全 文 ：华中农业大学学报 1 0 ( 3) : 3 0 2一 3 06 , 1 99 1
.触的d 01 1石` 血砌 构喊树如祖 肠晚甘南匆
猪感染猪瘟病毒和猪痢疾密螺旋体后 ,
胃肠细胞中荆豆凝集素 I 受体的分布变化 `
王石平 郭定宗
(华中农业大学畜牡兽医 系 , 武汉 4 3 0 0 7 0 )
摘妥 荆豆凝集素 (I uE lA )受体仅存在于健康猪肠吸收细胞胞质中 。 猪瘟病猪除肠吸收细
胞含 U E A , 受体外 ,其胃肠粘膜上皮细胞 、 十二指肠腺细胞和部分杯状细胞胞质中出现大量
UE A
: 受体 。 猪痢疾密螺旋体病猪的部分肠吸收细胞胞质中的 U E A I受体完全消失 ,而极少数胃
粘膜上皮细胞 、 十二指肠腺细胞和杯状细胞胞质中却出现 u EA , 受体 。 另外 ,在病理剖检无明显
组织病变差别的猪瘟病猪和猪痢疾密螺旋体病猪之间 ,其 U E A , 受体分布有差异 。
关 . 词 猪瘟 ;猪痢疾密螺旋体 ;荆豆凝集素 ,岩藻糖 ; 胃肠道
中图法分类号 5 8 5 2 · 3 1
各种凝集素与不同的糖有特异亲和性 l1[ 。 在组织化学技术中 , 凝集素可与组织或细胞
中的糖结合物上的末端糖基发生特异性反应 ,从而可显示糖结合物上糖链的化学组成差
异图 。 大量研究证明 ,病变组织中的糖结合物上的糖链化学组成与正常组织有差异 ,尤其
是组织或细胞的某些糖的异常出现或含量变化与恶性肿瘤的存在有密切关系〔2一 6〕。 荆豆
凝集素 I ( U l e x e u r o aeP u s a邓 l u t in in l , 简称 U E A I )与 a 一 L 一岩藻糖有特殊亲和力 。 在细胞
中 ,岩藻糖是 U E A , 的受体 。 近几年的研究表明 ,不论是消化道 ,还是其他系统的器官 ,其
恶性病变组织中的岩藻糖含量显著增高 〔7一 ` 0] 。 另外 ,在某些非恶性病变 , 如人患轻度萎缩
性胃炎时 ,组织中的岩藻糖含量亦比正常组织高〔习。 为探讨家畜消化道疾患时其组织中的
糖结合物的化学组成是否发生变化 ? 特对健康猪以及猪瘟病毒和猪密螺旋体痢疾感染引
起不同程度消化道疾患的病猪的胃肠组织中的 U E A ; 受体的分布进行了检测 。
l 材料和方法
本实验将 14 头 53 日和 62 日龄健康湖北白猪分成 3 组 。 对照 (健康 )组 4 头猪均为
62 日龄 ;猪瘟组 5 头均为 53 日龄 ;猪密螺旋体痢疾组 5 头均为 62 日龄 。对照组和猪密螺
旋体痢疾组的小猪为同窝仔猪 。 实验前 3 组猪全部适应性地饲喂 3 天 。 对照组小猪屠宰
取材时为 65 日龄 。 猪瘟组 5 头猪 (编号 1一 5 号 )每头肌注猪瘟血毒 0 . 5m l( 病毒总数为
1 06 )
。 人工感染后第 2 天小猪的食欲普遍下降 ,体温上升 ;随即先后开始腹泻 ; 第 5 天 3
本文 1 9 9 1一 0 1一 1 1收到
· 国家自然科学基金资助项目
3期 王石平等 :猪感染猪瘟和猪痢疾密螺旋体后胃肠细胞中 U E l^ 受体的分布变化 3 30
一 5号猪出现全身痉挛症状 。 感染后第 5天将病猪 6( 1 日龄 )宰杀剖检取材 。 5头小猪的组
织器官均呈典型的猪瘟病理变化 ,但病猪之间无明显的病理差别 。病变组织的猪瘟荧光抗
体检查为阳性 。 猪密螺旋体痢疾组小猪 (编号 6一 10 号 ) 的人工感染过程 : 用我系猪血痢
科研组保存的猪痢疾密螺旋体地方株接种胰蛋白陈血液琼脂培养基 ,厌氧培养 。 以其纯培
养物饲喂空腹小猪 。 第 1 次人工感染后第 10 天进行第 2 次人工感染 。 第 2 次感后第 6
天 ,小猪食欲开始减退 ,粪便变软呈灰白色 , 且表面有白色胶冻状粘液 ,有的粪便上附着有
米汤样液体 ,但体温无明显变化 。 第 2 次感染后第 9 天进行粪检 ,所有 5 头小猪的粪便均
呈强阳性反应 。 第 10 天将病猪 (8 5 日龄 )宰杀剖检取材 。 剖检结果 : 5 头小猪的消化道中
仅盲肠和直肠中度充血 ,另外直肠淋 巴结轻度出血 。 病猪之间无明显病理变化差别 。
从所有实验小猪胃肠道 10 个部位 : 胃 (底部和幽门区 ) 、十二指肠 (前 、 中、后三段 ) 、空
肠 、 回肠 、 盲肠 、 结肠和直肠取材 。 组织材料经 B心 u i n 液固定和石蜡包埋后被制成 5 声 m 厚
连续切片 。 本实验采用生物素化 uE A , ( v e ct or aL bor aotr ies
,
uBr iln ga m
e , C滋il f o rhar
, U S A )
,用
生物素化凝集素— BA C 标记方法 l[ `〕显示细胞中的 U E A ; 受体 。实验用 UE A I 的特异性用 L 一岩藻糖 (E 一 Y 加 b o r a t ior es , s妞n M a et 。 , C城il f or in a , u sA )
进行对照实验检测 。 其方法是在对实验组织切片进行 UE A , 孵化的同时 , 将稀释后的
u E A , (与实验切片孵化用的 u E A I 同浓度 )与 L 一岩藻糖 (糖的终浓度为 0 . l m of / )L 在室
温下混合作用 30 分钟 ,然后将混合液滴至与实验切片相邻的连续切片上进行孵化 , 以取
代常规标记过程中的 UE A , 孵化过程 。
在高倍 ( 10 x 4 0) 显微镜下观察各种胃肠细胞胞质与生物素化 U E A , 进行组织化学反
应后的颜色变化以鉴别其反应类型 。其胞质呈棕褐色者为阳性反应细胞 ,而胞质无色或呈
复染染料颜色者为阴性反应细鲍。 对胃肠粘膜上皮细胞 ,主要观察其游离端细胞质 ,对杯
状细胞 ,主要观察其细胞内分泌颗粒聚集区 ;对十二指肠腺细胞则观察整个细胞质 。
2 结果
2
.
1 对照组的 U E A I分布
对照组中 ,所有肠粘膜上皮细胞与 U EA I 呈强 阳性反应 , 而 胃粘膜上皮细胞 、 杯状细
胞和十二脂肠腺细胞均呈阴性反应
2
.
2 猪瘟组的 U E A I分布
猪瘟组细胞的反应类型 (见表 l) 为 : 除 1 号猪的胃底粘膜上皮细胞和部分十二指肠
腺细胞呈 阴性反应外 , 其余 4 头猪所有 胃粘膜上皮细胞和十二指肠腺细胞均呈 U E A , 强
阳性反应 。 另外 ,除 4 号猪外 ,其他 4头某些肠段的部分杯状细胞亦呈阳性反应 。 但出现
的部位无规律 。 杯状细胞阳性反应部位最多的是 5号猪 ,其次是 1号猪 , 3 和 4 号猪仅十
二指肠中段的少数杯状细胞呈阳性反应 。 除此之外 , 1 号猪的结肠粘膜上皮细胞完全呈阴
性反应 ,十二指肠和盲肠的部分粘膜上皮细胞亦呈阴性反应 。
2
.
3 猪痢疾密螺旋体组的 崛 A : 分布
在猪痢疾密螺旋体组中 ,除 7 号猪的所有肠粘膜上皮细胞都与 U’E A ; 呈强阳性反应
外 ,其他 4头猪的某些肠段只有部分肠粘膜上皮细胞呈阳性反应 , 9 号猪的盲肠和结肠粘
膜上皮细胞完全呈阴性反应 ( 见表 2) 。 但这种变化无规律 ,在这 4 头猪中 ,从十二指肠至
3 04 华中农业大学学报 1 0卷
农 l 绪宜脚绪月肠细饱与 uE A , 的反应
胃“ 誉 细 胞 — -编号 底部 幽门 、 前 十二指肠 空肠 回肠 盲肠 结肠 直肠
粘膜上皮细胞
杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞
杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞
杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞
杯状细胞
十二指肠腺细胞
+ 1
中 后
+ i ) + + 十 + l ) 一 +
+ l + 1 ) + 2 + 2
十 1 + J
+衬
2
、
3
+衬++)z+刹+一+一++l)+
·衬+尸+ +
+ + +
+
` ,表示约 50 写的细胞呈 阳性反应 ; + 2 ,表示 约 25 %的细胞呈阳性反应 ; + 3 ,表示极少数的细胞呈 阳性反
应 ; 十表示约 75 %的细胞呈阳性反应 (下表同 )
衰 2 猪痢疾密螺旋体病猪目肠细胞与 u E A I的反应
病猪
编号
十二指肠
空肠 回肠 盲肠 结肠 直肠
底部 幽门 前 中 后
+一+一十+J十一+一粘膜上皮细胞 一
6 杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞 一
7 杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞 一
8 杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞 一
9 杯状细胞
十二指肠腺细胞
粘膜上皮细胞 +
10 杯状细胞
十二指肠腺细胞
十 1 ) + l + 1
+书
+
l
+
1
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1
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3
+
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+
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+
2
3期 王石平等: 猪感染猪瘟和猪痢疾密螺旋体后胃肠细胞中 U E AI受体的分布变化 30 5
直肠 的各个部位中均 出现了部分细胞呈 U E A, 阴性反应 . 除此之外 , 6 号和 10 号猪的部
分胃粘膜上皮细胞呈阳性反应 ; 10 号猪的部分十二指肠腺细胞呈阳性反应 ; 6 、 7 和 、 10 号
猪的极少数杯状细胞亦呈阳性反应 。
3 讨论
在本实验中 ,猪瘟猪和猪痢疾密螺旋体猪的胃肠细胞中的 u E A , 受体分布不同程度
地有别于健康猪 ,表明因为动物感染 ,猪瘟病毒和猪痢疾密螺旋体 ,使部分胃肠细胞中的
组织化学成分发生了变化 。
呈典型猪瘟病变的胃肠组织细胞中的 UE A , 受体明显增多 。 与健康猪 (对照组 ) 比较
最显著的区别是猪瘟病猪十二指肠腺细胞和 胃粘膜上皮细胞的胞质中含大量 UE A I 受
体 ,仅部分杯状细胞中出现了 U E A , 受体 。 肠粘膜上皮细胞中的 UE A , 受体分布无明显区
别 。 虽然 1号猪的结肠粘膜上皮细胞中无 U E A , 受体 ,但还不能说明这些变化是猪瘟病毒
所致 。 从病理剖检看 , 5 头猪瘟病猪的器官组织之间肉眼观察无显著的病理变化差异 。 但
5 头猪胃肠细胞中主要是杯状细胞中 U E IA 受体的分布不同 。而这一差别与病猪所赤现出
的全身痉挛无联系 。
猪痢疾螺旋体病猪变化最明显的是肠粘膜上皮细胞中部分细胞 u E A , 受体完全消
失 。 相反 ,极少数胃粘膜上皮细胞 、 十二指肠腺细胞和杯状细胞中却出现了 U E A , 受体 。 肉
眼观察本组病理变化无明显差异的猪 ,其胃肠细胞中的 UE A , 受体分布却不同 。
U E A , 特异性检测的结果表明 ,所有胃肠细胞胞质中与 LJ’E A , 反应的受体都是 L 一岩
藻糖、 肠粘膜上皮细胞即吸收细胞胞质中的 UE A ; 受体以何种形式存在尚不清楚 。 而
uE
A , 受体出现于胃粘膜上皮细胞和杯状细胞的游离端细胞质 (粘原颗粒聚集部 )中 , 以及
十二指肠腺细胞胞质中 。根据这类受体在这些细胞中的存在部位和这些细胞的功能 ,以及
凝集素只能与细胞中糖链末端糖基发生反应的特性 , 可以推测 , UE A , 受体是这些细胞中
贮存的粘蛋白糖连上的末端糖基 。 u E A , 受体的出现 、增多 、减少或消失 ,实际上是细胞内
糖类或糖结合物上多糖成分的改变 。 在猪瘟病猪的胃肠细胞中 , 可能有许多新合成的 L 一
岩藻糖连接到糖类或糖结合物的糖链末端 ,从而 U E A ; 受体增多 ;而在猪密螺旋体痢疾病
猪的肠吸收细胞中 ,可能是由于其他糖基连接到糖链末端 , 使正常细胞中糖链末端的 L 一
岩藻糖处于次末端位置 ,从而 U’E A : 受体减少或消失 。
致谢 金梅林和 罗满林同志帮助培养猪痢疾密螺旋体 ,特此致谢 。
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