全 文 ：第 28卷 ,第 3期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 8 , No . 3
2 0 1 1年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 1
RP-HPLC快速同时测定粉葛中
葛根素和大豆苷元的含量①
① 陕西省自然科学基础研究计划项目 ( No. SJ08B19)
② 联系人 ,电话: ( 029) 86172835; E-mail: t li zi@ sina. com
作者简介:王黎 ( 1978— ) ,女 ,河南省新密市人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事分析化学教学及药物质量评价研究工作。
收稿日期: 2011-04-02;接受日期: 2011-04-12
王 黎②　张小清　苗延青
(西安医学院药学院　西安市未央区辛王路 1号　 710021)
摘　要　采用 RP-HPLC测定不同产地粉葛中葛根素和大豆苷元两种有效成分的含量。 色谱柱为
Kromasin C18柱 ( 150mm× 4. 6mm, 5μm) ;流动相为甲醇 [B ]-水 [ A ], 0— 35min B相由 20%升到 55% ;流速
为 0. 8 mL /min; 检 测 波 长 为 268nm。 葛 根 素 在 8. 0— 80. 0μg /m L ( r = 0. 9996 )、 大 豆 苷 元 在
0. 81— 8. 15μg /mL ( r = 0. 9998)浓度范围内线性关系良好 ,葛根素的平均回收率为 99. 30% , RSD为
0. 73% ,大豆苷元的平均回收率为 99. 54% , RSD为 2. 81%。 RP-HPLC可以作为简单可行的粉葛药材质量
评价方法。
关键词　粉葛 ;葛根素 ;大豆苷元 ;反相高效液相色谱法
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2011) 03-1431-04
1　引言
葛根 ( Radix Puerariae)始载于《神农本草经》 ,为药食两用的植物 ,具有解肌退热、生津、透疹、
升阳止泻等功能 [1 ] ,市售葛根药材主要为粉葛 ( Pueraria thomsonii )。粉葛药材中的主要有效成分为
葛根素、大豆苷元、大豆苷等异黄酮类化合物 [ 2] ,本文建立了葛根素、大豆苷元的同时快速测定的方
法 ,为葛根药材的质量控制提供了一定的依据。
2　实验部分
2. 1　仪器与试药
Summi P680ALPC-4高效液相色谱仪 (美国戴安公司 ) ,配有四元梯度低压泵 , UV D170U检测
器 , Chromeleon色谱工作站 ; Kromasin C18色谱柱 ( 150mm× 4. 6mm, 5μm,陕西明海科技有限公
司 ) ; DZG-303A艾柯超纯水机 (成都康宁实验专用纯水设备厂 ) ; SB-5200DT超声波清洗机 (宁波市
生物科技股份有限公司 ) ; BS210S型电子天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ; AnkeTGL-16G
高速台式离心机 (上海安亭科学仪器厂 )。
葛根素、大豆苷元对照品 (纯度均> 98. 6% ,陕西省食品药品检验所 ) ;粉葛药材样品购于各地 ,
见表 1。甲醇 (西安化学试剂厂 ,色谱纯 )。实验用水为超纯水。
表 1　粉葛药材样品
编号 来源 产地
1 西安老百姓大药房 四川
2 陕西怡悦大药房 陕西
3 西安怡康医药超市 广西
4 西安藻露堂大药房 湖南
5 北京同仁堂药店 河南
6 江苏省药材公司 安徽
2. 2　实验方法
2. 2. 1　色谱条件
色谱柱: Kromasin C18柱 ( 150mm× 4. 6mm , 5μm);流动相: 甲醇 [B ]-水 [ A ] ,梯度洗脱方式 ,
0— 35min B相由 20%升到 55% ;流速: 0. 8mL /min;柱温: 25℃ ;检测波长: 268nm;进样量: 10μL。
按此条件进样 ,测得葛根素和大豆苷元混合对照品及粉葛药材的色谱图 ,见图 1、图 2。
图 1　葛根素和大豆苷元混合对照品色谱图 图 2　粉葛药材色谱图
2. 2. 2　对照品溶液的制备
准确称取葛根素、大豆苷元对照品适量 ,分别用 30%甲醇水溶液溶解稀释成每 1mL含
200. 0μg和 81. 5μg的溶液 ,经 0. 45μm微孔滤膜过滤 ,备用。
2. 2. 3　粉葛药材样品溶液的制备
将 6个不同产地的粉葛药材样品粉碎过 60目筛 ,分别准确称取 0. 2g加入 30%甲醇水溶液
20mL,称重 ,在 40℃、 70Hz超声提取 30min,放冷 ,用相同溶剂定容至 25mL容量瓶 ,摇匀 ,在
3500r /min下离心 5min,取上清液经 0. 45μm微孔滤膜过滤 ,备用。
3　结果与讨论
下述实验均按 2. 2. 2或 2. 2. 3项下方法制备供试品溶液 ,按 2. 2. 1项下色谱条件操作。
3. 1　方法学考察
3. 1. 1　线性实验
准确量取对照品溶液适量 ,用 30%甲醇水溶液分别稀释成含有 8. 0、 20. 0、 32. 0、 44. 0、 56. 0、
80. 0μg /m L葛根素和 0. 81、 1. 63、 3. 26、 4. 89、 6. 42、 8. 15μg /mL大豆苷元的 6个标准溶液 ,进样后
分别以葛根素和大豆苷元的峰面积 ( A )对其浓度 (C )进行回归计算 ,得方程 A= 0. 4638C+ 0. 4686,
r= 0. 9996 (葛根素 )及 A= 0. 2325C+ 0. 0118, r = 0. 9998 (大豆苷元 )。 结果表明葛根素在
8. 0— 80. 0μg /mL、大豆苷元在 0. 81— 8. 15μg /mL浓度范围内线性关系良好。
1432 光谱实验室 第 28卷
3. 1. 2　精密度实验
准确吸取葛根素、大豆苷元混合对照品溶液 ,连续进样 6次 ,以葛根素、大豆苷元的峰面积为指
标 ,计算其 RSD分别为 1. 12%、 1. 85% ,结果表明本方法具有良好的精密度。
3. 1. 3　重复性实验
制备葛根素、大豆苷元混合对照品溶液 6份 ,进样后以葛根素、大豆苷元的峰面积为指标 ,计算
其 RSD分别为 1. 95% 、 2. 64% ,结果表明本方法重现性较好。
3. 1. 4　稳定性实验
准确吸取葛根素、大豆苷元混合对照品溶液 ,分别于 0、 2、 4、 6、 8、 12h进样 ,以葛根素、大豆苷元
的峰面积为指标 ,计算其 RSD分别为 1. 66%、 1. 01% ,结果表明葛根素、大豆苷元在供试品中 12h
内稳定。
3. 1. 5　回收率实验
表 2　葛根素回收率实验 (n= 6)
编号 样品中葛根素含量
(μg /mL)
加标量
(μg /m L)
测得量
(μg /mL)
回收率
(% )
平均值
(% )
RSD
(% )
1 49. 30 26. 43 75. 33 98. 49
2 49. 30 27. 76 76. 66 98. 56
3 49. 29 49. 31 98. 56 99. 92 99. 30 0. 73
4 49. 29 49. 04 98. 24 99. 82
5 49. 31 58. 47 107. 15 98. 92
6 49. 31 58. 51 107. 88 100. 10
表 3　大豆苷元回收率实验 (n= 6)
编号 样品中大豆苷元含量
(μg /mL)
加标量
(μg /m L)
测得量
(μg /mL)
回收率
(% )
平均值
(% )
RSD
(% )
1 1. 85 1. 47 3. 34 101. 36
2 1. 85 1. 49 3. 29 96. 64
3 1. 86 1. 84 3. 71 100. 5 99. 54 2. 81
4 1. 86 1. 89 3. 82 103. 70
5 1. 85 2. 21 3. 99 96. 83
6 1. 85 2. 20 4. 01 98. 18
　　准确量取粉葛药材样品溶液适量于 3个 5mL容量瓶中 ,分别加入低、中、高 3个水平的混合对
照品溶液进样 ,计算葛根素、大豆苷元的加样回收率 ,结果见表 2、表 3,结果表明本方法测定粉葛药
材的回收率较好。
3. 2　不同产地粉葛药材样品中有效成分的含量测定
取 6批不同产地的粉葛药材样品适量各 3份制备供试品溶液 ,进样后根据其葛根素、大豆苷元
的峰面积 ,分别计算药材中葛根素、大豆苷元的含量均值 ,结果见表 4。根据葛根素和大豆苷元的总
含量可以把不同产地的粉葛药材分为 2类: A.总含量小于 3mg /g的产地有广西 ; B.总含量在
3— 5mg /g之间的产地有四川、陕西、湖南、河南、安徽 ;结果表明目前市售的粉葛药材中有效成分含
量基本达到国家要求 [1 ] ,但其中 A类药材样品的质量较差。
4　结论
本文通过方法学考察建立了快速同时测定粉葛药材中有效成分含量的方法 ,测定了不同产地
的粉葛药材中葛根素和大豆苷元的含量 ,并对药材进行了初步的质量评价 ,为葛根药材的质量鉴别
1433第 3期 王黎等: RP-HPLC快速同时测定粉葛中葛根素和大豆苷元的含量
与质量控制提供了一定的依据。
表 4　不同产地粉葛药材中葛根素、大豆苷元的含量 (n= 3)
编号 产地 葛根素 ( mg /g) 大豆苷元 ( mg /g ) 总含量 (mg /g)
1 四川 3. 04 0. 36 3. 40
2 陕西 3. 48 0. 25 3. 73
3 广西 1. 45 0. 27 1. 72
4 湖南 3. 59 0. 31 3. 90
5 河南 4. 15 0. 39 4. 54
6 安徽 2. 99 0. 30 3. 29
参考文献
[1 ]国家药典委员会 .中华人民共和国药典一部 [M ] .北京:化学工业出版社 , 2005. 230.
[2 ]迟霁飞 .葛根化学成分和质量控制研究 [D] .沈阳:沈阳药科大学 , 2006. 2— 5.
Rapid Simultaneous Determination of Puerarin and Daidzein
inPueraria Thomsonii by RP-HPLC
WAN G Li　 ZHANG Xiao-Qing　 M IAO Yan-Qing
( School o f Pharmacy, Xi’ an Med ical University, X i’ an 710021, P. R. China)
Abstract　 The contents of puerarin and daidzein in different Pueraria thomsonii samples f rom
various producing areas were determined by RP-HPLC. The separation condi tions w ere as follows:
column was Kromasin C18 ( 150mm× 4. 6mm, 5μm) , mobile phase was methanol [B ]-w ater [ A ] ,
concentration of mobile [B ] increased from 20% to 55% along w ith time betw een 0 and 35 min, flow
rate w as 0. 8mL /min and detection wavelength was 268nm. The linear relationship of puerarin and
daidzein were obtained in the range of 8. 0— 80. 0μg /mL ( r = 0. 9996) and 0. 81— 8. 15μg /mL
(r= 0. 9998) , respectively. Their av erage added standard recovery w as 99. 30% ( RSD= 0. 73% ) and
99. 54% ( RSD= 2. 81% ) , respectively. The method can be applied to quality evaluation and control of
Pueraria thomsonii by RP-HPLC.
Key words　 Pueraria Thomsonii; Puerarin; Daidzein; RP-HPLC
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1434 光谱实验室 第 28卷