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粉葛中总黄酮提取纯化方法研究
程建明 , 　吴　涓 , 　覃夏婵 , 　倪柳美 , 　刘晓燕
(南京中医药大学 ,江苏 南京 210046)
收稿日期:2006-11-12
作者简介:程建明(1965～ ),男 ,副研究员 ,研究方向:中药新制剂研究。
关键词:粉葛;总黄酮;提取纯化;正交实验
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)11-1679-02
　　粉葛为豆科(Leguminosae)植物甘葛藤 Puerariathomso-
niBenth.的干燥根。粉葛是临床常用中药 , 载于《神农本草
经》 ,性平 , 味甘 ,辛 , 具有解肌退热 ,生津止渴 , 透发斑疹的功
效。总黄酮为粉葛的主要活性成分 , 现代研究表明 , 粉葛总
黄酮能改善冠脉 , 降低血压 ,使冠脉血流量明显增加 ,对血管
平滑肌有明显的松弛作用 , 可降低外周阻力 , 对改善正常心
肌和缺血梗塞心肌的代谢均有良好的作用 ,还具有提高学习
记忆 , 抗氧化 ,抗癌等作用 [ 1 ～ 2]。 文献报道粉葛总黄酮的提
取纯化方法有乙醇回流法 , 大孔树脂法 [ 3～ 4] , 正丁醇萃取法
等 , 本试验以总黄酮得率为指标 , 对醇提正丁醇萃取 ,水提醇
沉 , 水提大孔树脂吸附 3种方法进行比较 ,优选出最佳提取
纯化方法 ,再以总黄酮保留率为指标 ,通过正交实验 [ 5]对最
佳提取方法进行优化 。
1　仪器与材料
UV-2401(日本岛津);BL-3200S电子天平(日本岛津);
AB-8型大孔吸附树脂(南开大学)。 葛根素对照品(供含量
测定用 , 批号:110752-200209中国药品生物制品检定所)。
粉葛购于安徽省亳州市药材总公司 ,经南京中医药大学吴启
南教授鉴定为豆科植物甘葛藤 PuerariathomsoniiBenth.的
干燥根。
2　粉葛提取方法的选择
2.1　醇提正丁醇萃取法
称取粉葛药材 300 g, 70%乙醇回流 3次 , 每次分别加 8
倍 、5倍 、 5倍量 70%乙醇 ,每次分别提取 2 h、1 h、1 h。 合并
提取液 , 减压回收乙醇得药液 150 mL, 用水饱和正丁醇萃取
4次 ,每次 200 mL, 合并正丁醇液 , 减压回收正丁醇 , 水浴蒸
干 , 最后 105℃烘干 , 称重 ,即得。
2.2　水提醇沉法
称取粉葛药材 300g, 水煎煮提取 2次 ,每次分别加水 10
倍 、8倍 , 每次分别提取 2 h、1.5 h。合并水提液 , 浓缩至 390
mL, 75%乙醇沉淀 , 放置一夜。抽滤 , 滤液水浴蒸干 , 最后
105℃烘干 ,称重 ,即得。
2.3　水提大孔树脂法吸附
称取粉葛药材 500 g,水煎煮提取 2次 , 每次分别加水 10
倍 、8倍 , 每次分别提取 2 h、 1.5 h。 合并水提液 , 浓缩至
1 000mL,离心 , 取上清液上 AB-8型大孔吸附树脂 , 控制流
速 3mL/min,先用蒸馏水洗至流出液色淡 , 再用 70%乙醇 [ 3]
洗脱至无葛根素(TLC检测无葛根素), 合并洗脱液 , 减压回
收乙醇 ,水浴蒸干 , 最后 105℃烘干 , 称重 ,即得。
2.4　样品总黄酮含量测定
2.4.1　葛根素对照品溶液的配制
精密称取葛根素对照品 3.17mg,置 10mL量瓶中 ,加乙
醇适量 ,超声 20min,再加乙醇至刻度 ,精密吸取 1 mL于 10
mL量瓶中 , 配成 31.7μg/mL作为储备液。再采用逐级稀释
法分别配成 6.34、3.17、0.634、0.317、0.1268μg/mL。
2.4.2　标准曲线的制备
以乙醇作为空白 ,在 250 nm波长处测以上对照品溶液
的吸收度 ,以葛根素浓度为横坐标 ,吸收度为纵坐标作图 ,并
进行回归处理 ,得标准曲线方程 y=0.061 1x+0.03 3 r=
0.999(线性范围:0.126 8 ～ 3.17 μg/mL)。
2.4.3　样品含量测定结果
精密称取以上 3种样品适量 , 分别置于 10 mL量瓶中 ,
加乙醇超声 20 min, 再加乙醇至刻度 , 精密吸取 1 mL于 25
mL量瓶中 , 加乙醇至刻度 ,混匀 , 在 250nm处紫外测定各吸
收度 ,按标准曲线计算 , 结果见表 1。
表 1　不同提取纯化方法制备的总黄酮含量测定结果
方法 浸膏得率 /% 总黄酮得率 /% 总黄酮纯度 /%
醇提正丁醇萃取法 4.96 3.23 65.08
水提醇沉法 12.47 5.39 43.26
大孔树脂法 8.62 7.50 86.96
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第 29卷　第 11期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
November2007
Vol.29　No.11
　　通过对浸膏得率(%)、总黄酮得率(%)、总黄酮纯度
(%)等考察指标的综合分析 , 结果表明大孔树脂方法最好。
3　大孔树脂方法的优选
3.1　大孔树脂洗脱剂乙醇浓度的选择
取粉葛水煎浓缩液 3份 , 分别上 AB-8型大孔吸附树脂 ,
控制流速 3 mL/min, 先用蒸馏水洗至流出液色淡 , 再分别用
10倍柱体积 30%、 50%、70%乙醇洗脱 ,分别收集洗脱液 , 以
总黄酮保留率为指标 , 在 250nm处紫外测定各吸收度 , 按标
准曲线计算 , 结果见表 2。
表 2　不同洗脱剂乙醇浓度得到的总黄酮含量测定结果
乙醇洗脱剂 /% 总黄酮保留率 /%
30 86.99
50 87.71
70 91.13
　　实验结果表明 , 70%乙醇作洗脱剂为宜。
3.2　大孔树脂方法正交设计
　　以药液上样浓度(g/mL), 洗脱速率(mL/min), 乙醇用
量(倍柱体积)为考察因素(每一个因素设 3个水平), 以总
黄酮保留率为指标 ,按 L9(34)正交表进行正交试验 , 见表 3。
表 3　 因素水平表
水平
因素
上样浓度 /g/mL
A
洗脱速率 /mL/min
B
乙醇用量 /倍柱体积
C
1 0.5 1 4
2 1 2 6
3 2 3 8
3.3　大孔树脂实验方法与结果
取粉葛水煎浓缩液 9份 ,按表 3分别上AB-8型大孔吸附树
脂,分别收集洗脱液,在 250 nm处紫外测定各吸收度, 按标准曲
线计算,结果见表 4、5。
表 4　 L9(34)实验安排及实验结果
序号 上样浓度 A/g/mL 洗脱速率 B/mL/min 乙醇用量C(倍柱体积) 空白 总黄酮保留率 /%
1 1 1 1 1 91.98
2 1 2 2 2 92.56
3 1 3 3 3 91.44
4 2 1 2 3 94.58
5 2 2 3 1 93.46
6 2 3 1 2 91.13
7 3 1 3 2 90.48
8 3 2 1 3 77.40
9 3 3 2 1 84.09
K1 275.98 277.04 260.51 269.53
K2 279.17 263.43 271.23 274.17
K3 251.97 266.66 275.38 263.42
R 27.20 13.62 14.87 10.75
表 5　 方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 F 显著性
A 147.45 2 73.72 7.61 P>0.05
B 33.78 2 16.89 1.74 P>0.05
C 39.28 2 19.64 2.03 P>0.05
误差 19.37 2 9.69
　　＊F0.05 =19.00＊＊F0.01 =99
　　由方差分析表可知 , 3个因素均无显著差异 ,由直观分析
表可知 , 最佳工艺为 A2B1C3 , 即 1 g/mL药液浓度上样 , 8倍
柱体积 70%乙醇洗脱 , 洗脱速率为 1 mL/min。
4　验证实验
称取粉葛药材 5 kg按最佳艺条件进行制备 , 见表 6, 结
果较好。
表 6　 验证实验结果
实验号 浸膏得率 /%
总黄酮
得率 /%
总黄酮
纯度 /%
总黄酮
保留率 /%
1 8.88 7.98 89.86 94.92
2 8.92 7.90 88.57 94.60
3 8.82 7.89 89.46 94.48
5　小结与讨论
5.1　本实验以葛根素为对照品 , 用紫外分光光度法测定粉
葛总黄酮含量方法可行 ,操作简便。
5.2　水提醇沉法的浸膏得率虽然最高 ,但总黄酮得率和纯
度均没有大孔树脂法高 ,故不宜作为最佳方法。
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