组明显高于荷瘤对照组。
4　讨论
肿瘤患者常伴有免疫系统机能低下 , 当肿瘤细胞侵入机体
时 , 会对机体造成免疫功能抑制 , 许多中药具有抑制肿瘤生长作
用 [ 5] , 且毒副作用较低 ,显示了较好的抗瘤效果。本实验选取的
砂生槐是我国西藏高原一种特有植物物种 , 以往李玉祥等 [ 2]对
其营养成分进行了分析 ,而对砂生槐药用价值研究得比较少 , 根
据《中国药典》记载砂生槐具有清热利湿作用。而《中国医学百
科全书 ·藏医学》记载 [ 1]:西藏砂生槐种子有消炎解毒等作用。
以往进行的体外实验研究已证实 ,砂生槐种子水提取物对培养的
多种人肿瘤细胞具有杀伤作用 , 马兴铭等 [ 4]研究了其药物对
SGC-7901胃癌细胞株增殖有明显的抑制作用。基于此 ,作者对
砂生槐种子水提物进行了体内抗肿瘤实验 ,结果显示砂生槐种子
水提物具有明显的体内抗肿瘤作用。实验表明 , 在 1 200 mg/kg,
2 400mg/kg剂量组对 S180荷瘤小鼠有明显抑瘤效果 , 抑瘤率可达
34.9%, 41.4%。同时我们的实验结果表明 , 荷瘤小鼠会导致胸
腺缩小 ,胸腺指数和脾脏指数较正常小鼠低 [ 6] , 但与荷瘤对照组
比较无统计学差异。 SMSWE在 2400mg/kg剂量组能使 NK细胞
杀伤靶活性及 IL-2分泌量提高 , 说明 SMSWE可改善荷瘤小鼠
的免疫指标 , 提高机体的抗肿瘤能力 ,并能改善荷瘤小鼠的免疫
失衡状态 [ 7] 。 SMSWE可通过增强机体的细胞免疫和活化免疫
细胞分泌细胞因子参与抗肿瘤作用 ,达到杀灭肿瘤细胞的目的。
表 3　SMSWE对 S180荷瘤小鼠细胞因子
IL-2 、NK细胞杀伤靶活性的影响
组别 剂量C/mg· kg-1
IL-2
C/ng· ml-1 NK(%)
正常对照 4.97±2.21 30.45±2.12
荷瘤对照 3.72±2.26 18.29±2.16
环磷酰胺 20 4.01±2.61﹡ 15.34±1.93﹡
低剂量 600 3.86±2.26 20.12±1.85
中剂量 1200 4.26±2.97﹡ 25.18±2.06﹡
高剂量 2400 4.51±2.56﹡﹡ 28.76±1.73﹡﹡
　　与荷瘤对照组比较﹡﹡ P<0.01, ﹡ P<0.05;n=10
综上所述 ,砂生槐种子水提物对 S180荷瘤小鼠具有明显抗肿
瘤效果 , 且能调节荷瘤小鼠的免疫活性 , 不失为一种较为理想安
全的抗癌药物 ,值得进一步研究。
参考文献:
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