全 文 ：麻黄连翘赤小豆汤血清对肥大细胞脱颗粒 、组胺生成的影响
邱明义　李小慧　石　拓　范　恒　牛璐芳
(湖北中医学院　武昌　430061)
　　提　要　本文用含药血清体外作用于大鼠腹腔肥大细胞引起脱颗粒及组织胺释放为指标 , 观察了麻黄连翘赤小豆汤对 Ⅰ型
变态反应的影响 ,结果含该方大鼠血清可明显减少肥大细胞脱颗粒 ,减少组织胺释放。
　　关键词　麻黄连翘赤小豆汤;肥大细胞;组胺;血清药理学
　　麻黄连翘赤小豆汤在临床上多用于治疗荨麻疹 、湿疹 、过
敏性哮喘等过敏性疾病 ,本实验拟用肥大细胞脱颗粒实验观察
该方对肥大细胞脱颗粒及组胺释放的影响 ,初步分析麻黄连翘
赤小豆汤抗变态反应的作用机理。
1　材料和方法
1.1　试验药物与试剂　麻黄连翘赤小豆汤(麻黄二两(现用
6g)、连翘二两(现用 6g)、杏仁四十个(现用 7g)、桑白皮二两(现
用24g)、赤小豆一升(现用 20g)、大枣十二枚(现用10g)、生姜二
两(现用 6g)、甘草二两(现用 6g))生药购于湖北中医学院附属
医院 ,煎煮浓缩后 , 用蒸馏水配制成浓度为 500%的药液 , 灭菌 ,
4℃保存。原方中的连轺 、生梓白皮现多不用 ,常以连翘 、桑白皮
代替 ,本实验亦是如此。地塞米松(江苏兴化制药厂 ,生产批号:
970273),使用前用生理盐水配成 0.18mg/ml混悬液。 卵白蛋
白(Sigma产品分装 , 批号:2700301)、百日咳疫苗(湖北生物制
品有限公司)、组织胺标准品(中国药品生物制品鉴定所产品)。
1.2　动物　Wistar大鼠 36 只 ,雌雄各半 ,体重 200±20g , 由华中
科技大学同济医学院实验动物学部提供 ,动物购回后均在湖北中
医学院伤寒学科实验室动物房饲养 ,室温 23±1℃,检疫 1周后,
确认为健康动物。动物饮用自来水 ,饲以标准颗粒饲料。实验共
分6 组:①空白对照组 、②模型对照组、③空白血清组 、④5%中药
血清组 、⑤10%中药血清组 、⑥地塞米松血清组 ,每组 6只。
1.3　仪器　日立 B-F510 荧光分光光度计(日本)、GL-20G-Ⅱ
冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)、BX-60 型 Olympus 光学显
微镜(日本)
1.4　麻黄连翘赤小豆汤的含药血清的制备及检测
1.4.1　含药血清的制备　每组各取大鼠 5 只 , 灌服中药 2ml/
100g或等剂量的生理盐水 ,灌胃前 12h ,禁食不禁水 ,每天 2 次 ,
连续 3天 , 末次灌药后 1h , 门静脉取血 , 分离血清。地塞米松灌
胃 2ml/ 100g 后两小时 ,门静脉取血 ,分离血清。 所取血清均经
56℃30min灭活处理后 , -70℃冻存备用。
1.4.2　血清中药物含量的定性检测:采用气相色谱法进行检
测。
1.5　大鼠主动肥大细胞脱颗粒实验
　　大鼠致敏并制备腹膜肥大细胞(peritoneal mast cells PMC)
悬液 ,按下表步骤进行大鼠主动肥大细胞脱颗粒实验。
组别 致敏肥大细胞悬液 THG 液 抗原① 含药血清
正常 0.5ml 1ml
模型 0.5ml 0.75ml 0.25ml
空白血清 0.5ml 0.6ml 0.25ml 0.15ml
5%中药血清 0.5ml 0.675ml 0.25ml 0.075ml
10%中药血清 0.5ml 0.6ml 0.25ml 0.15ml
地塞米松血清 0.5ml 0.6ml 0.25ml 0.15ml
　　① 1%卵蛋白生理盐水溶液
　　取出试管 ,离心 , 吸取上清备用。 吸取试管底部肥大细胞 ,
滴 1、2 滴于中性红染色的载玻片上。高倍镜下观察肥大细胞脱
颗粒情况 ,每张片子查看 60 个细胞。正常肥大细胞为圆形 , 核
不着色 ,细胞内有均匀分布的石榴红色颗粒。若颗粒自细胞膜
内向外流出 , 颗粒褪色和出现空泡者为阳性 , 60 个细胞中 1/3
有此变化为(+), 1/ 3 ～ 2/3 有上述变化者为(++), 2/ 3以上者
为(+++),此为等级资料 , 并按等级序值法测定其等级序值。
1.6　上清液中组胺释放率的测定　用荧光法测定上清中组织
胺的含量[ 1] 。利用 OPTON 荧光分光光度计于激发波 360nm 、
荧光波长 450nm 测定荧光强度。依据荧光强度计算上清液中
组胺的释放情况。
　　上清液中组织胺释放率=T 样品-T 样品空白
T 标准-T 标准空白×%
　　其中 , T 为每管所测得的荧光值。
2　结果
2.1　含药血清检测结果　在相同的条件下麻黄碱标准品与含
药血清样品在第 18 分钟左右出现了相同的色谱峰 ,而空白血清
样品却未发现相同的色谱峰。
2.2　各组大白鼠肥大细胞脱颗粒情况　见表 1。
　　表 1　麻黄连翘赤小豆汤对肥大细胞脱颗粒的影响
组别 n 肥大细胞脱颗粒+ Ridit分析值
正常 6 5 1 0 0.319
模型 6 0 0 6 0.9571
空白血清 6 0 1 5 0.9143
5%中药血清 6 2 3 1 0.5905＊■
10%中药血清 6 5 0 1 0.3619＊＊■
地塞米松血清 6 5 0 0 0.2429＊＊■■
　　与模型组比较 ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;与空白血清组比较 ■ P
<0.05, ■■ P<0.01
2.3　各组大白鼠肥大细胞释放组胺情况　见表 2。
　　表 2　麻黄连翘赤小豆汤对组胺释放的影响( x ±s)
组别 n 组胺释放率(%)
正常 6 5.62±0.43
模型 6 12.32±0.50
空白血清 6 11.88±0.52
5%中药血清 6 8.65±0.23＊■
10%中药血清 6 5.67±0.18＊＊■■
地塞米松血清 6 6.02±0.22＊＊■■
3　讨论
　　用气相色谱法对含药血清麻黄碱进行了定性检测 , 结果含
3中药药理与临床 2003;19(5)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2003.05.002
药血清样品与标准品在第 18 分钟左右出现了相同的色谱峰 , 而
在同一条件下 ,空白血清样品却未发现相同的色谱峰 , 说明了
大鼠灌服麻黄连翘赤小豆汤后 , 该中药的确被胃肠吸收 , 并进
入了血液中。
　　肥大细胞脱颗粒释放介质是造成Ⅰ 型变态反应免疫损伤 ,
导致临床病症的直接因素。肥大细胞参与变态反应多发生在
皮肤或粘膜的表面[ 2 ～ 4] 。肥大细胞膜表面有大量 IgE FCR , I gE
与 FCR高亲和力结合;当再次接触相同的变应原 , 该变应原可
与肥大细胞膜表面的 IgE结合 ,从而使膜相邻近的 FCR发生相
互连接(桥联);桥联后触发细胞膜一系列的生物化学反应 , 胞
外 Ca2+流入胞内 ,导致肥大细胞脱颗粒 , 释放的炎性介质 ,立即
直接作用于靶细胞 、靶组织 、靶器官 ,迅速引起一系列的临床症
状。
　　组胺主要存在于肥大细胞中 , 因其释放量大且早 , 故被认
为是Ⅰ型变态反应中的最重要的炎性介质。 当肥大细胞受刺
激后 , 发生脱颗粒 , 释放组胺 , 可以导致平滑肌收缩 , 黏液分泌
亢进 、血管通透性增加 , 炎性分泌物增多以及气道高反应。 我
们采用组织胺荧光测定法测定麻黄连翘赤小豆汤药物血清对
大鼠腹腔肥大细胞间接释放组胺的影响。该法是利用组织胺
可与邻苯二甲醛(OPT)发生缩合反应 , 生成带有荧光的缩合物
的原理 ,先将组织胺提取到正丁醇中 , 然后在荧光比色计上测
定。
　　近年关于中药抑制肥大细胞脱颗粒有大量的报道[ 5 ～ 7] 。
我们的实验结果发现:经抗原刺激后 , 模型组及空白血清组大
鼠组织胺释放率与正常组相比较有明显升高。 10%麻黄连翘
赤小豆汤血清组组胺释放率明显低于模型组。 10%麻黄连翘
赤小豆汤血清组的脱颗粒的肥大细胞数减少;5%中药血清组
虽也能降低组胺的释放量 , 减少肥大细胞脱颗粒数 , 但其作用
较 10%中药血清组弱。 10%中药血清组的作用与地塞米松血
清组的作用相当。实验结果表明 , 随用药剂量的增加 , 麻黄连
翘赤小豆汤抑制肥大细胞脱颗粒 , 减少组胺的释放功能加强。
说明麻黄连翘赤小豆汤确有保护肥大细胞 , 抑制组胺释放 , 从
而抗Ⅰ型变态反应的作用。
参考文献
1　马建吟 ,等.大鼠肥大细胞组胺释放试验及方法学的探讨.南京医
学院学报 , 1989;9(4)∶262～ 263
2　Galli SJ.Biology of disease:new insight into“ the riddle of the mast
cell” :microenvi ronmental regulation of mast cell development and phenotype
heterogeneity.Lab invest , 1990;62∶5～ 33
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5　金亚宏 ,曹秀芳 ,李兰芳 ,等.茵陈五苓散抗变态反应作用研究.中
国实验方剂学杂志 , 1999;5(2)∶49～ 50
6　余传星 ,朱　玲.藿香正气口服液抗肥大细胞脱颗粒的机制探讨.
中成药, 2002;24(2)∶17
7　李仪奎 ,吴健宇 ,吴晓芬 ,等.小青龙汤药物血清对致敏大鼠腹腔肥
大细胞脱颗粒以及组织胺释放的影响.中国中西医结合杂志 , 2000;20
(1)∶40～ 42
定志小丸对不同模型鼠学习记忆功能的影响
瞿　融　马世平1　夏卫军　詹　莹1
(南京中医药大学　南京　210029 , 1 中国药科大学)
　　提　要　目的:研究定志小丸对不同模型鼠学习记忆功能的影响。方法:用东莨菪碱 、亚硝酸钠 、乙醇分别造成小鼠获得性 、
巩固性和再现性记忆缺损 , D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠 、自然老龄小鼠和大鼠学习记忆功能低下等模型 , 采取跳台法和电迷宫法
观察定志小丸的改善作用。结果:定志小丸对化学药物所致小鼠学习记忆障碍模型有明显的改善作用 , 对 D-半乳糖所致亚急性衰
老小鼠学习记忆功能减退和老龄鼠学习记忆功能低下均有明显的增强作用 。结论:定志小丸可能通过多环节 、多途径改善记忆损
伤模型动物和衰老模型动物的学习记忆功能。
　　关键词　定志小丸;动物模型;学习记忆;老年痴呆
　　定志小丸源于《备急千金要方》 ,由人参 、茯苓 、菖蒲 、远志等
组成 ,原治“心气不定 ,五脏不足 , 甚者忧愁悲伤不乐 ,忽忽喜忘 ,
朝差暮剧 , 暮差朝发狂眩” 。目前治疗老年痴呆的众多方剂所
用药物出现频率最高的也是这四味药 , 可以说 , 该方实际上是
临床用于改善或治疗以记忆障碍为早期临床表现的老年痴呆
的最常用最基础的方剂之一[ 1 , 2] 。鉴此 , 本文探讨了定志小丸
对记忆损伤模型动物和衰老模型动物学习记忆功能的改善作
用。
1　材料
1.1　试验药物　定志小丸方中各药材均购于南京药业股份有
限公司 ,并经本校中药分析教研室王强教授鉴定 , 分别为人参
Panax ginseng C.A.Meyer、远志 Po lygala tenuifolia Willd.、石菖
蒲 Aco rus gramineus Soland.、茯苓 Poria coco s(Schw.)Wolf。按
原方用量比例 ,提取浓缩而成 , 得率 24%(实验所用剂量均以该
粉末计), 实验前用蒸馏水混悬成不同浓度。尼莫地平 , 由中国
药科大学制剂教研室提供。
1.2　试剂　氢溴酸东莨菪碱注射液 , 上海禾丰制药有限公司产
品 ,批号 971001;亚硝酸钠 ,南京化学试剂厂产品 , 批号 970203;
无水乙醇 , 南京化学试剂厂产品 ,批号 960207;D-半乳糖 , 上海
试剂二厂产品 ,批号 921212。
1.3　动物　昆明种小鼠 , 18 ～ 20g , 4 周龄 ,雌雄兼用 , 由中国药
4 中药药理与临床 2003;19(5)
江苏省科学技术厅社会发展基金项目 ,项目批准号:BS2000090