全 文 ：2013年 第14卷 第3期0 4 5 1
［基金项目］浙江省中医药管理局青年教师资助项目（2010ZQ001）；国家自然科学基金青年基金项目（81202926）；浙江省科技厅现代中药制剂
及其重点关键技术研究科技创新团队资助项目（2012R10044-09）
［作者简介］刘会，硕士研究生，E-mail：liuhui.cute@163.com
［通讯作者］熊阳，Email：xyxnb@126.com
农吉利碱凝胶剂的质量评价及初步稳定性研究
刘 会 1，章德军 2，黄绳武 1，熊 阳 1
（1.浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053； 2.浙江大学医学院附属儿童医院，浙江 杭州 310003）
摘要 目的：建立农吉利碱凝胶剂质量标准，并进行初步稳定性考察。方法：通过含量测定、体外透皮试验、初步稳定性
考察对农吉利碱凝胶剂进行综合评价。结果：农吉利碱在 1.6 μg/mL~102.4 μg/mL的浓度范围内线性关系良好，平均回收率
为 100.75%，RSD为 0.82%（n=6）。结论：建立的质量评价方法专属性良好，准确可靠，能有效控制农吉利碱凝胶剂的质量。
关键词 农吉利碱凝胶剂；质量评价；初步稳定性
中图分类号：R927.11文献标识码：Ａ 文章编号：1671-0258（2014）01-0023-03
Quality assessment and preliminary study on stability of monocrotaline gel
Liu Hui1，Zhang Dejun2，Huang Shengwu1，Xiong Yang1
（1.School of Pharmacy，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053；2.The Childrens Hospital Affiliated to
Zhejiang University of Medicine，Hangzhou Zhejiang 310003）
Abstract Objective：To establish quality standards of monocrotaline gel and conduct preliminary stability test. Methods：
Comprehensive evaluation on monocrotaline gel was underwent through content determination，diadermic test and prelimi－
nary stability test. Result：Monocrotaline had good linearity in the range of 1.6 μg/mL~102.4 μg/mL. The average recovery
rate was 100.75% and RSD was 0.82%（n=6）. Conclusion：The method of quality evaluation established is specific，accu－
rate and reliable，and can effectively control the quality of monocrotaline gel.
Key words monocrotaline gel；quality evaluation；preliminary stability
农吉利碱（Monocrotaline/ Crotaline），是一种活性
的烷基化成分，是临床常用、试验研究较多、研究较为
透彻的抗癌中药成分，能干扰细胞的有丝分裂而具有
抗肿瘤作用。农吉利碱对多种实验性肿瘤有抑制作
用，临床主要试用于鳞状细胞癌和基底细胞癌，疗效
确切［1-3］。据报道，农吉利碱靠形成化学键的方式与癌
细胞蛋白质或血清蛋白质形成大分子复合物［2］。但是，
农吉利碱若被吸收进入体循环具有非常明显的毒性，
对肝脏具有蓄积的、不可逆的、强烈的毒性作用，可引
起肝细胞出血性坏死、肝巨细胞症及静脉闭塞症等［3-4］。
民间常用农吉利鲜草浆或干品粉末外敷用于治疗鳞
状细胞癌（SCC）和基底细胞癌（BCC），毒性小并且效
果良好［5-6］。凝胶剂是常用的经皮给药剂型，具有吸收
速度快、生物利用度高、良好的生物相容性、质地均
匀、易于涂展和洗除、皮肤给药不妨碍皮肤正常功能
等特点［4］。为了确保该制剂的有效性和安全性，对所制
备的农吉利碱凝胶剂进行了质量评价和稳定性研究。
1 实验材料
HPLC工作站（德国 LUMTECH制备型高效液相
色谱仪系统，LUMTECH化学工作站，K501泵，K2501
紫外检测器），JA1003电子天平，KQ5200DE型数控超
声波清洗器，YB-P6智能透皮仪试验仪，YXJ-2型高
速离心机，NDJ-1旋转黏度计。农吉利碱原料药（纯
度≥98%，批号：ZL120222YY，南京泽朗医药科技有
限公司）；农吉利碱凝胶剂（自制）；甲醇为色谱纯，蒸
馏水自制，其他试剂为分析纯。
2 方 法
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液配制 精密称取农吉利碱 8.0 mg，
置于 50 mL容量瓶中，加适量流动相超声使溶解，加
流动相定容至刻度，摇匀，作为农吉利碱储备液，备
用。精密移取 1.6 mL置于 5 mL容量瓶中，加流动相
定容至刻度，摇匀，作为农吉利碱对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液配制 取农吉利碱凝胶剂 0.1 g，
精密称定，置于 5 mL容量瓶中，加流动相超声使溶解
并定容至刻度，摇匀，作为农吉利碱凝胶剂溶液。
2.1.3 空白溶液配制 取空白凝胶剂 0.1 g，精密称
定，置于 5 mL容量瓶中，加流动相超声使溶解并定容
中药制剂工程与技术
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2013 Vol.14 No.314 Vol.15 No.1
至刻度，摇匀，作为空白凝胶溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱：Ultimate TM C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），
流动相：甲醇-0.5%三乙胺水溶液（pH 7.0）（30∶70）；检
测波长：216 nm；柱温：30 ℃；流速：0.8 mL/min；进样
量：20 μL。
2.3 方法专属性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液和空白溶液，分
别用 0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液
分别按照上述色谱条件进样，记录色谱图。结果表明，
农吉利碱的色谱峰与相邻的色谱峰能很好地分离，空
白凝胶溶液在相应的保留时间下无色谱峰，凝胶剂中
的各辅料不干扰药物的测定，该方法可用于农吉利碱
凝胶剂的定量分析。
2.4 标准曲线的绘制
分别移取不同体积的上述储备液配制成浓度为
1.6 μg/mL、3.2 μg/mL、6.4 μg/mL、12.8 μg/mL、25.6 μg/mL、
51.2 μg/mL、102.4 μg/mL的系列标准溶液，用 0.45 μm
微孔滤膜过滤，按上述色谱条件分别进样，记录色谱
图峰面积。以农吉利碱标准溶液浓度为横坐标，峰面
积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，其回归
方程为：y=6.405 9x+4.760 5，r=0.999 8，结果表明，农
吉利碱在 1.6 μg/mL~102.4 μg/mL的浓度范围内线性
关系良好。
2.5 精密度试验
精密移取上述母液 1.6 mL置于 5 mL容量瓶中，
加流动相定容至刻度，摇匀，过滤，按上述色谱条件，
连续测定 6次，日内精密度为 0.605%。每日同法测定
1次，记录色谱图峰面积，日间精密度为 1.31%，结果
表明该方法精密度良好。
2.6 稳定性试验
取空白凝胶剂 0.1 g，精密称定，置于 5 mL容量
瓶中，加流动相超声使溶解并定容至刻度，按上述色
谱条件进样，于配制后 24 h内测定 6次，峰面积的
RSD值为 1.25%，表明该方法稳定性良好。
2.7 重复性试验
按照上述 2.6稳定性试验项下方法平行制备样
品溶液 6份，进样，记录峰面积并计算含量，结果样品
重复性 RSD为 1.55%，表明本方法重现性良好。
2.8 加样回收率试验
精密称定已知含量的农吉利碱凝胶剂 6份，分别
加入一定量的对照品溶液，置于 25 mL容量瓶中，加
流动相超声使溶解并定容至刻度，过滤，按上述色谱
条件分别进样，记录色谱图峰面积，根据回归方程计
算出相应浓度和含量，并计算回收率、平均回收率及
RSD。结果见表 1。
2.9 农吉利碱凝胶剂体外透皮试验方法的建立
取 200 g左右雄性大鼠，用剪刀仔细剪去腹部皮
肤上的毛，尾静脉注射空气处死，并将腹部皮肤剥离，
用镊子仔细去除皮下脂肪及筋膜后洗净，置于生理盐
水中。在透皮制剂研究中主要利用透皮扩散池模拟药
物在体透皮过程，用来测定药物的释药性质并筛选处
方［5］。试验装置采用立式 Franz扩散池［6-7］，处理好的
大鼠皮肤角质层向上固定在 Franz扩散池上，在角质
层一面均匀涂上农吉利碱外用凝胶约 2 g，在接受池
中加入生理盐水 17 mL做接收液［8-9］。将扩散池置 32 ℃
恒温水浴中，搅拌速度 300 r/min，分别在 1 h、2 h、4 h、
8 h、12 h、24 h 取样 3 mL，并补充同温度同体积生理
盐水［10］。所取样品用 0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤
液，测定透皮接收液中农吉利碱的含量，按下式计算
出一定时间单位面积的累积透过量。
Qs= Cn×V0+
i→n
i→1
ΣCi×× ×V /S［11］
Qs：第 n次取样时单位面积累积渗透量；Cn：第 n
次取样时接受液中的浓度；Ci：第 i次取样时接受液中
的浓度；V0：扩散池体积；V：取样体积；S：扩散面积。
3 结 果
3.1 检 查
3.1.1 外观性状 3批凝胶剂均为白色、半透明、凝
胶状、半固体物质，外观均匀细腻，有较好的涂布性。
在常温下放置不变色，保持胶状，不干涸或液化，无相
分离、无异臭等各种变质现象。
3.1.2 酸碱度 取 3批样品各 5.0 g，分别加入 50 mL
蒸馏水，超声处理 30 min，室温放置，过滤，按照 2010
版《中国药典》（二部）附录Ⅵ H pH值测定法测定溶
液 pH值。3批样品的 pH平均值为 7.17。
3.1.3 离心稳定性试验 取 3批样品各 3.0 g，置于离心
试管中，3 000 r/min条件下，离心 30 min，凝胶未分层。
3.1.4 黏度 皮肤用制剂对黏度有一定的要求，应用黏
度计测定农吉利碱凝胶剂的黏度。按 2010年版《中国药
典》（二部）附录 VIG黏度测定法第二法，室温下用旋转
次数
样品中农
吉利碱的
量（μg）
加入农吉
利碱的量
（μg）
测得总农
吉利碱的
量（μg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
(%)
1
23.05
80.00 104.19 101.43
100.75±0.82 0.82
2 80.00 103.30 100.31
3 80.00 103.91 101.08
4 80.00 103.59 100.68
5 80.00 103.90 101.63
6 80.00 102.56 99.39
表 1 加样回收率试验结果 （n=6）
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黏度计测定 3批凝胶剂的黏度，平均黏度为 40.5 Pa·S。
3.2 含量测定
取农吉利碱凝胶剂 3批，照 2.1.2项下供试品溶液
制备方法平行制备样品溶液，按上述色谱条件进样，记
录色谱图峰面积，根据标准曲线计算浓度，测定凝胶剂
的含量。3批样品含量均不低于 1.2 mg/g，结果见表 2。
3.3 体外透皮试验
按照优化好的处方制备农吉利碱外用凝胶，并按
照 2.9项下体外经皮渗透试验方法，测定凝胶 24 h单
位面积累积释放量。结果见表 3。
3.4 初步稳定性研究
3.4.1 影响因素试验
3.4.1.1 高温试验 将农吉利碱凝胶剂放在密闭器
皿中，置于 60 ℃条件下放置 10 d，于第 0天、第 1天、
第 5天、第 10天取样，测定含量，与第 0天的样品进
行比较，结果表明含量无明显变化。
3.4.1.2 高湿试验 将农吉利碱凝胶剂放在密闭器
皿中，在 25 ℃，湿度为 92.5%条件下放置 10 d，于第 0
天 、第 1天 、第 5天、第 10天取样，测定含量，与第 0
天的样品进行比较，结果表明含量无明显变化。
3.4.1.3 光照试验 将农吉利碱凝胶剂样品在 4 000 lx
光照下分别放置 10 d，第 0天、1天、第 5天、第 10天
取样，测定含量，与第 0天的样品进行比较，结果表明
在光照实验条件下含量无明显变化。
3.4.2 加速试验 采用模拟上市包装（铝制软管，外
包纸盒）将制得的 3批样品于 37 ℃~40 ℃、RH75%±
5%条件下放置 3个月，在试验期间第 1个月、第 2个
月、第 3个月分别取样，进行含量测定，结果表明含量
在 3个月的存放过程中无明显变化。
3.4.3 常温试验 采用模拟上市包装（铝制软管，外
包纸盒）将制得的 3批样品于室温条件下放置 3个
月，在试验期间第 1个月、第 2个月、第 3个月分别取
样，进行含量测定，与第 0个月比较，结果表明含量在
3个月的存放过程中无明显变化。
4 讨 论
在建立液相方法学的过程中，根据文献用色谱甲
醇配制对照品溶液，经液相测定，发现在较低浓度的
储备液浓度下，在其相应保留时间下出现负峰，需较
高浓度才能出峰。原因可能是农吉利碱的最大吸收波
长为 216 nm［12］，比较靠近甲醇的末端吸收［13］，导致甲
醇干扰了农吉利碱的出峰。后调整对照品溶液的配置
方法，改用流动相作为溶剂配置，结果表明，农吉利碱
在极低浓度下也能被准确测定。
本实验分别从外观性状、pH值、离心试验、黏度、
含量测定、体外透皮释药实验等方面对农吉利碱凝胶
剂进行了性质考察，结果表明，制备的农吉利碱凝胶
外观均匀，呈半透明，易于涂布，性质稳定，具有良好
的体外透皮释药性能，适合作为经皮给药制剂。
表 2 含量测定结果 （n=3）
批号 含量（mg/g） 均值（mg/g） RSD（%）
20121120
1.204
1.202 0.171.203
1.200
20121124
1.212
1.209 0.221.207
1.208
20121129
1.202
1.203 0.081.204
1.203
表 3 体外透皮试验结果 （n=5）
批号 24 h单位面积累积释放量（μg/cm2） RSD（%）
20121120 401.827±5.841 1.94
20121124 368.159±3.932 1.28
20121129 386.318±1.843 0.67
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（编辑：梁葆朱）
中药制剂工程与技术
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