全 文 ：China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 43 中国药房 2013年第24卷第43期
饿蚂蝗为豆科山蚂蝗植物，具有活血止痛、解毒消肿、清
热解毒、消食的功效，民间常用其治疗胃痛、小儿疳积、腮腺
炎、淋巴结炎、毒蛇咬伤、脘腹疼痛、妇女干血痨、腰扭伤、创
伤、尿道炎等症 [1]。贵州省饿蚂蝗（Desmodium sambuense）植
物资源丰富，是民间广泛应用的药用植物，但有关其化学成分
及药理活性的研究报道较少。本课题组前期研究发现，饿蚂
蝗的醇提物及其各部位具有良好的抗氧化作用和保肝活性[2]，
并通过化学成分研究推测其有效成分为黄酮和酚类化合物；
笔者认为饿蚂蝗抗氧化活性的强弱与其中黄酮和多酚的含量
有关，因此优化了以Folin-Ciocateau法测定其中多酚含量的试
验条件，并对饿蚂蝗 75％乙醇提取物及其各部位多酚的含量
进行了测定。
1 材料
1.1 仪器
TU-1901型紫外分光光度计（北京谱析通用仪器有限责任
公司）；TP-114型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限
公司）；SB-5200D型超声波清洗器[宁波新芝生物科技股份有
限公司，功率：200W，频率：（40±1）kHz]。
1.2 试剂
没食子酸对照品（贵州迪大科翔生物有限公司，批号：
149917，纯度≥98％）；钨酸钠（Na2WO4· 2H2O）、钼酸钠
（Na2MoO4· 2H2O）、硫酸锂（Li2SO4）、磷酸（≥85％）、碳酸钠
（Na2CO3）、浓盐酸、溴水等试剂均为分析纯，水为蒸馏水；
HPD-100型大孔树脂（河北沧州宝恩化工有限公司）。
1.3 药材
饿蚂蝗于 2012年采自贵阳市，经贵阳中医学院陈德媛教
授鉴定为豆草科山蚂蝗属（Desmodium）植物饿蚂蝗 D.
sambuense DC的全草。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
将饿蚂蝗粉碎后用75％乙醇浸提，滤过，滤液浓缩后得浸
Δ 基金项目：教育部“春晖计划”立项资助合作科研项目（No.
Z2011036）；贵阳市科技计划项目（No.筑科合同〔2012204〕号）
＊硕士研究生。研究方向：天然有机化学。电话：0851-3620746。
E-mail：244374058@qq.com
# 通信作者：教授。研究方向：天然产物化学。E-mail：qianjun-
zhang@126.com
饿蚂蝗中多酚的含量测定Δ
袁见萍 1＊，张 龙 1，张前军 1，2 #，康文艺 3，周清娣 4（1.贵州大学精细化工研究开发中心，贵阳 550025；2.贵州大
学化学与化工学院，贵阳 550025；3.河南大学中药研究所，河南开封 475004；4.澳大利亚悉尼大学化学学
院，悉尼 1797）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2013）43-4078-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2013.43.16
摘 要 目的：建立测定饿蚂蝗中多酚含量的方法。方法：以没食子酸为对照品，采用优化后的Folin-Ciocateau比色法（考察了测
定波长、碳酸钠溶液体积、Folin-Ciocateau显色剂加入量、反应温度及时间等）测定饿蚂蝗不同提取物中多酚的含量。结果：没食子
酸的质量浓度在 0.001 0～0.006 1 mg/ml范围内与其吸光度呈良好的线性关系（r＝0.999 4）；平均加样回收率为 99.99％，RSD＝
0.59％（n＝6）。饿蚂蝗75％乙醇提取物中多酚的质量分数最高，为9.83％；其次为40％乙醇提取物，多酚质量分数为8.55％；80％
乙醇提取物中多酚的质量分数最低，为0.32％。结论：采用优化后的Folin-Ciocateau比色法测定饿蚂蝗中多酚的含量，精密度和灵
敏度高、稳定性和重复性好、操作简单。
关键词 饿蚂蝗；多酚；Folin-Ciocateau比色法；含量测定
Content Determination of Polyphenols in Desmodium sambuense
YUAN Jian-ping1，ZHANG Long1，ZHANG Qian-jun1，2，KANG Wen-yi3，ZHOU Qing-di4（1.Fine Chemical R&D
Center，Guizhou University，Guiyang 550025，China；2. College of Chemistry and Engineering，Guizhou Uni-
versity，Guiyang 550025，China；3. Institute for TCM Research，Henan University，Henan Kaifeng 475004，
China；4. College of Chemistry，Sydney University，Sydney 1797，Australia）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of polyphenols in Desmodium sambuse. METH-
ODS：Using gallic acid as control，the content of polyphenols in different extracts of D. sambuense was determined by Folin-Cioca-
teau colorimetry. The absorption wavelength，the volume of sodium carbonate，the amount of Folin-Ciocalteu regent，reaction tem-
perature and time were explored. RESULTS：The linear range of gallic acid were 0.001 0-0.006 1 mg/ml（r＝0.999 4）with an aver-
age recovery of 99.99％（RSD＝0.59％，n＝6）. The mass fraction of polyphenols in 75％ ethanol extracts of D. sambuense was the
highest，being 9.83％；followed by 40％ ethanol extracts，being 8.55％；that of polyphenols in 80％ ethanol extract was the lowest
（0.32％）.CONCLUSIONS：Optimized Folin-Ciocateau colorimetry is adopted to determine the content of polyphenols in D. sam-
buense，whichi is simple，stable and repeatbale with high precision and sensitivity.
KEY WORDS Desmodium sambuense；Polyphenols；Folin-Ciocateau colorimetry；Content determination
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中国药房 2013年第24卷第43期 China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 43
膏，浸膏用水分散，上大孔树脂，分别用水与20％、40％、60％、
75％、80％、100％乙醇过柱分段，减压浓缩各部位，称取浸膏
及各部位适量，以水溶解并定容至25 ml量瓶中，滤过，即得[3]。
2.2 福林酚试剂（FC试剂）的制备
称取钨酸钠 25 g、钼酸钠 6.25 g，加水 175 ml、85％磷酸
12.5 ml、浓盐酸25 ml，置磨口圆底烧瓶中，缓缓加热回流10 h，
放冷，再加硫酸锂 37.5 g、水 12.5 ml和溴水适量，加热煮沸 15
min，得金黄色溶液，冷却，加水稀释至 250 ml，滤过并转移至
量瓶中，即得。临用前加水1倍，摇匀[4]。
2.3 对照品贮备液的制备
精密称取没食子酸对照品 0.050 5 g，用 60％乙醇溶解并
转移至 100 ml量瓶中，以 60％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得质
量浓度为0.505 0 mg/ml的对照品贮备液[5]。
2.4 标准曲线的制备[6]
分别精密吸取对照品贮备液 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6
ml，置于 50 ml量瓶中，补加水 10 ml，再分别加入 FC试剂 1.5
ml和 10％碳酸钠溶液 7.5 ml，以水定容，摇匀，室温下显色 40
min，以第一瓶为空白试剂，在 765 nm波长处分别测定吸光
度。以对照品质量浓度（x）为横坐标，吸光度（y）为纵坐标，绘
制标准曲线，得线性回归方程为 y＝7.215 9E－3x（r＝0.999 4，
n＝6）。结果表明，没食子酸的质量浓度在 0.001 0～0.006 1
mg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.5 测定条件的确定[7-11]
2.5.1 测定波长的确定 精密吸取对照品贮备液0.1 ml，置于
50 ml量瓶中，补加水 10 ml，再分别加入 1.5 ml FC试剂和 7.5
ml 10％碳酸钠溶液，以水定容，置 55℃恒温水浴锅中显色 40
min，以相应试剂为空白，在 200～900 nm波长范围内进行扫
描，重复 3次。结果，该溶液在 765 nm波长处有最大吸收峰，
故确定765 nm为测定波长。
2.5.2 显色温度的确定 精密吸取没食子酸对照品贮备液
0.2 ml，共6份，分别置于50 ml量瓶中，每份补加水10 ml，再分
别加入FC试剂1.5 ml和10％碳酸钠溶液7.5 ml，以水定容，摇
匀，在不同温度下显色 40 min，以相应试剂为空白，在 765 nm
波长处测定吸光度，选择吸光度最大时的温度为最适显色温
度。显色温度对多酚含量测定的影响见图1。
由图 1可知，吸光度随着温度的增加而减小。其中，室温
（15℃左右）下吸光度最大，故选择室温条件下测定多酚含量。
2.5.3 FC试剂体积的确定 精密吸取没食子酸对照品贮备液
0.2 ml，共5份，分别置于50 ml量瓶中，每份补加水10 ml，再分
别加入不同体积的FC试剂和7.5 ml 10％碳酸钠溶液，以水定
容，摇匀，在室温下显色40 min，以相应试剂为空白，在765 nm
波长处测定吸光度，选择吸光度最大时的FC体积为最适试剂
体积。 FC试剂体积对多酚含量测定的影响见图2。
由图2可知，随着FC试剂体积的增加，吸光度几乎呈直线
上升，但当FC试剂体积为2.5 ml时，吸光度达到最大值，再增
加FC试剂体积时，吸光度减小，并趋于稳定，故认为FC试剂体
积为2.5 ml时最适宜。
2.5.4 10％碳酸钠溶液体积的确定 精密吸取没食子酸对照品
贮备液0.2 ml，共 5份，分别置于50 ml量瓶中，每份补加水10 ml，
再分别加入2.5 ml FC试剂和不同体积的10％碳酸钠溶液，以水
定容，摇匀，在室温下显色40 min，以相应试剂为空白，在765 nm
波长处测定吸光度，选择吸光度最大时的体积为最适体积。
碳酸钠溶液是 Folin-Ciocateau法测定多酚反应中的缓冲
液，它能为显色剂与酚类反应提供碱性环境，使多酚与显色剂
反应后在碱性环境下显蓝色。不同10％碳酸钠溶液体积对多
酚含量测定的影响见图3。
由图 3可知，随着碳酸钠溶液体积的增加，吸光度逐渐增
大，当碳酸钠溶液体积为12 ml时，吸光度达到最大值，此时再
增加碳酸钠溶液体积，吸光度开始变小，故选择 12 ml为缓冲
溶液10％碳酸钠溶液的最适体积。
2.5.5 显色时间的确定 精密吸取没食子酸对照品贮备液
0.2 ml，置于50 ml量瓶中，补加水10 ml，再分别加入2.5 ml FC
试剂和12 ml 10％碳酸钠溶液，以水定容，摇匀，在室温下显色
不同时间，以相应试剂为空白，分别在765 nm波长处测定吸光
度。显色时间对多酚含量测定的影响见图4。
由图4可知，当显色时间为80 min时，吸光度最大，以后随
着时间的延长，吸光度减小，故选择最佳显色时间为80 min。
2.6 精密度试验[12]
精密吸取0.2 ml对照品贮备液，共6份，分别置于50 ml量
瓶中，每份补加水 10 ml，再分别加入FC试剂 2.5 ml和 10％碳
酸钠溶液12 ml，以水定容，摇匀，室温下显色80 min，以相应试
剂为空白，在765 nm波长处测定吸光度。结果显示，6份溶液
的吸光度分别为 0.336 3、0.336 3、0.337 1、0.336 6、0.337 6、
0.30
0.28
0.26
0.24
0.22
0.20
0.1810 20 30 40 50 60 70
温度，℃
吸光
度
图1 显色温度对多酚含量测定的影响
Fig 1 Effect of reaction temperature on the content of
polyphenols
0.30
0.29
0.28
0.27
0.26
0.25
0.24
0.23
0.220 2 4
FC试剂体积，ml
吸光
度
图2 FC试剂体积对多酚含量测定的影响
Fig 2 Effect of the amount of FC reagent on the content of
polyphenols
0.32
0.30
0.28
0.26
0.24
0.22
0.20
0.18
吸光
度
2 4 6 8 10 12 14
10％碳酸钠溶液体积，ml
图3 10％碳酸钠溶液体积对多酚含量测定的影响
Fig 3 Effect of the amount of 10％ sodium carbonate on the
content of polyphenols
·· 4079
China Pharmacy 2013 Vol. 24 No. 43 中国药房 2013年第24卷第43期
0.335 6，RSD＝0.21％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性试验[13]
称取饿蚂蝗75％乙醇提取物的浸膏22.1 mg，以水溶解并
转移至25 ml量瓶中，精密吸取1 ml，共6份，分别置于50 ml量
瓶中，其中3份加入对照品贮备液0.1 ml，另3份加入对照品贮
备液 0.2 ml，补加水 10 ml，分别加入 FC试剂 2.5 ml和 10％碳
酸钠溶液12 ml，以水定容，摇匀，室温下显色80 min，以相应试
剂为空白，在 765 nm波长处于 0、10、20、30、40 min测定吸光
度。结果显示，RSD＝1.23％（n＝5），表明供试品溶液在制备
显色80 min后的40 min内稳定。
2.8 重复性试验
精密吸取“2.7”项下制备的供试品溶液适量，共6份，依法
显色后测定吸光度，计算样品含量。结果显示，饿蚂蝗75％乙
醇提取物中多酚的平均质量分数为9.80％，RSD＝1.37％（n＝
6），表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验[13]
精密吸取“2.7”项下制备的供试品溶液适量，共 9份，每 3
份为一组，分别精密加入低、中、高剂量的没食子酸对照品溶
液，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，再按上述方法测定吸光
度，计算加样回收率，结果见表1。
表1 加样回收率试验结果（n＝9）
Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品含量，mg
0.087 7
0.086 5
0.086 8
0.086 9
0.086 9
0.086 9
0.086 9
0.086 9
0.086 4
加入量，mg
0.050 5
0.050 5
0.050 5
0.086 9
0.086 9
0.086 9
0.101 0
0.101 0
0.101 0
测得量，mg
0.138 7
0.136 8
0.137 3
0.172 1
0.173 1
0.175 0
0.188 0
0.185 8
0.186 9
回收率，％
100.95
99.56
99.92
98.04
99.19
101.38
100.05
97.92
99.46
x，％
99.61
RSD，％
1.16
2.10 样品中多酚含量的测定
以优化后的试验条件测定饿蚂蝗75％乙醇提取物及其各
部位浸膏中多酚的含量。分别称取饿蚂蝗75％乙醇提取物及
其各部位浸膏适量，用水溶解并定容至25 ml，得各浸膏的水溶
液。分别吸取各浸膏水溶液适量，置于 50 ml量瓶中，补加 10
ml水，再加入2.5 ml FC试剂和12 ml 10％碳酸钠溶液，以水定
容至 50 ml，在室温下显色 80 min，于 765 nm波长处测定吸光
度，计算各样品中多酚的含量，结果见表2。
由表2可知，饿蚂蝗不同体积分数的乙醇浸膏中多酚的质
量分数差异明显，其中以 75％乙醇浸膏中多酚的质量分数最
高，为 9.83％；40％乙醇浸膏中多酚的质量分数其次，为
8.55％；80％乙醇浸膏中多酚的质量分数最低，只有0.32％。
3 讨论
多酚是一大类物质，每种植物中所含多酚的种类和含量
不同，所以不同植物中多酚的提取方法和测定方法各异[14-15]。
本试验以没食子酸为对照品，采用Folin-Ciocateau法测定饿蚂
蝗中多酚的含量，并对测定条件进行了改进，使该法具有精密
度、灵敏度高，操作简单，稳定性和重复性好等优点，这也表明
Folin-Ciocateau法适于饿蚂蝗中多酚含量的测定。
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（收稿日期：2012-10-24 修回日期：2013-03-07）
0.34
0.32
0.30
0.28
0.26
0.24
0.22
0.20
0.18
0.16
吸光
度
20 40 60 80 100 120 140
显色时间，min
图4 显色时间对多酚含量测定的影响
Fig 4 Effect of reaction time on the content of polyphenols
表2 不同样品中多酚含量的测定结果
Tab 2 Results of content determination of the samples in
different extract solutions
样品
水
20％乙醇
40％乙醇
60％乙醇
75％乙醇
80％乙醇
100％乙醇
浸膏称样量，mg
27.7
13.8
21.4
21.4
22.1
58.8
82.1
多酚测得量，mg
0.594 1
0.781 1
1.829 7
0.875 8
2.170 0
0.188 2
0.327 6
多酚质量分数，％
2.14
5.66
8.55
4.09
9.83
0.32
0.40
·· 4080