全 文 ：基金项目 湖北省教育厅重点资助课题(2004D004)。
作者简介 谷树珍(1983 - ),女 , 河南洛阳人 ,湖北民族学院医学院 2002级临床医学专业学生。
鬼箭羽醇提物的抑菌 、抗炎作用研究
谷树珍
湖北民族学院医学院(湖北 恩施 445000)
【摘要】目的 观察鬼箭羽醇提物的抑菌 、抗炎作用。方法 以金黄色葡萄球菌 、大肠埃希杆菌和铜绿假单胞杆菌
为供试菌株 , 采用药敏纸片法观察鬼箭羽醇提物的抑菌 、抗炎作用;对氯化钅苦 (PC)诱发的小鼠迟发型变态反应
(DTH)模型 ,用鬼箭羽醇提物及总黄烷于抗原攻击后给药 ,观察其对 DTH效应。结果 鬼箭羽醇提取物能抑制金
黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌 , 且对后者的作用优于前者 , 而对铜绿假单胞杆菌无抑菌作用;其抗炎作用主要是抑
制 DTH ,且对晚期效应强于早期效应。结论 鬼箭羽醇提物具有一定的抑菌 、抗炎作用 , 其总黄烷成分是抑制 DTH
的有效成分。
【关键词】鬼箭羽醇提物;抑菌;抗炎;研究
【中图分类号】285. 5 【文献标识码】A 【文章编号】1008 - 8164(2006)01 -0017 - 03
An Expermi enta lResearch on Bacter ia - inhibiting and Anti- Inflammation
E ffects of Ethanolic Extract from EuonymusA latus
GU Shu - zhen
(Medical college ofHubei Institute for Nationa lities, Ensh i445000 , Ch ina)
【Abstract】Objec tive To study the effects of ethano lic extract from euonymus alatus in bacteria
- inh ib iting and anti- in flammat ion. M ethods The antib iotic activ ities o f the active componet of
S taphylococcus aureus, Escherich iu co li and Pseudomonas aerug inosawere pre lmi inarily tested
by Neo -Sens itab d isk - d iffusion method. In mouse ofDTH models upon challenge w ith PC,
obserseved he effects of EAL on the early and late phases by adm in istration a fter ant igen cha l-
lenge. Results It was show n that EAL exerted bacteriostatic act ion on Staphy lococcus aureus
and Escherich iu co l.i M oreover, its effects on the laterwere superab le to the former. While it
had no effects on Pseudomonas aerug inosa. The anti- in flammat ion effect of EAL is that it can
restrain DTH , and the effectsw ere stronger on the late phase than early. Conclusion EAL have
certa in effects on bacteria - inh ib iting and anti- in flammation. Its flavan id is the active compo-
nent to restra in DTH.
【Keywords】Euonymus a latus(EAL);bacteria - inh ib iting;anti- in flammat ion;research
鬼箭羽是卫茅科植物卫矛 Euonymus a latus
(Thunb) Sieb带翅的枝或翅状物 ,又叫四棱麻 、四方
紫 、神箭 、鬼篦子 。味苦 ,性寒 ,有活血 、化瘀 、杀虫之
功效 ,中药常用其降血糖 ,主要成分为豆甾 - 4 -烯
- 3酮 、豆甾 - 4 -烯 - 3, 6二酮 、β -谷甾醇和 6β
羟基豆甾 - 4 -烯 -3酮 4种甾体成分 ,以及双氢黄
酮醇(香橙素)、α儿茶素和去氢双儿茶素 A3种黄
烷成分[ 1]我国民间常用其治疗生漆过敏性皮炎 。
目前 ,其抗过敏作用已有研究报道[ 2] 。为验证其抑
菌和抗炎作用 ,我们对其做了如下的实验研究。
1 材料与方法
1. 1 实验材料
(1)药品与试剂:鬼箭羽 (恩施自治州 仁德医
第 23卷第 1期(第 17页)
2006年 湖北民族学院学报 医学版Journa l o f Hube i Institu te for Nationalities M ed ica l Edition Vo .l 23 No. 1 P. 172006
药有限公司 ,产地:湖北 ,批号 040529);赛庚啶 (江
苏第四制药厂 ,批号:010804);醋酸泼尼松 (江苏淮
阴制药厂 ,批号:011132);氯化钅苦 (PC ,日本东京化
成工业株式会社 )。
(2)动物:ICR小鼠 , 20 ～ 25 g, 2 ～ 3月龄 , ♂♀
各半 ,由湖北省实验动物中心提供。
(3)菌种:金黄色葡萄球菌 ATCC25923,大肠埃
希杆菌 ATCC25922,铜绿假单胞杆菌 ATCC27853。
(4)培养基:采用肉汤培养基和 MH琼脂培养
基 ,于 112℃灭菌 15m in。
(5)仪器与设备:电子天平 (北京赛多利斯仪器
系统有限公司 ,型号 BS224S);KDM 型控温电热套
(山东鄄城华鲁仪器公司 );电热鼓风干燥箱 (重庆
永恒实验仪器厂 ,型号 CS101 - 2E);台式离心机
(上海安亭科学仪器厂 ,型号 TDL - 5);真空灭菌器
(型号 DMB1. 2);生化培养箱 (广东省医疗器械厂 ,
型号 LDH -250A);电热恒温培养箱 (上海市跃进医
疗器械一厂 ,型号 HH. B11. 500)。
1. 2 方法
(1)抑菌实验待测药液的制备:称取鬼箭羽 100
g, 70%乙醇回流提取 5 h,过滤 ,滤液回收乙醇后浓
缩至 100m l,于台式离心机内 4800 r /m in离心 8m in ,
除去沉淀 ,上清液定容至 50m l备用 。将待测药液
依次稀释浓度为 0. 50、 0. 67、 0. 83、 1. 00、 1.17、
1.33、1. 50、1. 67、1. 83、2. 00 g /m l,试管棉塞塞好 , 15
磅高压灭菌 20m in[ 3] 。
(2)抗炎实验药品制备:称取鬼箭羽 100 g,经
10倍量 70%乙醇回流提取两次 ,过滤 ,滤液浓缩蒸
干 ,研末 ,回收率为 14.3%。再用乙酸乙酯提取 ,得
总黄烷成分 ,回收率为 4.65%。
(3)供试菌株和含菌平板的制备:无菌操作条
件下 ,将供试菌种移接入相对应的试管斜面培养基
上 ,于 35 ～ 37℃恒温箱内培养 44 ～ 48 h,然后置于 0
～ 4℃下冷藏备用。分别用接种环挑取少许菌体置
于装有 9m l无菌生理盐水的试管内 ,振荡摇匀 ,制
成菌悬液。调整菌悬液浓度 ,使其含孢子或菌体量
为 103 ～ 105个 /m l,分别用无菌移液管向相应的固
体平板上加 0.1m l菌悬液 ,并用无菌三角刮铲涂布
均匀 。
(4)抑菌圈直径的测定:采用滤纸圆片法 ,用打
孔器将新华 1号定性滤纸打成 6mm的小圆片 ,分装
于洁净干燥的试管内 , 120℃干热灭菌 2 h后备用 。
无菌操作下将 100片灭菌滤纸片浸于 1m l各浓度的
鬼箭羽溶液中 ,置于冰箱内浸泡 1 h,然后置于 37℃
电热恒温培养箱内经 2 ～ 3 h干燥 。将干燥好的滤
纸片无菌操作贴在制备好的含菌平板上 ,以相同浓
度的滤纸片 3片作为 1片 ,每皿均匀分贴不同药液
滤纸片 10片 ,重复 3次;贴好滤纸片的培养基置于
恒温培养箱中培养 18 ～ 24 h后 ,取出观察 ,按文献
方法 [ 3]测定抑菌圈直径。
(5)最低抑菌浓度 (M IC)的测定:用接种环沾
取供试菌种 , 将其移种至肉汤培养基内。将提取物
配成浓度为 1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、
5. 0 g /m l的溶液 ,分别取各浓度的溶液 200μl,肉汤
培养基 200μl,得到含不同浓度提取物的系列培养
基。摇匀后置于 37℃恒温培养箱中培养 18 ～ 24 h,
观察实验结果 ,以能抑制细菌生长的最低添加量为
该提取物的 M IC。
(6)最低杀菌浓度 (MBC)的测定:将提取物的
浓度高于最低抑菌浓度的各管内继续培养 24 h,观
察菌体生长情况。以仍无菌落生长的添加量为该提
取物的 MBC。
2 结果
2. 1 鬼箭羽醇提物的抑菌作用 通过对标准菌株
抑菌圈直径的测定 ,结果发现鬼箭羽提取液对金黄
色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用 ,浓度
1. 5 ～ 4. 0 g /m l对大肠杆菌的作用明显优于金黄色
葡萄球菌 (P <0.01或 P <0.05),超过 5.0 g /m l时
其对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌抑菌作用相当
(P >0. 05), 对前者 M IC为 1.0 g /m l,后者 M IC为
5.0 g /m l,而对铜绿假单胞杆菌无效 。结果见表 1、
图 1、2、3。
表 1 鬼箭羽提取物对 3种供试菌种的抑菌圈直径(x ±s, n =9 , mm)
供试菌种 药物浓度(g /m l)
1. 5 2. 0 2. 5 3. 0 3. 5 4. 0 4. 5 5. 0 5. 5 6. 0
金黄色葡萄球菌 16±0. 23 14±0. 27 17±0. 31 18±0. 19 20±0. 29 19±0. 17 21±0. 34 21±0. 47 21±0. 31 23±0. 42
大肠杆菌 19±0. 32**18±0. 19**20±0. 26**23±0. 23**22±0. 33* 21±0. 42* 22±0. 41 22±0. 38 23±0. 36 23±0. 38
铜绿假单胞杆菌 - - - - - - - - - -
与金黄色葡萄球菌比较 , **P <00. 01, *P <00. 05, “ -”表示无抑菌圈
2. 2 鬼箭羽醇提物对 PC致小鼠接触性皮炎的影 响 按文献方法[ 4, 5] ,取雄性 ICR小鼠 ,随机分为实
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湖北民族学院学报 医学版 第 1期
验组 、阳性对照组和空白对照组 ,每组 10只 ,腹部刮
毛 24 h后 ,用体积分数 0.05PC无水乙醇液 150μl
涂于腹部 , 4 d后用 0.01PC液橄榄油液 20μL涂于
小鼠右耳廊两侧攻击 ,分别于其后 2 h和 24 h测量
两耳廊厚度差。试验组小鼠于 PC攻击同时及其后
16 h 2次灌胃 (ig)鬼箭羽醇提取物或总黄烷等容量 ,
分别含 50mg、100mg、200mg、500mg,阳性对照组 ig
泼尼松或赛庚啶 ,空白对照组 ig等容量生理盐水 。
结果见表 2。
由表 2可见 ,赛庚啶 20mg /kg明显抑制早期相
(2 h),而对后期相无抑制作用 ,泼尼松 50mg /kg对
早期相作用不明显;鬼箭羽醇提取物 100、200、500
mg /kg,黄烷 100、200mg /kg及泼尼松 50mg /kg可以
明显抑制后期相反应 (24 h)。表明鬼箭羽醇提取
物 、总黄烷及泼尼松对后期相抑制作用强于早期相 ,
而赛庚啶抑制作用早期相强于后期相 。
表 2 对 PC小鼠接触性皮炎的影响 (x±s, n=10)
组 别 剂量(mg /kg)
耳廊肿胀度(×10- 2mm)
2 h 24 h
空白对照组 - 4. 7±0. 9 8. 6±2. 5
鬼箭羽醇提取物 100 6. 8±1. 9 6. 0±1. 6**
200 6. 3±1. 0 5. 6±1. 3**
500 5. 4±1. 2 5. 2±1. 1**
泼尼松 50 5. 1±2. 5 4. 9±2. 6**
阳性对照组 - 2. 1±1. 4 7. 0±1. 8
鬼箭羽总黄烷成分 50 2. 0±1. 2 5. 1±1. 1*
100 1. 8±1. 3 4. 0±1. 9**
200 1. 6±1. 5 3. 1±1. 9**
赛庚啶 20 0. 9±1. 3* 6. 1±2. 1
与对照组比较 , *P <0. 05, **P <0. 01
3 讨论
本实验结果表明鬼箭羽醇提物能明显抑制金黄
色葡萄球菌和大肠杆菌 ,且对大肠杆菌的作用明显
优于金黄色葡萄球菌 (P <0. 01或 P <0. 05),而对
铜绿假单胞杆菌无效 。其抑菌成分是豆甾 - 4 -烯
- 3酮 、豆甾 - 4 -烯 - 3, 6酮以及双氢黄酮醇 (香
橙素 )三种成分 [ 6] 。作用机理可能是高浓度的这些
成分抑制了细菌的 RNA、蛋白质或脂质的生物合成
以及糖的酵解 ,也可能是与菌体内 DNA形成复合
物 ,从而影响 DNA的复制 ,干扰细菌繁殖有关 。
DTH的早期反应主要发生于抗原攻击后 0 ～ 4P
化具有相应抗原受体的 CD4 +Th1和 CD8 +CTL细
胞[ 6] 。而后期反应由 CD4 +Th1细胞再次与抗原提
呈细胞表面抗原作用后释放的 IFN -γ、TNF - β、 IL
-2、 IL - 3、GM -CSF淋巴因子所介导而产生以单
核细胞及淋巴细胞浸润为主的免疫损伤效应 ,以及
CD8
+
CTL细胞介导的细胞毒作用 ,而导致靶细胞凋
亡[ 6] 。
鬼箭羽醇提物和总黄烷能明显抑制 PC诱导的
小鼠耳廓迟发型接触性皮炎 ,其抑制 PC - DTH 后
期反应强于早期反应 ,而 5 -HT受体阻断药赛庚啶
主要明显抑制早期反应 ,对后期反应不明显。说明
鬼箭羽黄烷成分是抑制 DTH 的有效成分 。它可以
促进炎症细胞凋亡 ,抑制炎症细胞因子和粘附分子
的表达 ,从而发挥抗炎作用。
鬼箭羽醇提取物具有明显的抑菌和抗炎作用 ,
这对民间用其治疗生漆过敏性皮炎的机制是一佐
证。对其抑菌作用机制 、有效成分及其成分分离有
待进一步研究 。
致谢:本文实验设计与论文撰写承蒙黄德斌 、肖
本见 、文德鉴老师的悉心指导
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[收稿日期 2005 - 10 - 12]
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第 1期 湖北民族学院学报 医学版