全 文 ：·实验研究·
应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用
与刀豆素A浓度的关系
甘　露　黄庆军　刘惠敏　郭　红　苏德华　王晓娜
　　【摘　要】　目的　探讨应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用与刀豆素 A浓度的关系。方法　
雄性SD大鼠随机分成实验组和对照组 ,实验组大鼠应激 15 d。 取正常雄性 BALB C 小鼠脾细胞悬液分
别给予不同浓度刀豆素A ,以 MTT法测定应激大鼠血清对脾淋巴细胞在刀豆素 A诱导下的转化率。结
果　给予浓度为 2.5 ～ 5 μg ml的刀豆素A 的实验组与对照组相比具有显著性差异(P <0.01 , n =6),
给予浓度为 10μg ml的刀豆素 A的实验组与对照组相比差异不显著(P >0.05 , n =6)。结论　刀豆素
A在应激大鼠血清对淋巴细胞转化的抑制作用中的适当浓度为 2.5～ 5μg ml。
【关键词】　应激血清;淋巴细胞转化;刀豆素 A
【中图分类号】　R 363.2+7;R 392.12　【文献标识码】　A　【文章编号】　1672-2876(2003)03-0140-02
The Relationship between Inhibitory Effect of Serum from Stressed Rat on Lymphocyte Proliferation and
Con A Concentration　GAN Lu , HUANGQingjun , LIU Huimin , et al.Psychoneuroimmunology Lab , Bethune Milit-
ary Medical College , Shijiazhuang　050081 , China
【Abstract】　Objective　To study the relationship between inhibitory effect of serum from stressed rat on lym-
phocyte proliferation and Con A concentration.Methods　Male SD rats were received 5 different stresses in 15 days.
Con A was given in different concentration in lymphocyte proliferation , which was tested with MTT.Results　The
lymphocyte proliferation induced by Con A(2.5～ 5μg ml)was significantly inhibited by serum from stress rats com-
pared with control group(P <0.05).Conclusion　The study showed that stress serum can inhibit the responsive-
ness of Con A activated spleen cells , but concentration of Con A must be 2.5 ～ 5 μg ml.
【Key words】　Stress serum;Lymphocyte Proliferation;Con A
作者单位:石家庄　白求恩军医学院心理神经免疫学实验室
　　体外诱导的鼠T 细胞转化实验包括非特异性的
丝裂原诱导的转化反应和特异性抗原刺激的转化反
应。大 、小鼠 T 细胞敏感的丝裂原首选刀豆素 A
(Con A),选用 Con A 作为鼠 T 细胞转化诱导剂时 ,
对小鼠T 细胞的 Con A浓度为 4 ～ 5 μg ml为佳[ 1 , 2] 。
在我们的实验中 ,经常以应激动物血清对 Con A 诱
导的小鼠脾细胞转化的影响作为免疫指标 ,而选择
合适的 Con A浓度是观察血清对淋巴细胞转化抑制
作用的关键 。为此 ,本实验观察了应激大鼠血清对
不同浓度 Con A诱导的淋巴细胞转化的影响。
1　材料与方法
1.1　主要试剂　RPMI-1640培养液 、Con A 、四甲基
偶氮唑蓝(MTT)均购自 Sigma 公司 ,小牛血清(FBS)
购自中国医学科学院血清学研究所 , 二甲基亚砜
(DMSO)购自天津市泰兴试剂厂 。
1.2　实验动物　雄性SD大鼠 ,体重 250 ～ 270 g ,雄
性 BALB C小鼠 ,体重 18 ～ 20 g ,由河北医科大学实
验动物中心提供。
1.3　动物模型　将雄性 SD大鼠随机分成对照组和
实验组 ,每组 10只 ,整个实验过程饲养于24℃、光照
黑暗为 12 h∶12 h的环境中 ,经过 10d适应性饲养
后进行实验 ,对照组正常笼养 ,实验组进行不同强度
的刺激 ,热刺激 5 min ,夹尾 1 min , 40℃冰水游泳 5
min ,电刺激 30 min ,震荡 40 min ,每日一种刺激 ,交
替进行 ,连续 15 d[ 3] 。
1.4　淋巴细胞增殖实验　MTT 法[ 4] ,简述如下:脱
颈处死 ,分离正常小鼠脾淋巴细胞 ,以含 10%小牛
血清的 RPMI-1640培养液配制成细胞悬液 ,使细胞
终浓度为3×106 个细胞 ml ,加入Con A使其终浓度
分别为 10μg ml 、5μg ml 、2.5μg ml。加入 96孔培养
板 ,每个样本做 3个平行孔 ,并设无 Con A 对照孔 ,
·140· 白求恩军医学院学报(Journal of Bethune Military Medical Col lege)2003年 9月第 1卷第 3期
DOI :10.16485/j.issn.2095-7858.2003.03.006
置37℃、5%CO2 的培养箱中培养 48 h 。每孔加入
20 μl MTT(5 mg ml),继续培养 4h 后 ,离心去上清 ,
每孔加入 100 μl DMSO ,震荡 ,以酶标仪(MK-3)在
492 nm处检测吸光度。
1.5　数据分析　采用 t检验 ,结果以 x ±S x 表示。
2　结　果
应激结束后 ,分别取对照组和应激组大鼠血清 。
脱颈处死 BALB C小鼠 ,分离脾细胞 ,配制成 3×106
个细胞 ml的细胞悬液 ,加入不同浓度的 Con A ,观
察对照和应激大鼠血清(1∶20稀释)对 Con A诱导的
脾淋巴细胞转化作用的影响。结果显示 ,在 Con A
浓度为2.5μg ml和 5μg ml时 ,与对照组相比 ,实验
大鼠血清显著抑制小鼠脾淋巴细胞转化(P <0.
01 , n=6)。当 Con A浓度为 10 μg ml时 ,对照组与
应激组无显著性差异 ,而 Con A 浓度 0 μg ml时 ,淋
巴细胞几乎无增殖。
3　讨　论
已有的研究表明神经内分泌系统与免疫系统之
间存在着广泛的双向联系[ 5, 6] ,应激作为一种手段 ,
在研究神经内分泌系统与免疫系统间的紧密联系时
被广泛采用 。通过神经内分泌系统的作用 ,应激可
导致许多激素 、细胞因子 、神经肽和淋巴细胞转化抑
制因子[ 7] 等的释放来调节免疫功能。而应激后血清
对正常淋巴细胞转化的影响是上述诸多因素的综合
结果 。观察应激后血清对正常淋巴细胞转化的抑制
作用可大致反映外周免疫功能的改变。Con A是 T
细胞的促有丝分裂原 ,一般认为它通过与淋巴细胞
上的特异性受体结合 ,促进淋巴细胞的转化。选用
合适的 Con A浓度是影响血清对 Con A诱导的淋巴
细胞转化实验中的关键所在。本研究结果提示 ,应
激血清可抑制 Con A诱导下的淋巴细胞转化作用 ,
证明应激血清是促小鼠脾细胞转化的抑制剂 ,但不
同浓度的Con A对Con A诱导的脾淋巴细胞转化作
用的影响是不一样的。因为 Con A是促进转化而应
激血清是抑制转化 ,两者之间的比例关系适当才能
很好地反映研究中所验证的应激血清对细胞转化的
抑制作用 。本研究采用不同浓度的Con A加入到正
常小鼠脾细胞悬液中 ,结果显示实验组中 Con A的
浓度为 10μg ml时其诱导下的淋巴细胞转化与对照
组相比无显著的抑制作用 ,实验组中 Con A的浓度
为 2.5 ～ 5 μg ml时其诱导下的淋巴细胞转化与对照
组相比有显著的抑制作用(P <0.01),说明该浓度
是最适浓度 ,能最大程度地表现应激大鼠血清对淋
巴细胞转化的抑制作用 。
参考文献
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(收稿日期:2003-06-04)
(修回日期:2003-07-09)
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