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野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较



全 文 :2011 年 3 月 第 13 卷 第 3 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Mar. 2011 Vol. 13 No. 3
工 艺
△[基金项目] 新乡医学院高学历人才科研启动基金项目( 05SSKYQD-15) ,新乡医学院省级重点学科开发课题( ZD200968)
[通讯作者] * 吴艳芳,Tel: ( 0373) 3831981,E-mail: wyf245@ 163. com
野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较△
吴艳芳* ,王新胜2,3,殷婕3,戴仕林3
( 1. 新乡医学院药学院,河南 新乡 453003;
2. 河南科技大学化工与制药学院,河南 洛阳 471003;
3. 南京中医药大学药学院,江苏 南京 210046)
[摘要] 目的: 野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较。方法: 分别采用传统回流提取法、超声提取法、微波辅
助提取法对中药野葛和粉葛中总黄酮进行提取; 以葛根素为对照品,采用紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含
量; 以总黄酮的含量为考察指标,优选出适宜的提取方法。结果: 3 种提取方法中,野葛超声提取法总黄酮含量最
高,粉葛微波辅助提取法总黄酮含量最高,但回流提取法和超声提取法提取野葛与粉葛总黄酮时没有显著性差异。
结论: 提取野葛与粉葛黄酮时应采用不同的提取方法。
[关键词] 野葛; 粉葛; 总黄酮; 提取方法
葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata ( Willd. )
Ohwi的干燥根,习称野葛; 粉葛为甘葛藤 Pueraria
thomsonii Behth. 的干燥根[1]。野葛和粉葛的主要成
分为葛根素、大豆苷元等异黄酮类化合物。药理实
验证明其中的总黄酮具有抗氧化、抗菌、抗癌作用。
野葛和粉葛中总黄酮的提取方法有传统方法如水提
法、醇回流法和醇浸渍法,以及中药提取新技术如
超声提取法、微波辅助提取法、酶法和超临界流体
萃取法等[2-7]。本实验以乙醇为溶剂,用紫外分光光
度法分析野葛与粉葛中总黄酮的含量,比较了回流
提取、微波辅助提取和超声波提取 3 种提取方法,
为提取野葛与粉葛中总黄酮提供方法依据。
1 材料、试剂与仪器
1. 1 材料与试剂
野葛、粉葛药材采自伏牛山区栾川县境内,经
新乡医学院药学院药用与生药学教研室吴艳芳教授
鉴定为野葛 Pueraria lobata ( Willd. ) Ohwi 和甘葛藤
Pueraria thomsonii Behth. 的根。葛根素对照品( 北京
化工大学,纯度 > 98 % ) 。试剂均为分析纯。
1. 2 仪器
KQ3200B 型超声清洗仪( 昆山市超声仪器有限
公司) ,BS224S电子天平( 赛多利斯科学仪器北京
有限公司 ) ,SHZ2C 型循环水使用多功能真空泵
( 巩义市英峪豫华仪器厂) ,7521 紫外 2 可见分光
光度计( 上海精密仪器厂) ,美的家用微波炉( 美的
集团) ,数显恒温水浴锅 ( 上海路达实验仪器有限
公司) 。
2 方法
2. 1 样品制备
2. 1. 1 回流提取[3] 精密称定野葛与粉葛各 3 份,
置于圆底烧瓶中,按照料液比 1 ∶8 加入 70 %乙醇,
于 80 ℃恒温水浴锅中,回流提取 3 h,提取 3 次。
提取后抽滤,减压回收溶剂至少量,转至 100 mL容
量瓶中,70 %乙醇定容。
2. 1. 2 超声提取 精密称定野葛与粉葛各 3 份,置于
50 mL三角瓶中,按照固液比 1∶10 加入 70 %乙醇,
在温度 60 ℃条件下,超声提取 20 min,提取 2 次,
补足损失量。提取后过滤,定容于 100 mL 容量
瓶中。
2. 1. 3 微波辅助提取 精密称定野葛与粉葛各 3 份,
置于圆底烧瓶中,按照固液比 1∶25 加入 60 %乙醇,
浸泡 1 h,功率为 400 W的微波炉中提取 10 s,间歇
3 次。提取后抽滤,减压回收溶剂至少量,转至
100 mL容量瓶中,70 %乙醇定容。
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2011 年 3 月 第 13 卷 第 3 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Mar. 2011 Vol. 13 No. 3
2. 2 标准曲线的绘制
精密称取葛根素对照品 0. 011 3 g,用 70 %乙醇
溶解并定容于 100 mL容量瓶中,得 0. 113 mg·mL -1
的葛根素对照溶液。准确吸取该对照溶液 0,0. 2,
0. 4,0. 6,0. 8,1. 0 mL 于 10 mL 容量瓶中,70 %
乙醇稀释定容,得系列对照品溶液。以 1. 0 mL
70 %乙醇定容至 10 mL 作空白对照,于 250 nm 处
测定各对照品溶液吸光度,以浓度为纵坐标,总黄
酮质量浓度 C ( mg·mL -1 ) 为横坐标进行线性回归,
得回归方程 C = 16. 66A + 0. 065 7,r = 0. 999 9。
2. 3 样品总黄酮含量测定
各取上述待测原溶液 2 mL,置于 25 mL 容量瓶
中,加 70 %乙醇定容至刻度,摇匀。分别取稀释液
1. 0 mL,置于 10 mL 容量瓶中,按照 “标准曲线绘
制”项下的方法,在 250 nm下测定其吸光度 A,按
回归方程计算出样品溶液中的总黄酮含量 ( mg·
mL -1 ) ,根据稀释倍数及样品质量换算出样品中总
黄酮的含量( % ) 。
3 结果
3 种方法提取的提取液,按照 2. 3 项下测定吸光
度,以标准曲线法计算总黄酮含量,结果见表 1。
表 1 不同提取方法总黄酮得率
/%
提取方法 野葛 粉葛
回流提取法 11. 84 4. 81
超声提取 11. 88 4. 98
微波辅助提取 8. 21 5. 39
从结果来看,在提取野葛与粉葛的总黄酮时,
提取方法不同,其提取效果也不同。对于野葛,超
声法较好,而粉葛则微波辅助提取法较好。
4 讨论
传统回流提取法现在中药制药企业还占主导地
位,但提取时间长,样品长时间受热易破坏结构,
相信随着科学技术的发展,提取新技术和新方法会
逐渐替代传统的方法。
超声波法是近年来被用于中药提取的一项新技
术。它利用超声波产生的强烈的空化作用,对细胞
膜进行破坏,帮助化学成分的释放与溶出,从而提
高提出率,缩短提取时间,并且避免高温对提取成
分的影响。根据王辰等[6]研究结果,我们以 70 %乙
醇为溶剂,60 ℃为提取温度,对料液比、提取时间
和提取次数进行考察。优选出固液比 1 ∶10,超声提
取 20 min,提取 2 次,黄酮提取率最高。
微波提取是最新发展起来的新技术,以微波穿
透性加热的原理为基础即微波对物料为立体加热,
在微波场中,各种物质吸收微波能力的差异使得基
本物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择
加热,从而使物质内部产生能量差,被萃取物质得
到足够的动力从机体或体系中分离出来。根据相关
文献[7-8]和本实验室设备,通过不同的实验方案设
计,优选出本研究的提取方法。
从结果来看,微波辅助提取法提取野葛中黄酮
得率在 3 种方法中最低,超声提取和回流提取较高,
但二者没有显著性差异,从省时、节能、效率、经
济角度考虑,超声法适宜,随着循环超声提取技术
解决局部过度超声处理和超声波在介质中的快速衰
减问题,相信超声提取法在中药提取的应用会越来
越多。粉葛黄酮提取率以微波辅助提取法最高,目
前在我国制药领域,微波提取已经被用于多项中草
药的浸提生产之中,如苷类、银杏等。这种新的提
取技术无论是提取速度、提取效率,还是提取质量,
均比常规生产工艺更显优势。因此,在提取两种药
材的总黄酮时,应采用不同的提取方法。
参考文献
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( 收稿日期 2010-09-28)
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2011 年 3 月 第 13 卷 第 3 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Mar. 2011 Vol. 13 No. 3
新形势下中药材供应的 “多”和 “少”已经发
生了很大变化,是数字的变化导致了概念的变化,
在过去低粮价、低工价、低成本的时代,受市场价
格波动的影响,中药材生产极容易走上 “一哄而
上”和“一散而下”的两个极端,这两个极端造成
了市场行情非常明显的周期性发展,并形成了周期
高价短暂、周期低谷漫长的特点。那时中药材供应
的“多”是绝对的、长期的, “少”是相对的、短
暂的,其根本的原因是几亿农民在土地上苦苦求财,
稍有诱惑便趋之若鹜, “一哄而上”的盲目生产,
大量浪费了社会劳动力资源和物质财富,很多地方
药农因种药脱贫而越脱越贫,无情的市场践踏了心
酸的眼泪。十年后,中药材价格全面暴涨,压抑多
年的行情终于出现了 “井喷”,这次中药材价格的
上涨,不简单的是通货膨胀造成的,不容忽视的一
点是中药材生产逐年萎缩而造成供求矛盾加剧的集
中体现。这次麦冬 140 元的天价行情没有人为炒作
的推动,而是生产环节出了问题,产区集中、土壤
退化,如果没有极高价格刺激新产区开发,没有极
高价格调动生产者的积极性, “麦冬现象”也许是
今后市场的第一,却不是最后,这是新形势下的
“少”。
泽泻 2010 年产新后从 22 元 ( 千克价,下同)
的天价一路直线下滑,直到产地 6 元的触底价,但
低价维持不久便出现反弹,年后数日就反弹至 14 元
令人瞠目的价格。泽泻生长周期短,仅仅数月而已,
受栽种期高价刺激,2011 年新种面积大、长势好是
产新前各产地的一致特点,目前的价格再一次证实,
泽泻产新前的市场库存是空虚的,泽泻新货产量
“大”是相对的,虽然任何一个人都无法拿出准确
的数字来形容和对比今天的 “多”和历史的 “多”
存在多大差别,但是有一点是客观的,今天的
“多”和历史上的 “多”已经不是一个概念,过去
的品种冲高回落后,很多品种都没有反弹的机会出
现,其根本原因就是产量的大山压垮了价格的脊梁。
今天泽泻的脊背没有被产量的大山所压垮,生产有
恢复,但并非盲目。泽泻后市很难想象能再涨到怎
么高的价位,但也很难想象会在如何低的价位运行。
“泽泻现象”在今后其他品种中也会体现出来,这
就是新形势下的“多”。
市场是发展的,行情是变化的,刻舟求剑的思
维不可取,等待冲动的是惩罚。不骄、戒躁,审时
度势、善于观察、勤于思考,才能在百变的市场博
弈中立于不败之地。
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
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Comparison of the Different Extraction Methods of Total Flavones from Puerariae Lobatae
Radix and Puerariae Thomsonii Radix
WU Yan-fang1,WANG Xin-sheng2,3,YIN jie3,DAI Shi-lin3
( 1. Pharmaceutical College,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003,China;
2. Chemical and Pharmaceutical College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China;
3. Pharmaceutical College,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,China)
[Abstract] Objective: To compare the different methods on extracting total flavones from puerariae lobatae
radix and puerariaet homsonii radix. Methods: Total flavones were extracted by the methods of traditional refluxing,
ultrasonic wave and microwave aided extraction. Content of total flavones was measured by UV spectrophotometry and
puerarin was used as reference substance. Optimal extraction method was obtained by using the content of total flavones
as index. Results: Among the three methods,the content of total flavones in the extracts of puerariae lobatae radix
obtained by ultrasonic wave extraction was the highest,for puerariae thomsonii radix the microwave aided extraction
was the best. The content of total flavones from two traditional Chinese medicine with the traditional refluxing and
ultrasonic wave extraction had no significant difference. Conclusion: The extraction of total flavones from puerariae
lobatae radix and puerariae thomsonii radix should be carried out by different extraction methods.
[Key words] Puerariae lobatae radix; Puerariae thomsonii radix; Total flavones; Extraction method
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