全 文 ：葛根与粉葛饮片的色谱指纹图谱研究
王金华1，姚仲青2
(1．南京市高淳县中医院药剂科，南京 211300;2．扬子江药业集团有限公司中药研究院，江苏泰州 225321)
摘 要 目的 建立葛根与粉葛质量比较的色谱方法，并用于二者的质量分析与评价，为其质量控制提供新依据，
为其药效物质基础的分析奠定基础。方法 采用薄层色谱( TLC) 法对 7 个葛根样品和 17 个粉葛样品进行比较，并采用
高效液相色谱( HPLC) 法进行指纹图谱测定，运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统( 2004A) 软件进行分析。采用对照
品对比和 HPLC-MS技术对其部分色谱峰进行定性鉴别。结果 建立的 TLC 和 HPLC 指纹图谱能区别葛根和粉葛。
HPLC指纹图谱粉葛饮片共有峰 14 个，野葛根饮片共有峰 19 个，初步指认了葛根与粉葛 HPLC指纹图谱中 13 和 7 个成
分。结论 该文为葛根与粉葛质量控制和临床应用提供可靠依据。
关键词 葛根;粉葛;色谱指纹图谱
中图分类号 R282． 71 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781( 2013) 04 － 0525 － 05
Studies on Chromatographic Fingerprints of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii
WANG Jin-hua1，YAO Zhong-qing2 ( 1． The Nanjing Gaochun County Hospital of TCM，Nanjing 211300，
China; 2． Yangtze River Pharmaceutical Group，Taizhou 225321，China)
ABSTRACT Objective To establish chromatographic fingerprints for the identification and quality evaluation of Pueraria
lobata and Pueraria thomsonii． Methods Seventeen samples of Pueraria thomsonii and 7 samples of Pueraria lobata were
analyzed with the thin-layer chromatography ( TLC ) and the developed high performance liquid chromatography ( HPLC )
fingerprint method． The HPLC data was calculated with similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM
( Version 2004A) ． Results A satisfactory fingerprint was obtained by HPLC method，and qualitative analyses of some of the
peaks were carried out by HPLC /MS approach． Conclusion The present research provides useful evidence for the quality
control of evaluation of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii．
KEY WORDS Pueraria lobata; Pueraria thomsonii; Fingerprint
葛根始载于《神农本草经》，药用历史悠久，列为
中品。具解肌退热、生津、透疹、升阳止泻的功效，临床
多用于外感发热头痛、项背强痛、消渴、麻疹不透、热
痢、泄泻、高血压等症［1］。葛根是豆科植物野葛
Pueraria lobata (Willd．)Ohwi． 的根，粉葛是甘葛藤
Pueraria thomsonii Benth．的根，两者在 2000 年版《中华
人民共和国药典》均为葛根来源。由于两者的成分含
量差异较大，《中华人民共和国药典》2005 年版起葛根
单指野葛的根，而甘葛藤则作为粉葛的来源单列。含
葛根及葛根素药物的分析报道较多，但主流方法仍然
是高效液相色谱法和薄层扫描法［2］。笔者在本研究
中建立可同时用于葛根和粉葛测定的高效液相色谱
(high performance liquid chromatography，HPLC)指纹图
谱分析方法，并分别指认出其中的 13 和 7 个主要成
收稿日期 2012 － 09 － 12 修回日期 2012 － 10 － 28
作者简介 王金华(1964 －) ，男，江苏高淳人，副主任中药
师，研究方向:中药饮片质量标准及物质基础研究。电话:025
－ 57351637，E-mail:752954044@ qq． com。
通讯作者 姚仲青(1963 －) ，男，主任中药师，博士，研究
方向:中药制剂与新药研究。电话:025 － 83505999，E-mail:
zqyao@ msn． com。
分，在此基础上对 7 个葛根样品和 17 个粉葛样品的化
学成分进行分析;并对葛根与粉葛的薄层色谱(thin-
layer chromatography，TLC)进行分析比较，为完善葛根
与粉葛的质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 岛津 LC-20AB 高效液相色谱仪，包括在
线脱气机、二元泵、高性能自动进样器、柱温箱、SPD-
M20A二极管阵列检测器;岛津 LCMS-2020 四极杆质
谱仪，配有标准电喷雾离子源(ESI) ;Lab Solution 数据
处理软件;BS210S 型电子天平(北京赛多利斯仪器系
统有限公司) ;CAMAG 公司薄层色谱系统，包括半自
动点样仪 linomat5-15074 及自动成像系统 Visnaliter-
151204;HH-S6 数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器
厂) ;R-210 BUCHI旋转蒸发仪(BUCHI公司)。
1． 2 试剂及药材 甲醇(南京化学试剂有限公司)、乙
腈(美国天地)为色谱纯;水为纯化水;预制薄层硅胶 G
板(青岛海洋化工厂) ;葛根素对照品(中国食品药品检
定研究院，批号:110752-200912) ;大豆苷元对照品(泽朗
植提，含量 98%) ;葛根对照药材(中国食品药品检定研
究院，批号:121551-200902) ;其他葛根及粉葛饮片样品
购于市场，经南京市中医院俞明霞主任中药师鉴定，葛
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根为豆科植物野葛［Pueraria lobata(Willd．)Ohwi］的干
燥根(产地:安徽岳西、湖北枝城) ;粉葛为豆科植物甘葛
藤(Pueraria thomsonii Benth．)的干燥根(产地:广西藤
县;浙江德清)。见表 1。
表 1 粉葛、葛根饮片来源信息表
Tab． 1 The sources of Pueraria thomsonii and Pueraria
lobata
序号 来源 批号 序号 来源 批号
粉葛 粉葛
F1 浙江 080703 F14 广西 120308
F2 广西 080704 F15 广西 120401
F3 广西 090301 F16 广西 120430
F4 广西 110101 F17 广西 120509
F5 广西 110501 葛根
F6 广西 110803 G1 湖北 080808
F7 广西 111114 G2 江西 080809
F8 广西 111130 G3 安徽 111008
F9 广西 111210 G4 安徽 01200111
F10 广西 111230 G5 安徽 120201
F11 广西 120201 G6 安徽 120410
F12 广西 120201 G7 对照药材
F13 广西 120301
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
2． 1． 1 薄层色谱条件 将供试品溶液与对照品溶液
分别吸取 2 μL 点于同一硅胶 G 板，以三氯甲烷∶甲
醇∶水(7∶2． 5∶0． 25)为展开剂，展开，展距约为 8
cm，取出，晾干，置紫外灯(波长 365 nm)下视检。
2． 1． 2 液相色谱条件 色谱柱:YMC-Pack ODS-A
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:乙腈(B)-0． 1%磷
酸水溶液(A) ;梯度洗脱条件:0 ～ 30 min，B 10%→
15%;～ 50 min，B 15% →40%;～ 60 min，B 40% →
90%;～ 70 min，B 90% →100%;～ 80 min，B 保持
100%;光电二极管阵列检测器(PDA)200 ～ 600 nm 全
波长检测，优化检测波长:246 nm;柱温 35 ℃;流速
1 mL·min －1;进样体积:10 μL。
2． 1． 3 质谱条件 色谱柱:YMC-Pack ODS-A
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，分流比 1∶4，进样量
20 μL，其他液相条件同前。质谱检测条件:离子源为
ESI源;离子极性:ESI(+ / －) ;扫描范围 m/z:100 ～
1 000;雾化器(氮气)流速 1． 5 L·min －1;干燥气流速
1． 5 L·min －1;源电压 1． 5 kV。
2． 2 对照品溶液配制 精密称取葛根素、大豆苷元适
量，分别置于 10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度。再分
别精密吸取上述对照品储备液各适量置 5 mL量瓶中，
用甲醇定容至刻度配制成混合对照品溶液，备用。
2． 3 供试品溶液制备
2． 3． 1 薄层色谱用供试品溶液制备 精密称取各样
品 0． 8 g，加甲醇 10 mL，超声 30 min。滤过，滤液蒸
干，加甲醇 1 mL溶解残留物。
2． 3． 2 HPLC及 LC-MS 用供试品溶液制备 精密称
取粉葛与葛根药材粗粉(称取量:HPLC 指纹图谱约为
0． 5 g，质谱分析约为 1 g) ，加 80%乙醇 50 mL，称定重
量，浸透并超声处理 10 min后，于 80 ℃水浴中加热回
流提取 30 min，放冷，再称定质量，用 80%乙醇补足减
失质量，摇匀，滤过。
2． 4 粉葛、葛根 TLC 图谱比较 分别称取各 5 份粉
葛(F13 ～ F17)、葛根饮片(G3 ～ G7)粉末 1． 0 g，依照
“2． 3”项下制备法制备供试品溶液，取葛根素对照品
溶液和饮片供试品溶液依照“2． 1． 1”项下薄层色谱条
件操作。结果见图 1。
2． 4 HPLC方法学考察
2． 4． 1 精密度考察 精密吸取同一份粉葛饮片
(F16)供试品溶液 10 μL，连续进样 6 次，测得各供试
品共有峰相对面积和相对保留时间的 RSD 分别
＜ 1． 8%和 ＜ 0． 7%。表明仪器的精密度良好。
2． 4． 2 重复性考察 精密吸取粉葛饮片(F16)粉末 6
份，按照“2． 3”项下制备供试品溶液分别进样 10 μL，
测得供试品溶液各共有峰相对峰面积和相对保留时间
的 RSD分别 ＜ 3%和 ＜ 0． 8%。表明重复性良好。
2． 4． 3 稳定性考察 精密吸取同一份粉葛饮片(F16)
供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h 进样10 μL，测得
各共有峰相对峰面积和相对保留时间的 RSD 分别
＜2． 6%和 ＜1． 2%。表明样品溶液在 24 h内稳定。
2． 5 粉葛和葛根指纹图谱的建立 分别精密吸取空
白溶剂、混合对照品及 16 批粉葛和 6 批葛根饮片供试
品溶液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，分别按照
“2． 1”项下色谱条件，并记录色谱图分析。并将分析
结果采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A)软件”进行处理。经比较后，分别分析了 16
批粉葛样品和 6 批葛根样品的指纹图谱，确定粉葛饮
片共有峰 14 个，葛根饮片共有峰 19 个。结果见图2 ～
4。
2． 6 粉葛和葛根样品相似度分析 分别以软件产生
的粉葛和葛根共有模式为对照图谱，计算各个粉葛和
葛根样品图谱与对照图谱的相似度。粉葛相似度依次
为:0． 996，0． 993，0． 991，0． 996，0． 995，0． 997，0． 989，
0． 992，0． 992，0． 997，0． 994，0． 989，0． 998，0． 997，0． 996，
·625· Herald of Medicine Vol. 32 No. 4 April 2013
图 1 葛根与粉葛的薄层色谱图
S1，S2 为葛根素对照品; 1 ～ 5 为 G3 ～ G7; 6 ～ 10 为 F13 ～ F17
Fig． 1 TLC chromatogram of Pueraria lobata and Pueraria thomsonii
S1，S2 were puerarin reference substance; 1-5 were Sample of G3-G7，respectively; 6-10 were Sample of F13-F17，，respectively
图 2 对照品葛根素(S1)和大豆苷元(S2)HPLC图
Fig． 2 HPLC chromatogram of puerarin (S1) and
isoflavoues aglycone(S2)
图 3 粉葛 HPLC共有模式
4．葛根素; 14．大豆苷元
Fig． 3 Mutual pattern of HPLC fingerprints of Pueraria
thomsonii
4． puerarin; 14． isoflavones aglycone
图 4 葛根 HPLC共有模式
8．葛根素; 17．大豆苷元
Fig． 4 Mutual pattern of HPLC fingerprints of Pueraria
lobata
8． puerarin; 17． isoflavones aglycone
0． 959，0． 995;葛根相似度依次为:0． 996，0． 990，0．
997，0． 988，0． 998，0． 998，0． 995。结果不同批次粉葛
饮片间的相似度和不同批次葛根饮片间的相似度均 ＞
0． 95，表明不同批次的粉葛和葛根各自相似度较高。
将粉葛和葛根的共有模式进行相似度对比，以粉葛共
有模式为参照，结果葛根共有模式与其相似度为
0． 940。
2． 7 粉葛与葛根化学成分的 HPLC-MS 分析 为了尽
可能了解粉葛和葛根 HPLC指纹图谱中各成分的结构
信息，对粉葛饮片(F16)和葛根饮片(G6)进行 HPLC-
MS分析。总离子流图见图 5 ～ 6。参考对照品分子质
量信息及文献［3-7］报道，对色谱图中的部分色谱峰进
行了指认，共鉴定了 13 个化合物。结果见表 2。
·725·医药导报 2013 年 4 月第 32 卷第 4 期
图 5 粉葛的 HPLC-UV 色谱图(A)和正离子 TIC质谱图(B)
Fig． 5 HPLC-UV chromatogram(A)and Pos-MS TIC
(B)of Pueraria thomsonii
3 讨论
通过对 HPLC 供试品提取方式(冷浸、超声、加热
回流)、提取溶剂(乙醇、水、20%乙醇水、60%乙醇水、
80%乙醇水)、料液比(1∶10，1∶20，1∶50，1∶100)单
因素考察，通过对指标性成分峰面积比较，结果表明:
回流的提取效率比其他两种提取方式高，料液比在
1∶50时提取即可比较完全，由于大豆苷元等极性较小
的异黄酮成分提随着提取溶液中乙醇比例升高
(20% ～ 80% ) ，提取效率提高明显，葛根素等极性较
大的异黄酮成分在此(20% ～ 80% )范围内提取效率
变化不大。最终采用 80%乙醇溶液回流提取，料液比
图 6 葛根的 HPLC-UV 色谱图(C)和正离子 TIC 质谱图
(D)
Fig． 6 HPLC-UV chromatogram (C)and Pos-MS TIC
(D)of Pueraria lobata
为 1∶50。通过对葛根和粉葛 TLC 图谱的观察可以发
现，在本实验药材用量条件下，葛根图谱信息明显比粉
葛丰富，相同位置如葛根素等斑点的紫外吸收值葛根
比粉葛大。在本实验条件下，Rf值在 0． 80 ～ 0． 95 的范
围内，葛根明显比粉葛多出几个斑点。HPLC指纹图谱
粉葛饮片共有峰 14 个，野葛饮片共有峰 19 个。LC-MS
结果比较可以发现，相同称样量的情况下，鉴别出葛根
中异黄酮类成分个数及含量均比粉葛多。TLC 色谱信
息与 HPLC-UV 和 LC-MS 图谱信性息具有很好的统一
性。结果表明两者的 TLC图谱、HPLC图谱存在明显
表 2 葛根与粉葛 HPLC指纹图谱中化学成分指认及比较
Tab． 2 Identification and comparison of chemical constituents of Pueraria thomsonii and Pueraria lobata
序号
RT /
min
λ /nm
MS
［M + H］+ ［M-H］－
鉴定
峰号
粉葛 葛根
1 12． 9 247，285 595 593 Puerarin-3＇-methyoxy-4＇-O-glucoside … 3
2 14． 43 247，304 579 577 4＇-O-Glucosylpuerarin 1 4
3 20． 77 249，289 433 431 3＇-hydroxypuerarin … 6
4 21． 86 247，295 579 daidzein-4＇，7-O-glucoside 2 7
5 29． 30 249，289 565 563 3 ＇-hydroxyl puerarin -4＇-O-deoxyhexyoside or … 8
Puerarin-3 ＇-hydroxyl-xyoside
6 31． 53 249，304 417 415 Puerarin 3 9
7 35． 97 248，285 447 445 3＇-methoxypuruerarin … 10
8 37． 50 250，310 549 547 6＇-O-xylosylpuerarin or 6＇-O-apiosylpuerarin … 11
9 39． 10 250，310 549 547 6＇-O-apiosylpuerarin or 6＇-O-xylosylpuerarin 4 12
10 42． 00 196，242 579 577 3＇-methoxy-6″-o-xylosylpuerarin … 13
11 43． 10 249，295 417 415 Daidzin 5 14
12 56． 23 256，304 431 429 Ononin 9 18
13 64． 77 247，302 255 253 Daidzein 14 24
·825· Herald of Medicine Vol. 32 No. 4 April 2013
的差异，说明可以通过此 TLC 和 HPLC 指纹谱技术区
别葛根和粉葛。
指纹图谱技术具有综合、宏观、模糊等非线性特
点，被认为是鉴别中药真实性及评价质量一致性和产
品稳定性的实际可行的模式［8］。笔者在本研究运用平
均值法建立指纹图谱共有模式，并直接以其为参照进
行相似度计算。结果表明，不同批次的葛根与粉葛具
有较好的相似度，且葛根与粉葛间的相似度能达到
0． 940，说明两者化学成分分布的相似性较高。在本研
究实验条件下，分别初步指认了葛根与粉葛 HPLC 指
纹图谱中 13 和 7 个成分，其余色谱峰的指认还有待进
一步研究。中药成分复杂，且有效成分的含量差异大，
即使相似度较高，也可能存在很大的质量差异。文献
［8 － 11］结果也表明，葛根与粉葛的异黄酮含量相差很
大，在质量上有很大差距。所以两者在临床应用中具
有相同的功效，但将其两者区别应用具有较高的科学
依据。
参考文献
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部) ［M］．北
京:中国医药科技出版社，2010:272，312．
［2］ 黄兆龙，郭俊明，张东璧，葛根有效成分的提取和测定
［J］．医药导报，2003，22(5) :333 － 334．
［3］ 赵楠，王龙星，易进海，等．葛根总黄酮提取物中 30 种异
黄酮的 HPLC-MS鉴定［C］．大连国际色谱学术报告会
和展览会文集，2007:6 － 8．
［4］ 陈慧贞，李云飞，钟敬华，等． 脑得生片物质基础的
HPLC-DAD-MSn分析［J］．浙江大学学报:医学版，2012，
41(1) :32 － 42．
［5］ 李宇航，戴海学，李晓蓉，等． 葛根素的电喷雾电离裂解
规律解析［J］．质谱学报，2007，28(4) :224 － 228．
［6］ JEEVAN K P，ADAM R，KENNETH J，et al． Identification
of isoflavone glycosides in Pueraria lobata cultures by
tandem mass spectrometry［J］． Phytochemical Analysis，
2007，18:50 － 59．
［7］ DU G，ZHAO H Y，ZHANG Q W，et al． A rapid method for
simultaneous determination of 14 phonetic compounds in
Radix Puerariae using microwave-assisted extraction and
ultra high performance liquid chromatography coupled with
diode array detection and time-of-flight mass spectrometry
［J］． J Chromatography A，2010，1217:705 － 714．
［8］ 谢培山．中药质量控制模式的发展趋势［J］．中药新药与
临床药理，2001，12(3) :188 － 191．
［9］ 陈珺，宋敏，张钰，等． 粉葛与野葛中异黄酮的 HPLC 指
纹对照和比色测定［J］． 中国新药杂志，2008，17(14) :
1240 － 1246．
［10］ 吴艳芳，王新胜，殷婕． 等． 野葛与粉葛总黄酮提取方法
的比较［J］．中国现代中药，2011，13(3) :38 － 39．
［11］ 高国峰，周珩． 粉葛饮片质量标准研究［J］． 中国药业，
2010，19(12) :47 － 48．
DOI 10． 3870 /yydb． 2013． 04． 035
田琥胶囊的制备与质量控制
黄华斌
(湖北省恩施州中心医院药剂科，445000)
摘 要 目的 建立田琥胶囊制备工艺及其质量标准。方法 采用半浸膏喷雾制粒法制粒后填充成胶囊剂，用薄
层色谱法对三七和丹参进行定性鉴别，用高效液相色谱( HPLC) 法对人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1 及三七皂苷 R1 的总量
进行含量测定，并制定性状、检查等标准。结果 制备工艺可行，制定的薄层色谱法可专属性检测三七和丹参，人参皂苷
Rg1、人参皂苷 Rb1 及三七皂苷 R1 进样量分别在 1． 6 ～ 8． 0，1． 6 ～ 8． 0 及 0． 4 ～ 2 ． 0 μg 范围内与峰面积线性关系良好。
结论 该制剂处方合理，制备工艺简单，质量控制方法准确、全面，可用于田琥胶囊的质量控制。
关键词 田琥胶囊;制备工艺;质量控制
中图分类号 R286; TQ460． 6 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781( 2013) 04 － 0529 － 03
田琥胶囊是根据我院名老中医的经方，采用现代
科学技术提取中药有效成分制备而成的纯中药制剂。
通过多年的临床验证，取得较好的治疗效果［1］。该制
剂具有活血祛瘀、安神镇痛、止血之功效。为了控制本
品质量，对处方中的三七(君药)、丹参(臣药)作薄层
色谱鉴别，对君药三七的主要有效成分人参皂苷 Rg1、
人参皂苷 Rb1及三七皂苷 R1的总量采用高效液相色谱
(high performance liquid chromatography，HPLC)法测
定，方法稳定可靠，简便准确，重复性好［2］。现将其制
备工艺与质量控制方法介绍如下。
1 材料与仪器
1． 1 材料 田琥胶囊(湖北省恩施州中心医院制剂
·925·医药导报 2013 年 4 月第 32 卷第 4 期